TEMA 11: TRANSPORTE ELECTRÓNICO

Y FOSFORILACIÓN OXIDATIVA

1. VISIÓN GENERAL DE LA GENERACIÓN DE ENERGÍA

La glucólisis y el ciclo del ácido

cítrico generan de por sí una
cantidad relativamente baja de
energía en forma de ATP.

La reoxidación de los
transportadores electrónicos
reducidos, genera la mayor parte
de la energía necesaria para la
síntesis de ATP.

El metabolismo aerobio del

piruvato genera mucho más
equivalentes reductores que el
catabolismo anaerobio. En la
respiración, estos equivalentes
reductores adoptan la forma de
NADH y FADH2, que en las
células eucariotas se reoxidan
mediante las proteínas de
transporte electrónico o cadena
respiratoria.
LOCALIZACIÓN DE LOS PROCESOS RESPIRATORIOS EN LA
MITOCONDRIA

La participación de las mitocondrias en el metabolismo aeróbico comienza con

la decarboxilación oxidativa de compuestos como el piruvato (originado
durante la glicólisis de azúcares en el citosol) a acetil-CoA por el complejo
enzimático piruvato dehidrogenasa.

La subsiguiente oxidación de acetil-CoA es mediada por dos caminos

metabólicos relacionados.

El primero, conocido como ciclo de los ácidos tricarboxílicos, oxida acetil-

CoA a dióxido de carbono y, en el proceso, reduce NAD + a NADH.

El segundo camino involucra una serie de reducciones y oxidaciones cuyo

resultado neto es la reoxidación del NADH a NAD+ y la reducción del
oxígeno a agua. Este proceso es catalizado por la cadena respiratoria, y es aquí
donde la energía de oxidación de sustratos es utilizada para la síntesis de ATP.

El intermediario central del metabolismo oxidativo en las mitocondrias es la

acetil-CoA, que no sólo deriva de azúcares, sino también de ácidos grasos y
aminoácidos.

Los ácidos grasos son degradados a acetil-CoA a través de la β-oxidación

cuyas enzimas se localizan en la matriz mitocondrial. Aunque en la degradación
de aminoácidos ocurre principalmente en el citosol.

Hay transaminasas mitocondriales que convierten ciertos aminoácidos a los

correspondientes cuerpos cetónicos que pueden entrar al ciclo de los ácidos
tricarboxílicos.
 Los transportadores electrónicos,
producidos por las deshidrogenasas
citosólicas y las rutas oxidativas
mitocondriales, vuelven a oxidarse
por los complejos enzimáticos unidos
en la membrana interna.

Estos complejos bombean

activamente protones hacia el
exterior, creando un gradiente
energético, cuya descarga impulsa el
complejo V hacia síntesis de ATP.

POTENCIALES DE REDUCCIÓN STANDARD DE LOS

TRANSPORTADORES ELECTRÓNICOS

En un equilibrio protónico, tenemos un ácido y su base conjugada, que

corresponden a un donador de protones y a un aceptor de protones,
respectivamente:

Ácido (donador de protones)  base conjugada + H+

De forma análoga, en una reacción redox tenemos un donador y un aceptor de

electrones.

Compuesto reducido (donador de e-)  compuesto oxidado + e-

Los protones libres y los electrones libres se encuentran a unas concentraciones

desdeñables en los medios acuosos, por lo que estas expresiones de equilibrio
son simplemente semireacciones de un equilibrio global ácido-base o redox.
Una reacción redox completa debe mostrar como reactante un aceptor
electrónico, que se reduce al ganar electrones. De los dos sustratos, el donador
electrónico es el reductor, que se oxida mediante la transferencia de electrones
al otro sustrato, el oxidante.

Reductor + oxidante  reductor oxidado + oxidante reducido

Para comprender la química ácido-base es crucial el concepto de pKa, que

representa una medida cuantitativa de la tendencia de un ácido a perder un
protón. En el mismo sentido, nuestro conocimiento de las oxidaciones
biológicas requiere una medida comparable de la tendencia de un reductor a
perder electrones (o de un oxidante a ganar electrones).
Este índice lo proporciona el potencial de reducción estándar, o E0. En el
equilibrio ácido-base, definimos arbitrariamente el agua, con un pKa de 7,
como neutra. Todo aquello que tenga un valor de pKa inferior a 7, que tiende a
protonar el agua, se denomina ácido, y los compuestos que tienden a
protonarse por el agua se denominan bases.

VISIÓN GENERAL DE LA CADENA RESPIRATORIA

La cadena respiratoria está formada por una serie de transportadores de
electrones capaces de experimentar cambios reversibles en su estado redox.

Los transportadores de electrones pueden ser moléculas orgánicas

relativamente simples, como la ubiquinona; nucleótidos como el NADH; o
estructuras proteicas, como las flavoproteínas, las hierro-sulfoproteínas o los
citocromos.

La estructura en membrana permite fijar los componentes de la cadena

respiratoria en un ordenamiento secuencial que facilita la transferencia de
electrones entre ellos, lo que determina una alta velocidad y eficiencia del
sistema.

Cada componente está situado respecto de sus vecinos de tal manera que el
transporte de electrones se realiza con la mayor especificidad evitándose
reacciones laterales.
2. TRANSPORTE ELECTRÓNIC O

TRANSPORTADORES ELECTRÓNICOS RESPIRATORIOS

Los electrones son transferidos a la ubiquinona por una serie de flavoproteínas

deshidrogenasas. En cambio, hay un solo dador de electrones al oxígeno:
Citocromo oxidasa.

Entre la ubiquinona y la Citocromo oxidasa, hay varios transportadores

intermedios: los citocromos bk, bT, c1 y c, y algunas hierro-sulfoproteínas.

Ninguno de los citocromos además de ser transportadores univalentes de

electrones, son capaces de ceder electrones al oxígeno con velocidad
comparable a la Citocromo oxidasa, lo que determina el papel cinético
esencial de esta enzima terminal para la respiración celular juntamente con su
capacidad de transferencia tetravalente de electrones al oxígeno para formar
agua.

Por fraccionamiento salino de la membrana mitocondrial interna con sales

biliares, es posible aislar complejos constituidos por varias proteínas. La
composición de estos refleja el ordenamiento de los constituyentes de la
cadena respiratoria. Estos complejos son:

 Complejo I: NADH-ubiquinona reductasa.

 Complejo II: Succinato-ubiquinona reductasa.

 Complejo III: Ubiquinol - citocromo c reductasa.

 Complejo IV: Citocromo oxidasa.

 Complejo V: Complejo F1-ATPasa.

Los inhibidores del transporte de electrones más comúnmente usados pueden

reunirse en tres grupos principales según el sitio de la cadena respiratoria
donde actúan. Un primer grupo de inhibidores actúa sobre la NADH-
dehidrogenasa, bloqueando la transferencia de electrones entre la flavina y la
ubiquinona.

Los más representativos de este grupo son la rotenona y la piericidina. Estos

inhibidores se combinan estequiométricamente con la NADH-dehidrogenasa.

Inhibidores de localización similar son el amital, los esteroides, los detergentes,

y algunos anestésicos volátiles como el halotano. Por su acción en la vecindad
del primer sitio de fosforilación se los denomina inhibidores de sitio I.
Un segundo grupo de sustancias actúa bloqueando la transferencia de
electrones entre el citocromo b y el citocromo c1.

Inhibidores similares son la hidroxiquinolina-N-óxido y el BAL. Se los denomina

inhibidores de sitio II. Otros inhibidores actúan sobre el hemo a3 de la
citocromo oxidasa impidiendo su interacción con el oxígeno, como el cianuro,
monóxido de carbono y azida. A estos compuestos se los denomina
genéricamente inhibidores de sitio III.

El flujo de electrones en las reacciones de óxido-reducción es responsable,

directa o indirectamente de todo el trabajo realizado en los organismos
vivientes.

En los organismos no fotosintéticos, las fuentes de electrones son

compuestos reducidos (los alimentos); en los organismos fotosintéticos, el
donador inicial de electrones es una especie química excitada por la absorción
de la luz solar.

El flujo de los electrones en el metabolismo es un proceso complejo, los

electrones se mueven a partir de varios metabolitos intermedios acarreadores
de electrones especializados en las reacciones catalizadas por enzimas.

Posteriormente, los acarreadores donan los electrones a aceptores con

elevadas afinidades por los electrones, este último proceso, genera
energía. Las células contienen una variedad de transductores de energía, los
cuales convierten la energía del flujo de electrones en trabajo.

El transporte de electrones, es la fuente principal de energía para las

actividades celulares, libera grandes cantidades de energía libre, la mayor parte
de la cual se almacena en forma de ATP en la fosforilación oxidativa.

Las enzimas que catalizan el este proceso, son generalmente más complejas
tanto estructuralmente como en su mecanismo catalítico que las
enzimas de las otras vías metabólicas, y por tanto son menos conocidas.

La mayoría están en la membrana interna mitocondrial, por lo cual es

complicada su extracción y purificación. También es bien conocido cómo
la liberación de energía libre que se produce durante el transporte de
electrones se conserva y transforma en la energía del enlace fosfato durante
la fosforilación oxidativa y las síntesis del ATP. Por lo anterior, estas enzimas
son un modelo de estudio muy atractivo.

Todos los siguientes procesos: el transporte de electrones, la energía libre de la

transferencia de electrones del NADH y FADH2 al O2 vía centros redox unidos a
proteínas, está acoplada a la síntesis de ATP.
Las fuentes de energía como la glucosa son inicialmente metabolizados en el
citoplasma de la célula y los productos obtenidos son llevados al interior de la
mitocondria, donde se continua el catabolismo usando rutas metabólicas que
incluyen el ciclo de los ácidos tricarboxílicos, la beta oxidación de los ácidos
grasos y la oxidación de los aminoácidos.

El resultado final de estas rutas es la producción de dos donadores de

electrones: NADH y FADH2. Los electrones de estos dos donadores son pasados
a través de la cadena de electrones hasta el oxígeno, el cual se reduce para
formar agua. Esto es un proceso de múltiples pasos que ocurren en la
membrana mitocondrial interna.

Las enzimas que catalizan estas reacciones tienen la capacidad de crear

simultáneamente un gradiente de protones a través de la membrana,
produciendo un estado altamente energético con el potencial de generar
trabajo.

El parecido entre las mitocondrias intracelulares y las bacterias de vida libre es

altísimo. Se han identificado cuatro complejos enzimáticos unidos a membrana
interna mitocondrial. Tres de ellos son complejos transmembrana, que están
embebidos en la membrana interna, mientras que el otro está asociado a
membrana. Los tres complejos transmembrana tienen la capacidad de actuar
como bombas de protones.

En esta grafica se identifican los principales

transportadores electrónicos respiratorios que
van oxidar al succinato y los sustratos ligados al
+
NAD en la membrana interna.
 COMPLEJOS MULTIPROTÉICOS EN LA CADENA

El flujo de electrones global se esquematiza de la siguiente forma:

 El Complejo I capta dos electrones del NADH y los transfiere a un

transportador denominado ubiquinona (Q). El producto reducido,
ubiquinol (QH2), puede difundir libremente por la membrana. El
Complejo I transloca cuatro protones a través de membrana interna
mitocondrial, desde la matriz hacia el espacio intermembrana,
produciendo un gradiente de protones.

 El Complejo II no es una bomba de protones. Este complejo dona

electrones a la ubiquinona desde el succinato y los transfiere vía FAD a
la ubiquinona.

 El Complejo III obtiene dos electrones desde QH2 y se los transfiere a

dos moléculas de citocromo c, que es un transportador de electrones
hidrosoluble que se encuentra en el espacio intermembrana de la
mitocondria. Al mismo tiempo, transloca dos protones a través de la
membrana por los dos electrones transportados desde el ubiquinol.

 El Complejo IV capta cuatro electrones de las cuatro moléculas de

citocromo c y se transfieren al oxígeno (O2), para producir dos moléculas
de agua (H2O).

Al mismo tiempo se translocan cuatro protones al espacio

intermembrana, por los cuatro electrones. Además "desaparecen" de la
matriz 4 protones que forman parte del H2O.

Los subíndices para los citocromos b

indican sus máximos espectrales. Los
dos hemos b del complejo III,
identificados como cit b562 y cit b566,
están unidos a la misma cadena
polipeptídica.
El flujo de protones crea un gradiente de pH y un gradiente electroquímico.

Este gradiente de protones es usado por la ATP sintetasa para formar ATP por
fosforilación oxidativa. La ATP sintetasa actúa como un canal de iones que
"devuelve" los protones a la matriz mitocondrial. Durante esta vuelta, la
energía libre de Gibbs producida durante la generación de las formas oxidadas
de los transportadores de electrones es liberada. Esta energía es utilizada por la
síntesis de ATP, catalizada por el componente F1 del complejo FOF1 ATP
sintetasa.

TRANSPORTE VECTORIAL DE PROTONES DESDE LA MATRIZ

Ambas imágenes son lanzaderas para la transferencia de equivalentes

reductores desde el citosol a las mitocondrias. La primera es la lanzadera
deshidroxiacetona fosfato/glicerol-3-fosfato, y la segunda es la lanzadera
malato/aspartato.
3. FOSFORILACIÓN OXIDATIVA

La fosforilación oxidativa, el proceso por el que la energía generada por la CTE

(cadena transportadora de electrones) se conserva mediante la fosforilación
del ADP para dar ATP.

El mecanismo por el que la energía libre que se genera durante el transporte

electrónico impulsa la síntesis de ATP, se denomina teoría quimiosmótica de
acoplamiento tiene las siguientes características principales:

 Los electrones son transportados a lo largo de la membrana, de un

complejo de proteínas transportador a otro.

 Los protones son translocados a través de la membrana, lo que significa

que son pasados desde el interior o matriz mitocondrial hacia el espacio
intermembrana provocando un gradiente de protones. El oxígeno es el
aceptor final del electrón, combinándose con ellos y con el ión H para
producir agua.

Teoría quimiosmótica: El flujo de electrones a través de los complejos de

transporte electrónico está acoplado al flujo de protones a través de la
membrana interna desde la matriz hasta el espacio intermembrana. Este
proceso incrementa el pH de la matriz. Además, la matriz queda cargada
negativamente con respecto al espacio intermembrana. Los protones fluyen
pasivamente a la matriz a través de un canal en la ATP sintasa. Este flujo está
acoplado a la síntesis de ATP.
Visión general del modelo quimiosmótico: Los protones se impulsan desde la matriz
mitocondrial a través de la membrana interna y dentro del espacio intermembrana por el
mecanismo de transporte electrónico.

La energía capturada del transporte electrónico se utiliza para crear un potencial eléctrico y un
gradiente de protones. Debido a que la membrana interna es impermeable a los protones, sólo
pueden atravesar la membrana fluyendo a través de canales específicos de protones. El flujo
de protones a través de la ATP sintasa impulsa la síntesis de ATP.
 ATP SINTETASA

La ATP-sintasa es el complejo enzimático que acopla el flujo de protones a

través de la membrana mitocondrial interna (del espacio intermembrana a la
matriz) a la síntesis de ATP.

Encontramos dos partes principales:

 F0-ATPasa: unidad embebida en la membrana mitocondrial interna.

 F1-ATPasa: unidad en forma de “piruleta”, proyectada hacia la matriz

mitocondrial, formada por una cabeza y un “tallo” que une la cabeza a
la unidad F0.

La ATP-sintasa es un dispositivo reversible que puede usar la energía liberada

en la hidrólisis del ATP para bombear iones a través de la membrana.

La ATP-sintasa es un motor molecular que convierte energía mecánica (energía

cinética de rotación) en energía química (síntesis de ATP).
 TRANSLOCASA ATP/ADP

El ATP que se genera en el proceso de la fosforilación oxidativa está en el lado

de la matriz mitocondrial. No puede atravesar la membrana interna
mitocondrial, al igual que ADP y la molécula de fosfato inorgánico (Pi). Es
necesario un sistema de transporte de membrana:

ATP-ADP translocasa es una proteína transportadora que permite a ATP y ADP

para atravesar la membrana mitocondrial interna. ATP producido a partir de la
fosforilación oxidativa se transporta desde la matriz mitocondrial al citoplasma,
mientras que el ADP es transportado desde el citoplasma a la matriz
mitocondrial. Más de 10% de la proteína en la membrana mitocondrial interna
se compone de ATP-ADP translocasa.

En condiciones normales, el ATP y ADP no pueden cruzar la membrana

mitocondrial interna, debido a sus altas cargas negativas, pero ATP-ADP
translocasa, un antiportador, parejas el transporte de las dos moléculas. La
depresión en el ATP-ADP translocasa, alternativamente, se enfrenta a la matriz
y los lados de la membrana citoplásmica.

ADP de ligadura desde el citoplasma induce la eversión del transportador y los

resultados en la liberación de ADP en la matriz. La unión de ATP a partir de la
matriz induce la eversión y resulta en la liberación de ATP en el citoplasma y
concomitantemente trae la parte posterior translocasa a su conformación
original. ATP y ADP son los únicos naturales nucleótidos reconocidos por la
translocasa.

El proceso neta se denota por:

ADP 3 - citoplasma + ATP 4 - Matriz → ADP 3 - Matriz + ATP 4 - citoplasma

Intercambio ATP-ADP es energéticamente costosa: alrededor del 25% de la

energía producido a partir de la transferencia de electrones por la respiración
aeróbica , o un ion de hidrógeno , se consume para regenerar el potencial de
membrana que es aprovechado por el ATP-ADP translocasa.