Benemérita Universidad Autónoma de Puebla

Facultad de Ciencias Químicas

Licenciatura en Químico Farmacobiólogo

Laboratorio de Bioquímica II
Dra. Laura Morales Lara
Miércoles 10am - 12pm

Práctica #3:
¨Determinación de la actividad de la enzima succinato
deshidrogenasa¨

Jiménez Sánchez Evelyn Uzzmany

Fecha de entrega: 25 de Agosto del 2021
Semestre V
Otoño 2021
 Benemérita Universidad Autónoma de Puebla
Facultad de Ciencias Químicas
Licenciatura en Químico Farmacobiólogo

¨Determinación de la actividad de la enzima succinato

deshidrogenasa¨
1.Investigar las características funcionales y estructurales de la Succinato Deshidrogenasa.
La succinato deshidrogenasa es un complejo enzimático encontrada en la membrana
interna de la mitocondria el cual es involucrado en la respiración celular, específicamente
en el ciclo de Krebs en la conversión del succinato a fumarato por con ayuda de FAD+ a
través de una reacción de oxidorreducción. De manera simultánea, al estar unida a la
ubiquinona a ubiquinol. Este complejo (II) forma parte de los cinco complejos involucrados
para la respiración celular.
Este complejo se encuentra integrado por 4 subunidades, en donde estas subunidades se
pueden identificar aquellas que són hidrofílicas, encontradas en el interior de la membrana
interna mitocondrial; y una parte hidrofóbica, encontrada en el tnasversal hacia el exterior
de la membrana.

Iniciando con las subunidades hidrofílicas,

encontramos a SDHA. En el encontramos el
mecanismo catalítico, el cual se encuentra
adherido FAD+ para poder oxidar el succinato
(remarcando que es un compuesto alcano, por
el cual de FAD+ logra oxidarlo). Despúes de
ello, tenemos la SDHB, en el cual encontramos
clusters de Fe-S. Estos clusters toman los
electrones que fueron unidos al FADH para
iniciar una cadena de reacciones
oxidorectoctoras entre estos clústeres.
El primer cluster esa compuesto por Fe2S2, el
segundo Fe4S4 y el tercero Fe3S4, llevando a
través de ellos e transporte de los electrones
hacia las subunidades hidrofóbicas.
Imagen 1. Estructura de succinato deshidrigenasa.
Obtenido de https://www.researchgate.net/figure/Structure-of-succinate-dehydrogenase-20-The-enzyme-is-
conserved-through-evolution-and_fig1_281167488

Subiendo hacia estas subunidades transmembranales, encontramos la SDH3 y la SDH4,

las cuales están unidas por una molécula de hemo b en su interfase, el cual también reserva
una molécula de ubiquinona, al cual se reduce de Q a QH2 (ubiquinol), siendo este el
siguiente transportador de electrones hasta el complejo III a través de la membrana
mitocondrial.
2.Investigar su papel en el metabolismo.
Como ya he mencionado, esta enzima se encarga de la oxidación del succionato
deshidrogenasa, integrando una parte del ciclo de Krebs para la desintegración de la
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glucosa para la formación de energía, donde esta reacción también contribuye a la
obtención de ATP, en ella produciendo tres moléculas. De igual manera, proporciona los
electrones para ser utilizados en el complejo III y poder reducir el O2 y formar agua. De igual
manera, al estar estos electrones en ubiquinol, puede lograr reducir los aniones superóxidos
generados durante la respiración celular. Cabe recalcar que para que se pueda sintetizar
las tres moléculas se necesita un gradiente electrónico a través de la membrana
mitocondrial, por ello, los electrones otorgados por el succinato logra llevar a cabo esta
reacción.
Sin embargo, en presencia de oxalacetato y al unirse al sitio de acción, inhibe la actividad
de la misma y no se produce reacción alguna. Por ello, se puede decir que see encuentra
regulado por el mismo, así como por parte de la fosforilación y la acetilación.
Se han diagnosticado diversos trastornos y enfermedades relacionadas a mutaciones
localizadas en sus subunidades. Por ejemplo, puede producir encefalopatías o lo que han
nombrado los expertos como trastorno de la cadena respiratoria mitocondrial,
manifestándose de manera física como deficiencia en el desarrollo lingüístico, cuadriplejia
espástica, contracciones musculares involuntarias (distonía), debilidad muscular y
miocardiopatías.
3.Escribir la reacción que cataliza y describir apropiadamente, considerando su valor de
cambio de energía libre de Gibbs (así como su significado).

Imagen 2 y 3. Izq. Reacción de oxidación del succinato. Obtenida de

https://es.slideshare.net/mafhezita1/enzima-succinato-deshidrogenasa-48249242.
Der. Reacción de NADH en glucolisis. Obtenido de https://www.bionova.org.es/biocast/tema16.htm

Como notamos en la imagen del izquierdo, podemos ver de qué carbonos se logra oxidar
el succinato y con ello, poder convertirlo a fumarato con presencia de FAD+. Sin embargo,
vemos que la energía de Gibbs libre para esta reacción es 0 kJ/mol. Eto significa que hay
un equilibrio entre la energía necesaria para su realización y la energía que esta desprende
al realizarse, siendo este reversible en la misma magnitud en cualquier sentido.
4.Identificar y describir el papel distinto del NADH y FADH para participar en reacciones de
óxido-reducción.
Para esta reacción, observamos que para la oxidación del succinato se utiliza FAD+ como
cofactor para realizar la reacción redox, esto es puesto que este es más afin a reducirse
ante la presencia de alcanos, esto porque esta reacción es lo suficientemente exergónica
para reducirlo gracias a la deshidrogenación al fumarato, convirtiéndolo en un compuesto
alqueno.
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En el caso de NAD+, este compuesto es más afín a estructuras con grupos alcoholes
convertirlo en aldehídos o cetonas, la energía requerida con aquella respalda la energía
para que se realice.

5.Investigar qué indica el valor de Potencial de Óxido-Reducción de un par redox.

Para poder determinar si una reacción se realizará de manera espontánea, se debe
observar el valor del potencial de óxido-reducción. Este potencial se refiere al valor de
actividad de os electrones involucrados en una reacción redox en comparación de un
potencial referencia. Si este valor es negativo, se refiere a una reducción, si este tiene un
valor positivo, se refiere a una oxidación.
Este potencial de reacción redox por parte de un par. Sin embargo, en este caso, a
tempertura y presión constantes, podemos decir que la energía química es equivalente a la
energía de Gibbs libre (G).
6.Investigar los valores de Potencial de Óxido-Reducción de los pares: FAD+/FADH,
NAD+/NADH, Succinato/Fumarato, Azul de metileno oxidado/Azul de metileno red.
En la siguiente imagen, podemos notar que
NADH tiene un menor potencial que el FADH
al reducirse. Y si observamos la reacción de
oxidación del succinato, vemos que esta es
muy cercana al 0, sin embargo, al tener este
potencial positivo, la reacción se realiza de
manera exergónica.
Otro compuesto que nos va a ayudar a
identificar si se realiza o no una transferencia
de electrones es el azul de metileno. El azul de
metileno puede servir como indicador redox,
cambiando su vire de color de incoloro cuando
esta reducido a azul cuando esté oxidado. Se
puede utilizar para determinar en productos
lácteos la actividad reductora de
microorganismos así como la longevidad que
estos productos tendrán a partir de la cantidad
realizada. Se considera como n receptor de
electrones artificiales otorgados por parte de
succinato y con ello, identificar este
intercambio, teniendo un valor E =0.001 V.
Imagen 4. Valores de potencial de oxido-reducción para
diversas sustancias, cofactores y coenzimas. Obtenido de
https://www.engormix.com/balanceados/articulos/tips-quimiomodulacion-potencial-oxido-t43701.htm

7.Escribe las estructuras del azul de metileno en estado oxidado y reducido

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Imagen 5. Reacción de oxidación de azul de metileno. Obtenido de

http://quimicaclick.fcpn.edu.bo/pluginfile.php/338/mod_resource/content/0/BOTE%20DE%20COLORES%20C
ON%20GLUCOSA.pdf

Para esta práctica, se utilizará un hígado de rata sacrificada, y si deseamos observar la

reacción redox generado por la SDH, debemos separar las estructuras proteicas del órgano.
Uno de las sustancias mayormente usadas para la desnaturalización de estas proteínas es
el fenol. El fenol se encuentra normalmente coo un sólido cristalino o blanco a temperatura
ambiente. Presenta un pKa de 9.95, soluble en agua que logra fusionarse en min. 40.5C-
max. 181.7C y con una densidad de . Para ello, vamos a garantizar que va a eliminar las
grasas y por el pH generada logra precipitar los restos de proteínas.
10.Anexar una página de la red en donde se aprecie un video con una actividad relacionada
con la práctica.
Para ver como se realiza esta practica, se puede consutar a este pequeño video:

https://www.youtube.com/watch?v=PPiVrlOLEn8

https://www.youtube.com/watch?v=k0N1vHz2258
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Referencias

 Ibañez; M etl.al. Enzima succinato deshidrogenasa.. Recuperada 23 de Agosto del

2021 de https://es.slideshare.net/mafhezita1/enzima-succinato-deshidrogenasa-
48249242
 https://es.wikipedia.org/wiki/Succinato_deshidrogenasa
 Fernández E. Práctica 3. Determinación de la actividad del succinartos
deshidrogenasa. Recuperado el 13 de Agosto del 2021 de
https://www.studocu.com/es-mx/document/benemerita-universidad-autonoma-de-
puebla/bioquimica/practica-3-determinacion-de-la-actividad-de-la-enzima-
succinato-deshidrogenasa/9378945
 Universidad Autónoma de Hidalgo. Complejo II en el transporte eléctrico
mitocondrial. Recuperado el 23 de Agosto del 2021 de
http://biomodel.uah.es/metab/mitoc/mitoE_cII.htm
 Lira, C. Succinato deshidrogenasa.: estructura, función, regulación, enfermedades.
Recuperado el 23 de Agosto del 2021 de https://www.lifeder.com/succinato-
deshidrogenasa/
 Calderón, K. Unidad 2. Extracción y manipulación de ácidos nucleicos. Recuperado
el 24 de Agosto del 2021 de http://www.posgradoenbiociencias.uson.mx/wp-
content/uploads/2018/12/UNIDAD-2-KC_cap-1.pdf
 Zambrano, J. & Grass,J. Valorización de la calidad de leche cruda en la Asociación
de Productores de leche en Sotará-Asproleso, mediantes las pruebas de resazurina
y azul de metileno. Recyperado el 24 de Agosto del 2021 de
http://www.scielo.org.co/pdf/bsaa/v6n2/v6n2a08.pdf
 Acuoa tecnología. Potencial Reactión. Recuperado el 23 de Agosto de 2021 de
http://acquatecnologiaperu.com/wp-
content/uploads/Potencial_Redox_Acqua_Tecnologia.pdf