ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE SALUD PÚBLICA

CARRERA DE MEDICINA

LABORATORIO SÍLABO
CÓDIGO: MEDMB05
PRÁCTICA N° 02
LABORATORIO Biología Celular y Molecular NÚMERO DE 4
HORAS
SEMANAL:

NÚMERO DE 2
HORAS
PRÁCTICAS
TEMA: MICROSCOPÍA
UNIDAD: I: INTRODUCCIÓN AL ESTUDIO
DE LA CÉLULA Y LA BIOLOGÍA
MOLECULAR.

PERIODO ACADÉMICO: ABRIL - AGOSTO 2023

HABILIDADES

 Reconoce las partes

estructurales del
microscopio a través de la
preparación y observación
LOGROS DE de muestras.

APRENDIZAJE LOGROS DE Identifica los conceptos

DESTREZAS fundamentales sobre los organismos
DE LA APRENDIZAJE
vivos y explica la estructura de la
PRÁCTICA DE  Aplica los conceptos DE LA UNIDAD célula y los mecanismos de
teóricos para preparación de transporte a través de la membrana.
LABORATORIO
muestras.
 Conoce el manejo y enfoque
correcto de las muestras en
el portaobjeto del
microscopio.

PROCEDERES

 Demuestra responsabilidad
en el empleo de los equipos
y materiales de laboratorio.
 Trabaja en equipo,
compartiendo con respeto
los espacios.
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1. OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL
 Distinguir las características y funcionamiento del microscopio.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Identificar las partes del microscopio y comprender sus características para el buen uso del mismo.
 Reconocer la importancia del microscopio en el desarrollo de las ciencias biológicas.

2. CONTENIDOS TEÓRICOS MÍNIMOS

Microscopía
El primer procedimiento, aunque no el único para el estudio de la célula y los tejidos es el
microscopio el impulsor más significativo de la microscopia fue el holandés Anton Van
Leeuwenhoek (1632-1723). Anatomista y fisiólogo, Leeuwenhoek construyó sus propios
microscopios con lentes convexas que él mismo pulía. Entre sus aportaciones más importantes está
la de ser uno de los primeros en estudiar la composición de la sangre y en observar y dibujar
protozoos; en 1676 descubrió las bacterias.

Tipos

MICROSCOPIA ÓPTICA:
M. Simple: Lupas: monoculares binoculares.
M. Compuesto: Estereomicroscopios, de luz ultravioleta, de fluorescencia, de contraste de fases,
de campo oscuro, de polarización, Microscopia por luz reflejada.

MICROSCOPIA ELECTRÓNICA:
De Barrido (MEB), de Transmisión (TEM), Microscopio confocal de barrido láser.

El microscopio simple o lupa es un instrumento de amplificación de imágenes que consiste en la

utilización de una o más lentes convergentes en un solo sistema óptico. Dependiendo de la
curvatura de la superficie de la(s) lente(s) las lupas pueden ampliar las imágenes de los objetos
desde 5, 8,10, 12, 20 y hasta 50 veces este tipo de microscopio se denomina también lupa. Las
lupas pueden ser monoculares o binoculares.
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Microscopio compuesto. A diferencia del simple, en este tipo de microscopios se combinan dos
lentes o sistemas de lentes convergentes de amplificación de imagen, colocados en los extremos
del tubo: el denominado objetivo, situado más cerca del objeto a observar; y el ocular, más
cercano al ojo del observador. Dependiendo del modelo posee un cabezal MONOCULAR que
consta de un solo ocular, llevando consigo el inconveniente de producir fatiga visual en
observaciones prolongadas los de cabezal BINOCULAR, permiten la visión con los dos ojos,
siendo importante alcanzar una adecuada fusión de la imagen. El cabezal TRIOCULAR además
de poseer las ventajas del anterior, posibilita el fotografiar el objeto de estudio.

Componentes del Microscopio

 El ESTATIVO O SOPORTE Está formado por un pie pesado que sostiene un

brazo inclinado del cual salen tanto la platina como el tubo del microscopio.
 La PLATINA es la pieza sobre la que se colocan las diferentes preparaciones que
deseamos observar. La forma de la platina es variada y puede ser tanto fija como
móvil. Prácticamente, todos los microscopios profesionales actuales poseen un
carro móvil graduado, que hace posible el movimiento y la localización precisa de
áreas de interés en la preparación.
 El TUBO lleva, en la parte inferior, el revólver con los objetivos, y en la superior,
los oculares cambiables.
 El REVÓLVER es una pieza que lleva varios objetivos intercambiables y permite
adaptar éstos al tubo del microscopio.
 Los MANDOS DE ENFOQUE manejan el enfoque bien sea por el movimiento
vertical de la platina o del tubo, según el tipo de microscopio. Habitualmente se
colocan a ambos lados del estativo. Para una mayor precisión en el enfoque es
necesario un mando micrométrico para ajuste fino, resultando más cómodos si
ambos mandos (macro y micro) actúan sobre el mismo eje (coaxiales).
 Los OBJETIVOS constan de un sistema de lentes. Podemos hablar de objetivos
secos, que son aquellos en los que entre el objetivo y la preparación sólo hay aire,
y también podemos hablar de objetivos de inmersión, cuando es necesario colocar
entre la lente y la preparación un elemento líquido, que permite una mayor
luminosidad. Ésta y otras características como: aumento del objetivo, apertura
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numérica, longitud del tubo y espesor del cubreobjetos, vienen indicadas mediante
unas marcas en el objetivo.
 Los OCULARES están formados por dos lentes que se encuentran separadas por
un diafragma. Para hacer más cómoda la observación, existen microscopios que
tienen dos oculares en lugar de uno. Ello permite observar con los dos ojos a la
vez. Actualmente existen cabezales múltiples, que permiten que varias personas
puedan observar una misma muestra a la vez.
 La FUENTE DE LUZ es muy importante ya que una correcta iluminación de la
preparación que deseamos observar es una condición necesaria para poder realizar
una buena observación. Podemos obtener la fuente de luz a través de un espejo
situado debajo de la platina, que recoge tanto la luz natural como la luz eléctrica, o
a través de lámparas incorporadas al pie del microscopio.
 El CONDENSADOR es una lente o sistema de lentes situadas debajo de la platina
y que permite concentrar la luz en la muestra que se observa. Existen distintos
tipos de condensadores, dependiendo de las necesidades y requerimientos de
nuestra observación: abbe, de campo oscuro, acromático, etc.
 El DIAFRAGMA está situado debajo de la platina y del condensador, siendo el
encargado de regular la entrada de luz al condensador. En algunos modelos se
acciona por medio de una palanca y en otros mediante una rueda con orificios de
distintos diámetros.

CARACTERISTICAS DE LA VISION CON EL MICROSCOPIO

El lente ocular, en la parte superior del microscopio, normalmente tiene un aumento de 10x (la "x"
indica "aumento") por lo que amplifica una imagen 10 veces su tamaño normal.
El lente objetivo tiene 3 tipos de aumento:
 Normal 4X (en seco) 10 x 4 = 40X (aumentos totales)
 Medio 10X (en seco) 10 x 10 = 100X
 Alto 40X (en seco) 10 x 40 = 400X
 Aceite de inmersión 100X 10 x 100 = 1000X
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Microscopio Electrónico

Existen básicamente dos tipos: el microscopio electrónico de barrido o tridimensional (MEB) y el

microscopio electrónico de transferencia (MET).
Estos microscopios, a diferencia del microscopio óptico, forman imágenes a partir de una
radiación de electrones emitida por un filamento de tungsteno y un sistema de electroimanes que
funcionan como lentes.

Otra de las características es que proporcionan una resolución mayor que el microscopio óptico,
requieren de procedimientos más elaborados para la preparación del material y sólo se pueden
examinar células deshidratadas y muertas. El MET se utiliza ampliamente para examinar la
estructura interna de la célula, mientras que el MEB examina con detalle la superficie de las
muestras, las cuales se observan tridimensional mente debido a la profundidad de foco que posee
este último tipo de microscopio. Tanto el MET como el MEB son indispensables para el estudio
de la biología celular y molecular.

El microscopio electrónico de transmisión es un microscopio que utiliza un haz de electrones para

visualizar un objeto debido a que la potencia amplificadora de un microscopio óptico está limitada
por la longitud de onda de la luz visible. Debido a que los electrones tienen una longitud de onda
mucho menor que la de la luz pueden mostrar estructuras mucho más pequeñas, tiene un límite de
resolución de cerca de 2 nm. Un MET mira células muertas, después de haber sido fijadas y
teñidas con iones de metales pesados Las partes principales de un microscopio electrónico son:

 Cañón de electrones, que emite los electrones que chocan contra el espécimen, creando
una imagen aumentada.
 Lentes magnéticas para crear campos que dirigen y enfocan el haz de electrones, ya que
las lentes convencionales utilizadas en los microscopios ópticos no funcionan con los
electrones.
 Sistema de vacío es una parte muy importante del microscopio electrónico. Debido a que
los electrones pueden ser desviados por las moléculas del aire, se debe hacer un vacío casi
total en el interior de un microscopio de estas características.
 Placa fotográfica o pantalla fluorescente que se coloca detrás del objeto a visualizar para
registrar la imagen aumentada.
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 Sistema de registro que muestra la imagen que producen los electrones, que suele ser una
computadora.
El microscopio electrónico de barrido (MEB) también tiene un límite de 2 nm. El MEB permite
mirar a células muertas, después de haber sido fijadas y teñidas con iones de metales pesados. Con
esta técnica los electrones son reflectados sobre la superficie del espécimen.

Preparación de la muestra a estudiar

La preparación de una muestra para estudiarla al microscopio óptico es diferente según la

naturaleza del material que ha de ser observado, orgánico o inorgánico, y si es orgánico, según
queramos observar propiedades que sólo se manifiestan en estado vivo, o si queremos observar
morfología y estructuras, que no se modifican cuando sobreviene la muerte celular La coloración
en vivo se puede hacer de dos maneras:

1. Por difusión: en el espacio entre portaobjetos y cubreobjetos de una preparación en fresco, se

pone una gota de colorante que penetra en la muestra por capilaridad.
2. Mezclando una gota de colorante con el material que ha de ser examinado en el portaobjetos y
colocando luego el cubreobjetos.

3. PALABRAS CLAVES. CONCEPTOS FUNDAMENTALES.

 Microscopio  Electrónico
 Óptico  Resolución

4. METODOLOGÌA

Se utilizará un método experimental activo que permite al estudiante, la aplicación de los conocimientos
teóricos adquiridos, mediante una técnica colectiva que permita generar un ambiente de trabajo grupal
responsable y respetuoso, mediante la participación activa de los estudiantes.

5. EQUIPOS, MATERIALES

 Guía Práctica de Microscopía  Porta y cubreobjetos

 Microscopio  Muestras
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6. PROCEDIMIENTO

Pasos para el manejo adecuado del microscopio

1. Encender la luz del microscopio, comprobar si el lente objetivo de menor aumento 4x

está a continuación del tubo; si no es así, debe colocarse en dicha posición haciendo
girar el revólver hasta alcanzar un "tope".
2. Abrir completamente el diafragma y observando a través del ocular, mover el espejo
orientándolo de modo que la luz reflejada se observe en un círculo uniformemente
iluminado.
3. Este constituye el "campo óptico". Una vez obtenida la iluminación máxima, NO SE
DEBE CAMBIAR LA POSICION DEL MICROSCOPIO. Con luz incorporada no
hay espejo.
4. Ubicar y sujetar el portaobjetos en la platina, procurando que la preparación se halle
en el centro de la abertura circular.
5. Mover el tornillo micrométrico para acercar el lente objetivo de menor aumento hacia
la preparación, hasta llegar a un tope.
6. Observando por el lente ocular, mover nuevamente el tornillo macrométrico en el
sentido inverso hasta que aparezca la imagen.
7. Una vez enfocada la imagen girar el tornillo hasta que sea nítida. Nunca se debe usar
el tornillo micrométrico para grandes desplazamientos, para ello está el tornillo
macrométrico.
8. Cuando los tornillos macro y micrométrico se encuentren incorporados en un solo
dispositivo, el ajuste fino se hace solo después de haber realizado el avance rápido de
acercamiento a la preparación.
9. Antes de pasar al siguiente aumento verificar que la imagen a observar se encuentre
en el centro del campo, hacer girar el revólver cambiando el lente objetivo hasta llegar
al "tope" y accionar solamente el tornillo micrométrico hasta obtener la nueva imagen.
10. Para observar una muestra con el objetivo de 100 x, recuerde colocar una gota de
aceite de inmersión encima de la lámina de la preparación antes de girar el revólver.
Esto permite que la imagen se vea con nitidez para realizar la observación ya que este
tipo de lentes requiere que el índice de refracción sea similar al del vidrio.
11. Terminada la observación, girar el revólver para colocar el objetivo de menor
aumento en la primera posición de trabajo.
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12. Retirar la preparación y dejar limpio el microscopio, secando la platina con cuidado.
13. Si usó el objetivo de inmersión, debe limpiarse inmediatamente después de su uso con
ayuda del papel de lente.

7. RECOMENDACIONES

El aprendizaje correcto de las características y funcionamiento del microscopio conllevan a una

familiarización y comprensión en la visualización de estructuras celulares básicas dentro de la
cátedra de Biología Celular y Molecular.

8. CONCLUSIONES

Se distinguió las características del microscopio óptico, las partes que lo componen
adquiriendo habilidades para su adecuado manejo en las prácticas de laboratorio.

9. ANEXOS

Anexo N°1: Microscopios

ÓPTICO
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ELECTRÓNICO

10. BIBLIOGRAFÍA

 Karp, Gerald (2016). Biología celular y molecular: conceptos y experimentos. México D. F.- México:
McGraw-Hill.
 Chandar, Nalini - Viselli, Susan. (2018). Biología Molecular y Celular. Recuperado de:
https://elibro.net/es/lc/espoch/titulos/125301
 Salazar Montes, Adriana María (2016). Biología Molecular: Fundamentos y aplicaciones en las
ciencias de la salud. México,D.F. - México: McGraw-Hill.