Lunes, 21 de octubre de 2022

METABOLISMO PROTEICO Y DISPROTEINEMIAS

ELECTROFORESIS DE PROTEÍNAS
PLASMÁTICAS

En una electroforesis SDS-PAGE, la muestra

de proteínas se hace correr en un soporte
con diferencia de voltaje de manera que la
proteínas puedan avanzar en relación con su
tamaño/carga. Esta separación se analiza con
un densitómetro el cual puede originar pics
de bandas que dan cuenta de las proteínas
que están presentes en el plasma.

En el preteinograma observamos los dos polos (las proteínas se cargan en el polo negativo y migran hacia el
positivo), las proteínas mas pequeñas son aquellas que corren mas rápido. En este caso encontramos 5 zonas, la
zona de las albúminas, las 1, 2,  y las gamma globulinas.

La albúmina son las proteínas mas pequeñas (de hecho hay un pequeño pic que podrían ser la prealbúmina que
es mas pequeña aún), y son las mas abundantes en el plasma. Es por esto que si sabemos que en presencia de
poliuria es muy probable que sea la albúmina y que haya una falla renal.

Las gamma globulinas, son los anticuerpos (casi todos los anticuerpos) que presentan alto peso molecular por lo
que migran mucho menos.

¿Qué tipo de soporte se utiliza? ¿Qué tipo de tinción?

- Acetato de celulosa - Amido Black

Sin embargo, este ya no se utiliza, por su - Rojo Punceau
baja resolución. (Se prefiere la agarosa) - Azul de Coomassie
- Agarosa
- Acrilamida

Esto es lo que uno observa en la electroforesis de proteínas, en

una tinción con Amido Black. La gran mancha negra que se
observa (la tinción da cuenta de la concentración de la proteína)
está mucho mas concentrada y está cerca del polo positivo, por lo
que se sabe que allí es donde comienza la albúmina que es más
pequeña, mas concentrada, y por lo mismo migra más rápido.

Al lado izquierdo de la albúmina se ve una marca muy tenue que

correspondería a la prealbúmina, esto indica que está en una
concentración muy baja y al estar más cerca del polo positivo
indica que está en menor concentración que la albúmina.

La zona de las gamma globulinas es mucho más difusa y menos

definida, se muestra como un bandeo ‘’constante’’, esto da
cuenta de proteínas que son de alto peso molecular.
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Nemotecnia utilizada para recordar las curvas de un proteinograma.

➔ Cabe señalar que el ISP se solicita que ojalá

se logre obtener al menos 6 zonas. En la zona beta
hay un doble pic.
Esto se puede obtener mejorando el gel utilizado.
(Con agarosa se puede obtener mejor resolución)

Esto es importante, (típica pregunta de certamen).

Estas bandas son la sumatoria de las proteínas que van cayendo a medida que van migrando por la diferencia de
voltaje. Si se sabe que la banda mas gruesa corresponde a albúmina, si o si el polo positivo estaría a la izquierda
y contrario a la albúmina estaría la zona de las gamma globulinas.

Pero el bandeo que se encuentra en el centro es propio de la

sumatoria de las proteínas que se encuentran en el plasma que
van migrando según su relación tamaño/carga a medida que van
corriendo en esa diferencia de voltaje.

Algunos ejemplos clásico es el complemento el cual cae en la zona

beta, los anticuerpos como la IgM y la IgG (la mas concentrada y
que da origen al bandeo) se encuentran en la zona .

➔ Sin embargo, la IgA se sale de lo típico y está entre la zona

2, recorre la zona  y después la .
Cuando se observa un aumento en concentración en la zona beta,
muchas veces puede ser por una gammopatía (problema de
anticuerpos) monoclonal relacionada con la IgA.

La proteínas C reactiva (CRP) aumenta hasta 30.000 veces en una situación de inflamación, es parte de las
proteínas de fase aguda. Se encuentra en la zona , por lo mismo en un proceso inflamatorio podríamos tener
una banda en esa zona muy concentrada, y se podría pensar que hay una gammopatía asociada a un aumento
de la zona gamma.

◼ Una gammopatía significa que hay una célula plasmática o linfocito B que esta proliferando de forma
descontrolada y está generando muchos anticuerpos, la cual puede ser una gammopatía monoclonal,
donde hay formación de solo un tipo de anticuerpos o una gammopatía policlonal de muchos tipos de
anticuerpos.
o Puede ocurrir que a una persona que se le realiza una electroforesis de proteínas plasmáticas
presente una banda anómala en la zona  y se deduzca que presenta un cáncer en curso. Sin
embargo, esta puede estar aumentada solo por un cuadro inflamatorio.

La albúmina y la transferrina son proteínas de fase aguda que disminuyen en un cuadro inflamatorio.
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El ISP solicita que los valores de las concentraciones sean reportados

en gr/L

RECOMENDACIONES PARA MÉTODOS ANALÍTICOS DE ELECTROFORESIS DE PROTEÍNAS (Según el ISP)

1. Usar soporte de gel de agarosa o electroforesis capilar.

2. El sistema electroforético debe ser de alta resolución, capaz de detectar pequeñas bandas monoclonales
que puedan co-migrar con proteínas normales particularmente en la zona beta globulinas.
En la zona beta hay anticuerpos que pasan a esta zona. Por lo tanto, el objetivo es mejorar la calidad y
dar diagnósticos más certeros.
3. El acetato de celulosa no es el soporte adecuado para electroforesis por ser de baja resolución.
4. El seguimiento de la concentración del componente monoclonal es válido mientras sea cuantificado por
el mismo método; el laboratorio debe tener acceso a los informes históricos de los pacientes para
comparar la cuantificación realizada en los proteinogramas.
Un paciente presenta ciertos tratamientos o toma medicamentos que modifican el patrón electroforético
de ciertas proteínas. Por ej. si un paciente esta en tratamiento con anticuerpos monoclonales.
5. Las muestras que requieran Inmunofijación deben ser derivados a un laboratorio de especialidad.
La inmunofijación es utilizada para saber que proteína es, por lo que se traspasa ese gel a un soporte de
nitrocelulosa y se incuba con un anticuerpo específico para la proteína que se busca y luego se revela con
un segundo anticuerpo.

RECOMENDACIONES PARA LA CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNA SÉRICA TOTAL

1. Cuantificar proteína sérica total utilizando métodos automatizados

2. La concentración de proteína total se debe expresar en g/L, redondeando el valor al número entero más
cercano.

RECOMENDACIONES PARA LA INFORMACIÓN CUANTITATIVA DE LAS FRACCIONES ELECTROFORÉTICAS

1. El informe de resultados debe incluir a lo menos la cuantificación de: proteína total, albúmina y el
componente monoclonal (si está presente).
2. Las fracciones electroforéticas de proteínas deben expresarse en g/L, redondeando el valor al número
entero más cercano. Las fracciones que se deben informar son:
1. - albúmina 4. - beta globulinas (idealmente beta-1 y
2. - alfa-1 globulinas beta-2)
3. - alfa-2 globulinas 5. - gamma globulinas
3. Los laboratorios debieran interpretar las fracciones de proteínas de acuerdo con sus propios intervalos
de referencia o frente a intervalos de referencia publicados.
4. El informe de resultados debe indicar la metodología analítica utilizada para determinar las fracciones
proteicas.
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EJEMPLO DE ELECTROFORESIS DE PROTEÍNAS PLASMÁTICAS

En esta electroforesis en gel de agarosa con tinción de Amido Black.

➔ El control corresponde a la muestra 6

➔ La muestra 6 presenta una gammopatía, se encuentra una
mancha muy concentrada y ancha, mas incluso que la de la
albúmina. Además, la albúmina se ve menos concentrada que el
estándar.
➔ Se observa la banda de la prealbúmina en todas las
muestras
➔ En la muestra 3 se ve que la zona  está más concentrada.

El equipo realiza un análisis densitométrico haciendo el gráfico antes visto.

En este caso es una tinción con Azul de Cromassie.

➔ Las muestras 1, 2 y 3 son de Líquido encéfalo raquídeo
(LCR), en las que se encuentra la prealbúmina mucho más
concentrada.
➔ Las muestras 4, 5 y 6 son de suero y no se observan
patologías.

჻ No solo se analizan muestras de suero, si no que también de LCR (importantes en ciertas patologías) y de orina
(aquellas proteínas de cadena ligera que no son filtradas por el riñón y pasan a la orina, llamadas proteínas de
Bence Jones)

5 ejemplos de EPP en Acetato de Celulosa:

➔ El 1° se encuentra normal
➔ El 2° se encuentra normal
➔ El 3° se encuentra normal
➔ Hay aumento de algunas proteínas de fase aguda y aumento
policlonal de gama
➔ En el 5° hay gamopatía monoclonal
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PREALBÚMINA, TBPA O TRANSTIRETINA (TTR)

Fracción que migra más rápido que albúmina

• 62,000 Da
• Une tiroxina (Prealbúmina que une tiroxina TBPA)
• Juega un importante rol en metabolismo de Vitamina A
• Corta vida meda (2 días)

La albumina es de alta cantidad, mientras que la prealbúmina es de baja cantidad. La prealbúmina se utiliza para
ver síntomas de nutrición ya que su vida media es de 2 días, no así la albúmina que tiene una vida media de 19
días por lo que puede indicar daño crónico por malnutrición.

ALBÚMINA

• Proteína más abundante en la sangre

• Regula presión oncótica
• Múltiples sitos de unión compuestos endógenos y exógenos

La albúmina presenta una estructura tal que tiene distintos sitios de unión a
distintas drogas, un sitio de unión para ibuprofeno, profolol, sitios de unión
para distintos metales, puede unir bilirrubina, lidocaína (importante
analgésico), es como el Transantiago, ya que es capaz de transportar
muchas cosas. Esto es clave para media la biodistribución, de hecho, se
analizan los fármacos para saber si se unen o no a albúmina.

➔ BISALBUMINEMIA

En este ejemplo de bisalbuminemia, no es que esté aumentada a la

misma cantidad la prealbúmina.

La bisalbuminemia es una rara anomalía congénita o adquirida en las

proteínas séricas, caracterizada por la aparición de un patrón
bicúspide en el espectro electroforético de la albúmina.

➔ ANALBUMINEMIA
Se produce por una mutación en el que no hay síntesis de albúmina.

Sabemos que la albumina es clave en regular la

presión oncótica y podemos creer que esta persona
tiene muchas patologías, pero no es así, de hecho,
aquellas personas que presentan analbuminemia no
presentan problemas de presión oncótica debido a
una compensación de otras proteínas que aumentan
en concentración.
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APLICACION CLINICA DE LA EPP

➔ ¿Cuándo está indicada una electroforesis de proteínas plasmáticas?

o Gamopatías Monoclonales
o Enfermedades Hepáticas
o Enfermedades con Pérdida de Proteínas
o Enfermedades Inflamatorias Agudas y Crónicas
o Defectos Genéticos que afecten a alguna proteína
o Cuando hay alguna prueba de laboratorio alterada como: VSH alta, hipo o hiperproteinemia,
proteinuria marcada

SIGNIFICADOS E INTERPRETACIÓN DE LOS PATRONES ELECTROFORÉTICOS DE PROTEÍNAS PLASMÁTICAS

✓ Albúmina:
Disminuye en concentración cuando las otras fracciones aumentan, a
 y .
✓ -1 y -2

Se encuentran la mayoría de las proteínas de fase aguda y se elevan

de un 50-300% en procesos inflamatorios agudos, pero disminuyen
en hepatitis aguda, enfermedad crónica del hígado activada y
síndromes de pérdidas de proteínas.

✓ Inmunoglobulinas

Estas proteínas tienen la función de anticuerpos y representan la fracción de las g-globulinas y también parte de
la banda de b-globulinas. Su aumento está dentro de las gamopatías que pueden ser:

- Policlonal Enfermedades que activan sistema inmune

- Monoclonal Incremento monoclonal asociado a Mielomas
- Oligoclonal Incremento selectivo de la clase IgG o subclases
de IgG cadena liviana

◼ Se verá en la próxima clase

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PATRÓN ELECTROFORÉTICO DE ALTERACIONES EN EL PROTEINOGRAMA (Pregunta de certamen)

Estos dibujos ejemplifican lo que uno debiera encontrar en ciertas situaciones.

◼ Realizar un patrón electroforético donde se pueda observar un pic aumentado de albúmina, de 1, 1
de la beta o de la gamma.
✓ En inflamación aguda se observa en rojo la zona
1 y 2 aumentados.
✓ En la cirrosis se ve aumentada la albúmina y la
zona  (relacionada con la respuesta inmune)
✓ En el caso del síndrome nefrótico hay disminución
de la albúmina (perdida de la capacidad de reabsorber
albúmina), aumentan las proteínas de fase aguda y las
proteínas relacionadas con las -globulinas.
✓ En la hepatitis hay disminución de casi todas las
zonas, excepto en la zona gamma que aumenta.
✓ En la hipogammaglobulinemia hay perdida de la
zona 
✓ En la inflamación crónica hay aumento de la zona
y
✓ Cuando hay deficiencia de la antitripsina hay
disminución de la zona 1
✓ En el caso de la gammapatia monoclonal se
observa un pic aumentado
✓ En el caso de la gammapatia policlonal se observa
un pic más difuso, pero de mayor intensidad.

¡¡Recordar que las IgA comienzan a correr desde la zona de

las 2-gobulinas!!

Recordar que la proteína C reactiva también cae dentro de la

zona , por lo tanto en presencia de una gammopatía se
debe hacer una electro fijación para confirmar que sea por
aumento de una inmunoglobulina.
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CAMBIOS EN LAS FRACCIONES RELACIONADO A CUADROS PATOLÓGICOS

Perfil de proteínas plasmáticas que permiten orientar el

diagnóstico.
 Esto hay que aprendérselo de memoria.

ORINA

La orina también se puede utilizar y se puede hacer una electroforesis de proteínas de orina.

• Utilizar una muestra de orina de 24 horas y de forma excepcional o que no es posible su recolección
debido a características del paciente, es aceptable el uso de muestra de primera orina de la mañana. El
informe debe consignar el tipo de muestra analizada.
• El informe debe consignar el tipo de muestra analizada; indicando dilución o concentración, según
corresponda.
• Informar la concentración de proteínas totales de la orina, también la indicación de si la muestra tiene
una proteinuria glomerular, tubular o mixta y un comentario sobre si se detecta cadenas livianas libres.

PATRONES NORMALES DE ORINA

Las proteínas plasmáticas en suero y las proteínas en

orina.

Las proteínas en orina se encuentran en muy baja

concentración.

Las proteínas pueden aumentar en:

• Disfunción glomerular
• Sobrecarga de cadenas livianas
• Inflamación

PATRÓN NORMAL DEL LÍQUIDO CEFALORAQUÍDEO

En este caso la prealbúmina se encuentra mucho más

concentrada.