Práctica 5: Estudio del bombeo de protones por levaduras

Integrantes: Quirarte Sainz Maryan Lizetth, Ruelas Verduzco Valeria, Tarín Sosa
Yajaira, Vázquez Corona Diego Iván.

Asignatura: Procesos Metabólicos.

Licenciatura QFBT

Docente: Contreras Negrete Jonathan Yair

Periodo: 2022-2

Resumen.
Las bombas de protones son un tipo especial de transportador que empuja los iones
de hidrógeno desde áreas de baja concentración a áreas con alta concentración,
Las levaduras son hongos microscópicos (unicelulares) son importantes por su
capacidad para realizar la descomposición mediante fermentación de diversos
cuerpos orgánicos. (Tortora,2007) Una adecuada transferencia de electrones a
través de una serie de reacciones de óxido reducción, garantiza la obtención de
sustratos energéticos necesarios para el óptimo funcionamiento de las células; Se
realizaron dos pruebas, en la primera agregamos levadura y adicionamos (mismas
cantidades) y se determinó el pH dos veces cada 3 minutos, de la cual se obtuvo
una línea basal y posteriormente dos veces cada 10 minutos; En la segunda prueba,
se le añadió a la levadura el dimetrofenol y después se determinó el pH dos veces
en intervalos de tres minutos posteriormente 4 veces cada 5 minuto y posterior a
eso dos veces cada 10 minutos; Se determinó que la glucosa ayuda para e bombeo
de protones la cual consiste en oxidar o fermentar la glucosa y así obtener energía
para la célula, lo cual se le conoce como glucolisis, y de una fuente de potencial
reductor (NADPH2 o NADH2), El dimitrofenol lo que hace es inhibir el flujo de
electrones y esa reacción causa que no se libere energía (ATP) por lo cual el pH
aumenta y lo hace básico así ambas pruebas nos permiten obtener el conocimiento
de cómo es que funciona el nivel de organización y estructura que caracteriza a los
organismos. Con la síntesis de ATP y potencial reductor se acopla al metabolismo
energético de las células, es decir, depende de la fotosíntesis y la respiración.
Palabras clave.
Glucolisis, Glucosa, Dinitrofenol, ATPasas, Levadura, PH, inhibidor, básico, acido.
Introducción
Las bombas de protones son un tipo
especial de transportador que empuja
los iones de hidrógeno desde áreas de
baja concentración a áreas con alta
concentración. Los iones que se
mueven hacia abajo en un gradiente
liberan energía, pero cuando se
mueven hacia arriba en un gradiente,
necesitan energía. La difusión puede
usar este gradiente para capturar
energía nuevamente, a medida que
los iones se mueven hacia baja
concentración. (V, M, 2017).
Levaduras.
La levadura o fermento resulta tan
importante y útil para nosotros por su
capacidad de llevar a cabo la
descomposición de azúcares e
hidratos de carbono en un proceso
conocido como fermentación.
En la fermentación alcohólica, que se
da sólo en condiciones anaeróbicas,
es decir, en ausencia de oxígeno, la
levadura descompone los azúcares en
ATP, que es la energía que necesita,
además de CO2 y alcohol como
productos deshechos. (Acosta, M. B,
2021, 23 febrero)
Es importante mencionar que el
metabolismo de los carbohidratos se
basa en muchas acciones. La
formación de CO2 + H2O + ATP a
partir de la glucosa, se lleva a cabo,
porque existe una disponibilidad de
O2 y que, aunado a la necesidad de
energía, se inducen los procesos
enzimáticos claramente definidos por
sustratos y productos, ellos son:
glucólisis, transformación del piruvato
en acetil CoA, ciclo de Krebs y
fosforilación oxidativa. (UNAM, s.f)
Glucólisis
La glucólisis se realiza en el citosol y
comprende la conversión de glucosa
en piruvato, cuya reacción global es:
Glucosa + 2 Pi + 2 ADP + 2 NAD+ 2
piruvato + 2 ATP + 2 NADH + 2 + + 2
H2O
En este proceso participan 10 enzimas
diferentes que catalizan diez
reacciones secuenciales, las cuales
podríamos dividir en tres etapas: a)
formación de fructosa 1,6- bisfosfato a
partir de glucosa, b) formación de
triosas fosfato (gliceraldehido 3-
fosfato y dihidroxiacetona fosfato) a
partir de fructosa 1,6-bisfosfato y c)
formación de piruvato a partir de
gliceraldehído 3- fosfato.
En la primer etapa se consumen dos
ATP ś , uno con la enzima
hexoquinasa y después de una
reacción de isomerización, se emplea
el segundo ATP, con la enzima
fosfofructoquinasa , reacciones que
dan origen a la fructosa 1,6-bisfosfato,
con la que se inicia la segunda etapa,
al convertirse la fructosa 1,6-bisfosfato
en sustrato de la enzima aldolasa y
cuyos productos son las dos triosas
fosfato (gliceraldehido 3-fosfato y
dihidroxiacetona fosfato),
seguidamente se inicia la tercer etapa,
la que se caracteriza por la
isomerización de la dihidroxiacetona
fosfato en gliceraldehído 3-fosfato por
lo que al finalizar esta etapa, contamos
con dos moléculas de gliceraldehido
3-fosfato, mismas que servirán de
sustrato para la formación de piruvato,
uno por cada una de ellas. Con la
síntesis de piruvato, termina la tercer
etapa, la que se distingue inicialmente,
por el requerimiento de la coenzima
NAD+ y de un Pi (ortofosfato), para
oxidar y fosforilar al gliceraldehído 3-
fosfato el cual se transforma en 1,3-
bisfosfoglicerato más NADH
(coenzima reducida), a partir de este
producto recién formado y por acción
de la enzima fosfoglicerato quinasa se
sintetiza y se libera, la primer molécula
de ATP y más adelante, en la reacción
catalizada por la piruvato quinasa, se
forma a nivel de sustrato, la segunda
molécula de ATP. Es en este punto,
donde finaliza la glucólisis, sin
embargo, son los 2 ATP ś liberados y
los 2 equivalentes reducidos (NADH +)
los que no debemos olvidar. (UNAM,
s.f)
Fosforilación oxidativa
El NADH y el FADH2 formados en el
glicólisis, en la oxidación de los ácidos
grasos y en el ciclo del ácido cítrico,
son moléculas ricas en energía porque
poseen un par de electrones con
elevado potencial de transferencia.
Cuando estos electrones se
transfieren al oxígeno molecular, se
libera una gran cantidad de energía,
que puede ser utilizada para generar
ATP. La fosforilación oxidativa es el
proceso por el que se forma ATP como
resultado de la transferencia de
electrones desde el NADH o del
FADH2 al O2 a través de una serie de
transportadores de electrones.
(UNAM, s.f)
Inhibidores
La presencia de un inhibidor de la
cadena respiratoria detiene varios
procesos, entre ellos, la síntesis de
ATP. Cuando hay un bloqueo de la
cadena respiratoria y los electrones ya
no pueden fluir hacia el oxígeno, se
detiene el proceso energético que
impulsa la síntesis de ATP debido a la
falta de energía. (Guerra, J. J. M.
2020).
Desacoplantes
Los agentes desacoplantes son un
grupo de compuestos que inhiben la
síntesis de ATP en la mitocondria
(fosforilación oxidativa), pero no
detienen la cadena respiratoria.
Este tipo de compuestos, a diferencia
de los inhibidores de la cadena
respiratoria, no detienen, ni el ciclo de
Krebs ni la glucólisis, ya que tanto el
NADH como el FADH2 se convierten
en NAD+ y FAD, al ceder sus
electrones a los intermediarios de la
cadena, quedando libres para aceptar
más electrones en las reacciones de
deshidrogenación que ocurren en la
glucólisis y en el ciclo de Krebs.
Como el flujo de electrones no se
detiene con la presencia de un agente
desacoplante, la energía se sigue
produciendo y el consumo de oxígeno
continúa, pero se daña el proceso de
transducción de la energía, por lo que
ya no es posible transformar la energía
liberada en energía química, la que se
disipa sin ser utilizada en la formación
de un enlace de alta energía.
Los agentes desacoplantes ejercen su
acción haciendo permeable la
membrana interna de la mitocondria a
los protones, de tal manera que ahora
pueden pasar libremente a través de
la membrana y por lo tanto se destruye
el gradiente de concentración que
produjo la cadena respiratoria,
esencial para que la ATPASA sintetice
ATP. (Guerra, J. J. M. 2020).
Planteamiento del problema
Comprender el estudio de la bomba de
protones por levadura, su función y
como los iniciadores afectan al
ATPasas.
Justificación.
Relacionar el consumo de glucosa con
los cambios de pH producidos por
levaduras a nivel de la cadena
transportadora de electrones bajo el
efecto de un inhibidor y un
desacoplaste de la misma. Se realiza
la fermentación y la respiración
simultáneamente dentro de una
célula, la levadura por medio del
cambio de PH el consumo de glucosa,
cómo funciona la ATPasa y la ATP
sintasa, la función y la diferencia de
ellas.
Objetivos
General
Lograr comprender el funcionamiento
de la bomba de protones por levadura
mediante la práctica de esta, así
identificar sus compuestos y métodos.
Identificar las diferencias de un
inhibidor y un desacoplante y
poniéndolo en practica
Específicos
-Relaciona el consumo de glucosa con
los cambios de pH producidos por la
levadura.
-Analiza las vías por las cuales la
glucosa genera los cambios de pH.
-Interpreta el efecto de los inhibidores
y los desacoplantes sobre la salida de
Protones.
Hipótesis
El bombeo de protones de una
muestra de levadura se obtiene
mediante la realización de los
experimentos, en el cual se utilizó
levadura y dinitrofenil para la
obtención de los cambios de pH, en la
cual provocarán un consumo de
glucosa.
Métodos
Experimento 1
En un vaso se diluyen 5 ml de levadura
con 40 ml de agua destilada, se
dertemina el pH de la levadura pura y
medir otras 2 veces a cada 3 min para
obtener línea basal, adicionar 5 ml de
glucosa al 10%, agitar y medir el pH,
determinar el pH cada 5 min 4 veces y
pasar a medir el pH cada 10 min 2
veces.
Experimento 2 (DINITROFENOL)
En un 2do vaso se deberá diluir 5 ml
de levadura con 40 ml de agua
destilada y añadir por decantación 0.2
ml de la solución de dinitrofenol 40
mmol/l con un concentrado de 200
micro mol/l, determinar el pH de la
solución y medir el pH 2 veces con un
intervalo de 3 min, volver a determinar
el pH de la solución cada 5 min 4
veces, y luego cada 10 min 2 veces
más.
Resultados
pH de la levadura pura
Levadura pura 5.02 pH
3 min 5.26 pH
+ 3 min 5.05 pH
Tab.1 Resultados de pH levadura
Tabla de pH del experimento 1 levadura con glucosa
Levadura con glucosa 4.25 pH
A los 5 min 3.63 pH
+ 5 min 3.20 pH
+ 5 min 3.40 pH
+ 5 min 3.90 pH
+5 min 3.25 pH
A los 10 min 3.20 pH
+ 10 min 3.06 pH
Tab.2 Resultados de pH experimento 1 glucosa

Levadura con glucosa

5

0
1 2 3 4 5 6 7 8

Grafica1. Visualización de cómo fue bajando el pH

Tabla de pH del experimento 2 levadura con Dinitrofenol
Levadura Dinitrofenol a los 3 min 5.38 pH
+ 3 min 5.34 pH
+ 3 min 5.25 pH
A los 5 min 5.28 pH
+ 5 min 5.03 pH
+ 5 min 5.22 pH
+ 5 min 5.04 pH
 + 10 min 4.95 pH
+ 10 min 4.94 pH
Tab.3 Resultados de pH experimento 2 dinitrofenol

Dinitrofenol
5.5
5.4
5.3
5.2
5.1
5
4.9
4.8
4.7
1 2 3 4 5 6 7 8 9

Grafica.2 Visualización de cómo fue bajando el pH con el dinitrofenol

Análisis de resultados Lo que se puede observar en la gráfica
2. La levadura con el dinitrofenol, se ve
Lo que podemos ver en ambas
como el pH va de bajada lo cual nos
reacciones es como va su variación de
indica que el dinitrofenol con la
pH dependiendo si estos están
levadura, hace un efecto inhibidor lo
recibiendo protones o electrones si
cual hace al Dinitrofenol un agente
son inhibidoras o des acopladores así:
desacoplante ya que tiene la
Al observar la gráfica 1. En donde se
capacidad de aislar el flujo de los
mezcla la levadura con la glucosa en
electrones y el bombeo de H+ de las
la cual se inicia con un trabajo de
síntesis de ATP lo que causa una
reproducción, alimentación y
reducción de ATP y su disminución en
biosíntesis; en la que la muestra
el pH haciendo a la levadura con
presenta una disminución del pH lo
menos acidez; Como resultado de la
cual indica la mayor concentración
acción de cualquier inhibidor, se
de protones H+ es decir más acidez
detienen las reacciones redox de la
en el medio, de esta manera se
cadena respiratoria, no se libera
realizó el estudio del efecto
energía, las bombas de protones no
producido del inhibidor y el
funcionan, por lo que no hay
desacoplante en el cual no se detiene
protones que regresen a través del
el transporte de electrones pero si
complejo V, y la producción de ATP
disipan el gradiente electroquímico al
cesa.
facilitar la entrada de protones a la
matriz a través de “atajos” También se puede observar que la
proporcionados por esas sustancias y glucosa ayuda a la producción de la
es razón por la que ocurre el levadura ya que esta absorbe los
transporte de electrones pero no la azucares haciendo una donación de
fosforilación oxidativa. protones a la levadura para que esta
crezca el cual hay mecanismos Como conclusión podemos decir que,
propios del metabolismo que son en todo caso, es mejor llevar a cabo
capaces de liberar o consumir una un proceso aerobio para la obtención
buena cantidad de protones que de energía dentro de nuestros
hacen regular el pH de la célula aun organismos, a simple vista se observa
cuando la bomba de protones sea cómo es que la levadura sin
inhibida. dinitrofenol y con dinitrofenol cambian
los niveles de pH de cada uno, pero
Conclusión Iván
manteniéndose entre un rango no
Una práctica interesante ya que mayor a 5 y no menor a 3.
logramos comprender la función del
El estudio de estos procesos es
estudio de la bomba de protones por
fundamental para determinar la
levadura asimismo comprendimos
absorción de los nutrientes dentro de
cómo es que los inhibidores afectan al
nuestro organismo, al igual que el
ATPasas y por qué sucede esto, todo
análisis de otros microorganismos
esto mediante un método que nos
como las levaduras a la hora de
llevó a dichos resultados. También
experimentar con sus condiciones
conociendo las enzimas que permiten
ambientales y el cómo se desarrollan
algunas de las reacciones durante el
durante estos procesos.
metabolismo.
Conclusión Valeria
Conclusión Maryan
En esta práctica se obtuvo los
Durante la práctica se logró conocer
resultados esperados comprendiendo
cómo es que las enzimas hacen una
la función del bombeo de protones por
función muy importante al momento
levadura y como los inhibidores
de tener ciertas reacciones durante el
afectan las ATPasas. Así como
metabolismo, teniendo así regulado el
conocer que la mayoría de las
pH adecuándose a lo que se está
enzimas son muy sensibles a los
recibiendo en este caso los protones
cambios de Ph, pueden afectar
que son capaces de liberarse o
drásticamente su actividad.
consumirse, este hace que el medio
cada vez poco a poco se vaya Referencias
haciendo más acido, así mecanismo
Acosta, M. B. (2021, 23 febrero).
por parte de la ATPasa de la levadura
Levaduras: qué son, tipos y ejemplos.
siendo responsable de cambios en
ecologiaverde.com.
esta y no de regular el pH, así evitando
https://www.ecologiaverde.com/levad
tener algún fallo en el proceso del
uras -que-son-tipos-y-ejemplos-
metabolismo y que esta pueda seguir
2585.html
con un manejo normal ya sea con un
inhibidor y/o acopladores. Guerra, J. J. M. (2020). Algunos
inhibidores | LIBRO ELECTRÓNICO
Conclusión Yajaira
DE BIOQUÍMICA | Juan José Martínez
Guerra. LIBRO ELECTRÓNICO DE
BIOQUÍMICA.
https://libroelectronico.uaa.mx/capitul https://es.scribd.com/document/33207467
o-9-aspectos-importa/algunos- 0/Bombeo-de-Protones-Levadura
inhibidores.html
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