Machine Translated by Google

ENTREGA  
GENES
DE  

Revista  de  publicación  controlada  118  (2007)  118–125
www.elsevier.com/locate/jconrel

Cinética  de  biodistribución  y  expresión  tisular  de  ADN  plasmídico  
complejado  con  polietileniminas  de  diferente  peso  molecular  y  estructura
gil­jae  jeong a
,  Hyang  Min  Byun b ,  Jung  Mogg  Kim C , ho­yoon b
, Han  Gon  Choi d ,
Won  Ki  Kim , Sun  Jae  Kim F,  Yu­Kyoung  Oh  a,
mi

a
Escuela  de  Ciencias  de  la  Vida  y  Biotecnología,  Universidad  de  Corea,  Anam­dong,  Seungbuk­Gu,  Seúl  136­713,  República  de  Corea
b
Facultad  de  Medicina,  Universidad  Pochon  CHA,  Bundang,  República  de  Corea
C
Facultad  de  Medicina,  Universidad  de  Hanyang,  Seúl,  República  de  Corea
d
Facultad  de  Farmacia,  Universidad  de  Yeungnam,  Kyongsan,  República  de  Corea
mi
División  de  Nanociencias,  Universidad  Femenina  Ewha,  Seúl,  República  de  Corea
F
Departamento  de  Nanociencia  e  Ingeniería,  Universidad  de  Sejong,  Seúl,  República  de  Corea

Recibido  el  14  de  agosto  de  2006;  aceptado  el  6  de  diciembre  de  2006
Disponible  en  línea  el  15  de  diciembre  de  2006

Abstracto

La  polietilenimina  (PEI)  se  ha  estudiado  como  un  agente  de  administración  de  genes  in  vitro  e  in  vivo  eficiente  y  versátil.  Aquí,  informamos  el  destino  in  vivo,  la  
duración  de  la  expresión  tisular  y  la  seguridad  después  de  la  inyección  intravenosa  de  ADN  plasmídico  complejado  con  varios  PEI  en  diferentes  condiciones.
El  ADN  del  plásmido  de  interleucina­2  murina  se  acomplejó  con  PEI2Kd  ramificado,  25Kd  o  PEI25Kd  lineal  en  diferentes  proporciones  N/P.  Se  encontró  que  el  tiempo  
medio  de  residencia  del  ADN  plasmídico  se  prolongó  después  de  la  entrega  en  PEI,  evidenciándose  los  valores  más  altos  en  PEI25Kd  ramificado.  En  comparación  
con  PEI25Kd  ramificado,  PEI25Kd  lineal  con  la  misma  relación  N/P  proporcionó  niveles  de  expresión  de  ARNm  de  órdenes  de  magnitud  superiores  en  el  pulmón  
durante  un  período  de  8  días.  En  los  complejos  PEI2Kd/DNA  ramificados,  la  relación  N/P  de  80:1  evidenció  una  mayor  eficiencia  de  expresión  génica  en  riñón  y  bazo  
que  la  relación  N/P  normal  de  10:1.  La  generación  de  receptores  de  quimiocinas  proinflamatorias  fue  inducida  por  PEI25Kd  ramificado,  pero  no  por  otras  PEI.
Los  complejos  de  ADN  con  PEI  25Kd  lineal  o  PEI2Kd  ramificado  no  mostraron  cambios  histológicos  después  de  administraciones  repetidas.  Estos  resultados  indican  
que  la  estructura,  el  peso  molecular  y  las  proporciones  N/P  de  los  PEI  deben  considerarse  y  modularse  colectivamente  para  el  suministro  de  ADN  plasmídico  dirigido  
a  órganos.  ©  
2007  Elsevier  BV  Todos  los  derechos  reservados.

Palabras  llave:  Polietilenimina;  Entrega  de  genes  no  virales;  biodistribución;  Bajo  peso  molecular;  Seguridad

1.  Introducción asociados  con  vectores  virales,  y  combinan  la  falta  de  respuesta  inmune  con  
la  facilidad  de  formulación  [5,6].
Los  sistemas  de  entrega  de  genes  actualmente  disponibles  se  pueden   Entre  los  vectores  no  virales  catiónicos  conocidos,  la  polietilenimina  
clasificar  en  sistemas  virales  y  no  virales  [1].  En  general,  se  ha  demostrado   (PEI)  ha  sido  evaluada  con  respecto  a  su  eficacia  como  un  sistema  de  
que  los  vectores  virales  dan  como  resultado  niveles  significativamente  más   transfección  versátil,  económico  y  útil  [7].  In  vivo,  se  ha  demostrado  que  la  
altos  de  expresión  génica  que  los  observados  con  vectores  no  virales  [2,3].   PEI  es  un  vector  de  transfección  eficiente  en  varios  órganos,  incluidos  el  
A  pesar  de  estas  impresionantes  estadísticas  de  transferencia  de  genes,  la   hígado  y  los  pulmones,  y  evidencia  una  cinética  prolongada  de  retención  de  
principal  preocupación  sin  resolver  sigue  siendo  la  toxicidad  de  los  virus  y  el   órganos  [8].  Hasta  ahora,  en  la  mayoría  de  los  estudios  que  involucran  PEI,  
potencial  para  generar  una  fuerte  respuesta  inmune,  debido  a  las  proteínas   los  PEI  utilizados  con  mayor  frecuencia  tenían  un  tamaño  en  un  rango  entre  
de  la  cápside  relevantes  [4].  Mientras  tanto,  se  ha  teorizado  el  uso  de   22­25  Kd  y  tenían  una  estructura  ramificada  o  lineal.  Con  respecto  a  los  
sistemas  de  entrega  no  virales  para  sortear  algunos  de  los  problemas efectos  de  la  estructura  de  PEI,  estudios  recientes  han  reportado  que  PEI  
ramificado  y  lineal  (mw
22–25Kd)  pueden  diferir  en  términos  de  la  eficiencia  de  transfección  de  genes  
Autor  correspondiente.  Teléfono:  +82  2  3290  3413;  fax:  +82  2  929  3413. en  algunas  líneas  celulares,  o  después  de  la  administración  por  aerosol  
Dirección  de  correo  electrónico:  ohyk@korea.ac.kr  (Y.­K.  Oh). [9,10].  En  términos  de  tamaño,  PEI2Kd  de  peso  molecular  más  bajo  (mw  2Kd)  fue

0168­3659/$  ­  ver  portada  ©  2007  Elsevier  BV  Todos  los  derechos  reservados.  doi:10.1016/
j.jconrel.2006.12.009
Machine Translated by Google

G.­J.  Jung  et  al. /  Revista  de  publicación  controlada  118  (2007)  118–125 119

demostró  ser  más  seguro  y  eficaz  para  la  administración  de  genes  en  células   (Photal,  Osaka,  Japón).  Los  diámetros  hidrodinámicos  de  las  partículas  se  
ENTREGA  
GENES
DE  

progenitoras  hematopoyéticas,  incluidas  las  células  CD34  humanas  y  Sca  I   determinaron  mediante  dispersión  de  luz  dinámica  con  láser  He­Ne  (10  mW).  
murinas,  que  PEI25Kd  (mw  25Kd)  [11 ].  Se  ha  informado  que  una  fracción   El  análisis  de  datos  se  realizó  utilizando  un  paquete  de  software  (software  
de  polietilenimina  (PEI)  de  bajo  peso  molecular  muestra  una  mayor  eficiencia   ELS­8000)  suministrado  por  el  fabricante.
de  transfección  de  ADN  en  células  de  carcinoma  [12].  Además,  se  determinó  
que  la  eficiencia  de  la  expresión  génica  se  ve  afectada  significativamente  
por  las  proporciones  de  nitrógeno  PEI  a  fosfato  de  ADN  (N/P)  entre  PEI  y   2.3.  Preparación  de  muestras  biológicas
ADN  plasmídico  en  varias  líneas  celulares  [13,14].  Sin  embargo,  hasta  ahora  
se  ha  recopilado  poco  conocimiento  sobre  los  efectos  de  los  pesos   Se  usaron  ratones  ICR  a  las  5­6  semanas  de  edad.  Se  utilizaron  ratones  
moleculares  y  los  tipos  de  PEI  en  el  destino  in  vivo  y  los  niveles  de  expresión   hembra  ICR  para  la  mayoría  de  los  experimentos  realizados  en  este  estudio.
del  ADN  plasmídico  después  de  la  administración  sistémica. Se  emplearon  ratones  macho  ICR  para  determinar  la  distribución  y  expresión  
del  ADN  plasmídico  en  los  testículos.
En  este  estudio,  nuestro  objetivo  fue  aumentar  la  comprensión  del   Los  animales  recibieron  alimento  y  agua  ad  libitum.  Se  administró  por  vía  
destino  in  vivo  del  ADN  plasmídico  entregado  por  varios  PEI.  Aquí,  hemos   intravenosa  ADN  de  plásmido  (50  µg)  en  forma  desnuda  o  complejos  de  PEI  
evaluado  la  biodistribución,  la  cinética  de  expresión  de  órganos  y  la  inducción   en  las  venas  de  la  cola  de  los  ratones  usando  una  jeringa  de  insulina  de  
de  receptores  de  quimiocinas  proinflamatorias  en  varios  órganos  después   calibre  30.  En  varios  puntos  de  tiempo  después  de  la  administración  de  ADN  
de  la  entrega  de  genes  utilizando  las  formas  ramificadas  o  lineales  de  PEI  de   plasmídico,  se  recogieron  aproximadamente  50  μl  de  sangre  de  la  vena  de  
diferentes  tamaños. la  cola  de  cada  ratón,  utilizando  un  tubo  capilar  de  1,1  mm  de  diámetro.  El  
ADN  sérico  total  se  extrajo  con  el  reactivo  DNAzol  (Invitrogen,  Carlsbad,  CA,  
2.  Métodos  y  materiales EE.  UU.),  de  acuerdo  con  las  instrucciones  del  fabricante.  Para  el  estudio  de  
biodistribución,  se  sacrificaron  los  ratones  y  se  extrajeron  sus  órganos.  En  
2.1.  ADN  plásmido un  intento  por  minimizar  la  influencia  del  ADN  plasmídico  en  la  sangre  que  
circulaba  por  los  tejidos  en  el  momento  de  la  toma  de  muestras,  las  muestras  
El  plásmido  de  ADN  que  codifica  la  interleucina­2  murina  (mIL­2)  bajo  el   se  lavaron  minuciosamente  varias  veces  con  solución  salina,  luego  se  
control  del  promotor  de  citomegalovirus  (pVAXmIL  2)  se  construyó  mediante   secaron  y  pesaron.  Luego,  las  muestras  se  suspendieron  en  DNAzol®  
la  inserción  del  gen  mIL­2  de  529  pb  de  pCIneoIL­2  en  el  vector  de  expresión   (Gibco  BRL,  NY,  EE.  UU.)  a  una  concentración  de  50  mg  de  tejido  por  ml  y  
pVAX1  (Invitrogen,  Carlsbad ,  CA,  EE.  UU.)  utilizando  las  enzimas  de   se  homogeneizaron  utilizando  un  homogeneizador  IKA  Ultra­Turrax  T8  
restricción  NheI  y  BamHI  [14].  El  patrón  interno  del  competidor,  pVAXdmIL­2,   (Alemania).  Luego,  los  homogeneizados  (500  μl)  se  cargaron  en  columnas  
un  mutante  de  pVAXmIL­2  delecionado  en  173  pb,  se  construyó  mediante  la   de  limpieza  de  ADN  Wizard®  (Promega,  WI,  EE.  UU.).  Después  del  lavado,  
inserción  del  fragmento  parcial  de  356  pb  del  gen  mIL­2  de  pCIneoIL  2  en  el   el  ADN  se  eluyó  con  50  μl  de  tampón  TE.
vector  pVAX1,  utilizando  NheI  y  Sitios  HindIII  [14].

El  ADN  del  plásmido  se  amplificó  en  Escherichia  coli  DH5α  y  se  purificó  con  
un  kit  de  preparación  Qiagen  Giga  (Qiagen,  Valencia,  CA,  EE.  UU.).  La   2.4.  Reacción  en  cadena  de  la  polimerasa  (PCR)  cuantitativa  y  competitiva
pureza  de  las  preparaciones  de  ADN  se  confirmó  mediante  electroforesis  en  
gel  de  agarosa  al  1%.
Se  empleó  la  reacción  en  cadena  de  la  polimerasa  (PCR)  cuantitativa  y  
2.2.  Formación  de  complejos  PEI/ADN  y  medición  del  tamaño competitiva  para  determinar  los  niveles  de  ADN  plasmídico  en  las  muestras  
biológicas.  La  PCR  competitiva  se  realizó  mediante  la  adición  de  varias  
Se  prepararon  complejos  PEI/mIL­2  de  varias  proporciones  N/P  mediante   cantidades  del  competidor  estándar  interno,  pVAXdmIL­2,  a  las  mezclas  de  
la  adición  de  las  cantidades  apropiadas  de  PEI  (ramificado  2Kd  y  25Kd,   reacción  que  contenían  1  μl  de  muestra  de  ADN  de  concentración  
Sigma  Aldrich,  Saint  Louis,  MO,  EE.  UU.;  lineal  25  Kd,  Polyscience,   desconocida.  Los  cebadores  utilizados  para  la  PCR  competitiva  fueron  los  
Warrington,  PA,  EE.  UU.)  al  ADN  del  plásmido  mIL­2.  Las  soluciones  madre   descritos  anteriormente  [14].  La  PCR  se  realizó  en  un  volumen  final  de  50  μl  
de  PEI  se  prepararon  a  4,3  mg/ml  en  agua  destilada  [15].  La  solución  se   que  contenía  1  μl  de  ADN  de  muestra,  1  μl  del  plásmido  competidor,  4  μl  de  
acidificó  ligeramente  a  un  pH  de  5,0  usando  HCl  y  se  filtró  con  una  membrana   dNTP  2,5  mM,  5  μl  de  tampón  de  reacción  10x  (Tris  50  mM  pH  8,0,  NaCl  
de  policarbonato  de  0,2  μm.  Las  proporciones  N/P,  la  proporción  de  nitrógeno   100  mM,  0,1  EDTA  mM,  ditiotreitol  1  mM,  glicerol  al  50  %  y  Triton  X­100  al  1  
de  PEI  por  residuo  de  fosfato  de  ADN  plasmídico,  se  calcularon  en  función   %),  10  pmol  de  cada  cebador  y  1  U  de  Taq  polimerasa.  La  amplificación  por  
de  la  cantidad  de  nitrógeno  de  PEI  por  fosfato  de  ADN  (1  μg  de  ADN  es  3   PCR  se  realizó  calentando  la  mezcla  a  94  °C  durante  5  min,  seguido  de  33  
nmol  de  fosfato,  y  1  μl  de  solución  madre  de  PEI  contiene  10  nmol  de   ciclos  a  95  °C  durante  40  s,  56  °C  durante  30  s  y  72  °C  durante  30  s,  y  luego  
nitrógeno  amínico)  [15].  Para  la  formación  de  complejos,  el  ADN  del  plásmido   a  72  °C  durante  10  minutos.  Los  productos  de  PCR  se  separaron  en  gel  de  
se  diluyó  en  NaCl  150  mM  hasta  una  concentración  final  de  10  µg/ml,  y  se   agarosa  al  2%.  La  densidad  de  cada  banda  se  midió  con  un  analizador  de  
añadió  la  solución  madre  de  PEI  en  diferentes  volúmenes.  La  mezcla  (100   imágenes  Gel  doc  (Vilber  Lourmat,  Francia),  y  se  utilizaron  curvas  de  
μl)  se  agitó  inmediatamente  durante  10  s  y  se  incubó  durante  30  min  a   calibración  para  cuantificar  el  ADN  diana  en  las  muestras.
temperatura  ambiente.

Los  tamaños  de  partícula  de  los  complejos  PEI/ADN  se  determinaron   En  cada  ejecución  de  PCR  competitiva,  se  obtuvo  una  curva  estándar  interna  
con  un  láser  dinámico  de  dispersión  de  luz  ELS­8000. mediante  el  trazado  de  los  valores  logarítmicos  de  objetivo/competidor
 Machine Translated by Google

120 G.­J.  Jung  et  al. /  Revista  de  publicación  controlada  118  (2007)  118–125

tabla  1
ENTREGA  
GENES
DE  
RT­PCR  cuantitativa,  usando  el  estándar  sintético  mIL­2  RNA  [17].  
Propiedades  fisicoquímicas  y  tamaños  de  varios  complejos  PEI/DNA
Cebadores  específicos  (directo,  5′­GTC  AAC  AGC  GCA  CCC  ACT  TCAA  
estructura  PEI Peso  molecular relación  N/P Tamaño  (nm)  ±  SEM GC­3′;  inverso,  5′­GCT  TGT  TGA  GAT  GAT  GCT
Rama PEI2Kd 10:1   3035,0  ±  665,3  
Rama PEI2Kd 80:1   660,9  ±  115,3  
Rama PEI25Kd 10:1   793,9  ±  97,7  
Lineal PEI25Kd 10:1 45445,7±  11954,2

Los  tamaños  de  partículas  de  los  complejos  PEI/ADN  se  determinaron  utilizando  un  sistema  
dinámico  de  dispersión  de  luz  láser.

relaciones  de  densidad  frente  a  las  cantidades  logarítmicas  del  plásmido  
patrón  interno  añadido  inicialmente  a  la  reacción.

2.5.  Análisis  farmacocinético

Los  perfiles  de  concentración  en  sangre  de  cada  ADN  de  plásmido  
después  del  suministro  en  diversas  formas  se  analizaron  mediante  un  
método  no  compartimental.  El  área  bajo  la  curva  (AUC)  se  calculó  durante  
90  min  utilizando  el  software  WinNonlin  4.0.1  (Pharsight,  CA,  EE.  UU.).  El  
tiempo  medio  de  residencia  se  determinó  dividiendo  el  área  bajo  la  curva  
de  impulso  por  el  AUC  [16].

2.6.  Mediciones  cuantitativas  de  la  expresión  génica.

Los  niveles  de  expresión  de  ARNm  de  mIL­2  en  las  muestras  de  sangre  
o  tejido  se  midieron  mediante  RT  PCR  cuantitativa  y  competitiva.  Para  
aislar  el  ARN  de  la  sangre  completa,  se  recolectó  sangre  de  las  venas  de  
la  cola  de  los  ratones  experimentales  con  un  tubo  capilar,  luego  se  trató  
con  TRIzol  (Invitrogen,  Carlsbad,  CA,  EE.  UU.)  de  acuerdo  con  las  
instrucciones  del  fabricante.  Para  extraer  el  ARN  de  los  tejidos,  se  añadió  
TRIzol  a  las  muestras  de  tejido  a  una  concentración  de  100  mg  de  tejido  
por  ml.  Los  niveles  de  ARNm  de  mIL­2  se  determinaron  mediante

Fig.  2.  Distribución  en  órganos  y  sistema  linfático  del  ADN  plasmídico  después  del  suministro  
en  varios  complejos  de  PEI.  Se  administró  por  vía  intravenosa  ADN  de  plásmido  (50  µg)  en  
forma  desnuda  o  complejos  de  PEI  a  ratones  (6  ratones/grupo).  Los  niveles  tisulares  de  ADN  
Fig.  1.  Farmacocinética  del  ADN  plasmídico  después  del  suministro  en  varios  complejos  de   plasmídico  se  midieron  a  los  15  min  (A),  1  día  (B)  y  3  días  (C)  después  de  la  administración.  
PEI.  Se  administró  por  vía  intravenosa  a  ratones  (6  ratones/  grupo).  En  los  puntos  de  tiempo   En  los  puntos  de  tiempo  indicados,  los  niveles  de  ADN  plasmídico  en  los  tejidos  se  evaluaron  
indicados,  los  niveles  de  ADN  plasmídico  en  la  sangre  se  determinaron  mediante  PCR   mediante  PCR  cuantitativa.   :  significativamente  diferente  de  los  otros  grupos  en  el  mismo  
cuantitativa.  ‡:  significativamente  diferente  de  los  otros  grupos  en  el  mismo  punto  de  tiempo   tejido  (Pb0.001,  ANOVA  y  prueba  de  comparación  múltiple  de  Student­Newman  Keuls);   :  
(P  =  0,002,  ANOVA  y  prueba  de  Student­Newman­Keuls).   :  Significativamente  diferente  de   significativamente  diferente  de  los  otros  grupos  en  el  mismo  tejido  (Pb0.01,  ANOVA  y  prueba  
los  otros  grupos  en  el  mismo  punto  de  tiempo  (Pb0.001,  ANOVA  y  prueba  de  comparación   de  comparación  múltiple  de  Student­Newman­Keuls);  ‡:  significativamente  diferente  de  los  
múltiple  de  Student­Newman­Keuls). otros  grupos  en  el  mismo  tejido  (Pb0.05,  ANOVA  y  prueba  de  comparación  múltiple  de  Student­
Newman­Keuls).
Machine Translated by Google

G.­J.  Jung  et  al. /  Revista  de  publicación  controlada  118  (2007)  118–125 121

TTG  ACA­3')  para  generar  un  producto  de  PCR  de  451  pb  para  mIL­2  y  un  producto  
ENTREGA  
GENES
DE  

de  640  pb  para  el  competidor  sintético.
Las  curvas  de  calibración  se  generaron  como  se  describe  anteriormente.

2.7.  Expresión  de  CCR3  y  CCR5  en  tejidos

Los  niveles  de  expresión  de  los  receptores  de  quimiocinas  CC,  CCR3  y  CCR5,  
se  midieron  en  los  tejidos  mediante  RT­PCR.  Los  ratones  se  trataron  por  vía  
intravenosa  con  complejos  PEI2K/DNA  o  PEI25K/DNA  dos  veces  por  semana  
durante  tres  semanas  consecutivas.  Se  extrajeron  los  órganos  de  los  ratones  y  se  
extrajo  el  ARN  total  de  los  tejidos  utilizando  el  reactivo  TRIzol®  (Gibco  BRL,  NY,  EE.  

UU.).  Se  transcribió  inversamente  un  μg  de  ARN  total  y  se  amplificó  mediante  PCR  
usando  cebadores  específicos  para  los  receptores  murinos  CCR3  o  CCR5  como  se  
describió  previamente  [18].  La  misma  cantidad  de  cDNA  fue  amplificada  por  PCR  
para  GAPDH,  como  se  describió  previamente  [8].

2.8.  Histología

Los  complejos  de  PEI/ADN  se  administraron  por  vía  intravenosa  a  los  ratones  
en  dosis  de  ADN  de  50  μg,  dos  veces  por  semana  durante  3  semanas  consecutivas.  
Los  tejidos  se  fijaron  durante  24  h  a  4  °C  en  paraformaldehído  al  4  %  recién  
preparado  en  PBS.  Se  realizó  una  evaluación  histopatológica  en  secciones  de  tejido  
de  los  diversos  órganos  incluidas  en  parafina  y  teñidas  con  hematoxilina  y  eosina.

2.9.  Estadísticas

Los  análisis  estadísticos  se  realizaron  utilizando  ANOVA.  Se  consideró  
significativo  un  valor  de  p  inferior  a  0,05.
Se  utilizó  la  prueba  de  comparación  múltiple  de  Student­Newman­Keuls  como  
prueba  post­hoc.  Como  paquete  de  software  estadístico  se  utilizó  SigmaStat  versión  
3.5  para  Windows  (Systat  Software,  Inc.,  Point  Richmond,  CA,  EE.  UU.).

3.  Resultados

3.1.  Farmacocinética  del  ADN  plasmídico  administrado  en  complejos  PEI

Independientemente  de  los  pesos  y  estructuras  moleculares,  se  descubrió  que  
la  complejación  de  PEI  prolonga  el  tiempo  de  circulación  del  ADN  plasmídico  en  la  
sangre.  Las  condiciones  de  complejación  del  ADN  plasmídico  con  PEI  y  los  tamaños  
de  los  complejos  PEI/ADN  se  proporcionan  en  la  Tabla  1.  Como  se  muestra  en  la  
Fig.  1,  después  de  la  administración  intravenosa  de  ADN  plasmídico  desnudo,  los  
niveles  de  ADN  plasmídico  disminuyeron  más  rápidamente  y  no  se  detectaron  
después  de  20  min.  A  modo  de  contraste,  todo  el  ADN  plasmídico  complejado  con  
varios  PEI  evidenció  niveles  sanguíneos  sustanciales  hasta  los  90  min.

Fig.  3.  Cinética  de  expresión  de  ADN  plasmídico  en  órganos  después  del  suministro  
en  complejos  PEI.  Después  de  la  administración  de  varios  complejos  de  PEI/ADN  a  
cada  grupo  (6  ratones/grupo),  se  estudiaron  los  niveles  de  expresión  de  ADN  
plasmídico  en  hígado  (A),  pulmón  (B),  riñón  (C)  y  bazo  (D).  Tras  la  administración  
intravenosa  de  ADN  plasmídico  (50  μg)  en  forma  desnuda  o  en  complejos  PEI,  se  
recogieron  las  muestras.  Los  niveles  de  ARNm  de  mIL­2  se  evaluaron  mediante  RT­
PCR  cuantitativa.   :  significativamente  diferente  de  los  otros  grupos  en  el  mismo  
punto  de  tiempo  (Pb0.001,  ANOVA  y  prueba  de  comparación  múltiple  de  Student­Newman­Keuls
 Machine Translated by Google

122 G.­J.  Jung  et  al. /  Revista  de  publicación  controlada  118  (2007)  118–125

ENTREGA  
GENES
DE   (Fig.  2B)  y  3  días  después  de  la  dosis  (Fig.  2C),  los  niveles  de  plásmido  en  
el  hígado  fueron  164  y  52  veces  más  altos  en  el  grupo  tratado  con  PEI25Kd  
ramificado  (proporción  N/P,  10:1)  en  comparación  al  grupo  que  recibió  
PEI2Kd  ramificado  en  la  misma  relación  N/P,  respectivamente.
En  segundo  lugar,  la  distribución  de  órganos  estuvo  influenciada  por  el  tipo  
de  PEI.  Con  una  relación  N/P  de  10:1,  el  25Kd  lineal  exhibió  niveles  de  ADN  
de  plásmido  pulmonar  de  órdenes  de  magnitud  más  altos  que  los  observados  
con  el  25Kd  ramificado,  con  una  distribución  225,  1550  y  64  veces  mayor  a  
los  15  min,  1  día,  y  3  días  después  de  la  dosis,  respectivamente  (Fig.  2).  A  
diferencia  de  lo  que  se  observó  en  el  pulmón,  el  hígado  evidenció  una  mayor  
retención  de  ADN  plasmídico  después  del  parto  en  la  forma  de  PEI  ramificada  
que  en  la  forma  lineal.  En  el  hígado,  los  niveles  de  ADN  del  plásmido  fueron  
29  y  44  veces  mayores  al  día  1  (Fig.  2B)  y  3  días  (Fig.  2C)  después  de  la  
administración  en  la  PEI  ramificada  de  25  kd,  en  comparación  con  la  forma  lineal.
En  tercer  lugar,  en  los  complejos  PEI2Kd/ADN  de  bajo  peso  molecular,  las  
Fig.  4.  Cinética  de  expresión  del  ADN  plasmídico  en  el  ovario  después  del  parto  en  
proporciones  N/P  entre  PEI  y  ADN  influyeron  en  los  patrones  de  distribución  
varios  complejos  de  PEI.  Se  administró  por  vía  intravenosa  ADN  de  plásmido  (50  µg)  
en  forma  desnuda  o  en  complejos  de  PEI  a  ratones  (6  ratones/grupo).  Se  midieron   in  vivo.  Los  complejos  ramificados  PEI2Kd/ADN  (relación  N/P,  80:1)  
los  niveles  de  ARNm  de  mIL­2  tisular  durante  8  días.  En  los  puntos  indicados,  los   evidenciaron  niveles  de  ADN  319  y  7  veces  mayores  en  riñón  y  bazo  que  los  
niveles  de  ARNm  de  mIL  2  se  determinaron  mediante  RT­PCR  cuantitativa.   :   observados  con  los  complejos  ramificados  PEI2Kd/ADN  (relación  N/P,  10:1 )  
Significativamente  diferente  de  los  grupos  tratados  con  ADN  desnudo,  los  complejos  
a  los  15  min  después  de  la  dosis  (Fig.  2A),
de  PEI  ramificado  (2Kd)  y  ADN  en  la  relación  N/P  de  10:1,  o  con  los  complejos  de  PEI  
lineal  (25Kd)  y  ADN  en  el  N/P  relación  de  10:1  (Pb0.001,  ANOVA  y  prueba  de  
comparación  múltiple  de  Student­Newman­Keuls).

después  de  la  administración.  Aunque  una  variedad  de  complejos  PEI/DNA  
evidenciaron  diferentes  perfiles  farmacocinéticos  de  ADN  plasmídico,  todo  el  
ADN  plasmídico  complejado  con  los  diversos  PEI  mostró  consistentemente  
una  disminución  rápida  durante  la  fase  inicial,  seguida  de  una  reducción  
gradual  más  lenta  durante  la  fase  de  eliminación.
El  tiempo  medio  de  residencia  del  ADN  del  plásmido  se  vio  afectado  por  
el  tipo  y  las  proporciones  N/P  de  los  complejos  de  PEI  y  ADN.  El  tiempo  
medio  de  residencia,  que  se  calculó  mediante  la  división  del  área  bajo  la  
curva  de  momento  por  el  AUC[16],  fue  en  el  siguiente  orden:  complejos  
PEI25Kd/ADN  ramificados  (relación  N/P,  10:1)N  PEI25Kd/  lineal  Complejos  
de  ADN  (10:1)  Ncomplejos  de  PEI2K/ADN  ramificados  (10:1)N  complejos  de  
PEI2K/ADN  ramificados  (80:1)N  ADN  de  plásmido  desnudo.  El  tiempo  medio  
de  residencia  del  ADN  plasmídico  administrado  en  complejos  con  el  PEI25Kd  
ramificado  en  una  relación  N/P  de  10:1  fue  de  10,93  ±  5,67  min,  valor  4,3  
veces  superior  al  observado  cuando  el  ADN  se  administró  en  su  forma  
desnuda. .  De  acuerdo  con  los  valores  prolongados  del  tiempo  medio  de  
residencia,  los  niveles  sanguíneos  de  ADN  plasmídico  fueron  más  de  3  
órdenes  de  magnitud  superiores  en  el  grupo  tratado  con  PEI25Kd/ADN  
ramificado  (10:1)  en  comparación  con  lo  observado  en  el  grupo  tratado  con  
PEI2Kd  ramificado. /ADN  (10:1),  30  min  post­administración.

3.2.  Distribución  en  órganos  y  sistemas  linfáticos  del  ADN  plasmídico  
proporcionado  en  complejos  PEI

Se  descubrió  que  los  patrones  de  distribución  y  retención  del  ADN  
plasmídico  en  varios  órganos  y  en  el  sistema  linfático  se  ven  afectados  por  
varios  factores,  incluidos  el  peso  molecular,  la  estructura  y  la  relación  N/P.   Fig.  5.  Niveles  de  expresión  de  CCR3  y  CCR5  en  diversos  tejidos  tras  administraciones  
Primero,  los  patrones  de  distribución  de  órganos  del  ADN  plasmídico  estaban   repetidas  de  complejos  PEI/ADN.  Se  administró  por  vía  intravenosa  ADN  de  plásmido  
(50  µg)  en  forma  desnuda  o  complejos  de  varios  PEI  a  ratones  dos  veces  por  semana  
influenciados  por  los  pesos  moleculares  de  los  PEI.  De  los  PEI  ramificados  
durante  3  semanas  consecutivas  (4  ratones/grupo).  Los  niveles  de  expresión  de  
complejados  con  ADN  en  la  misma  relación  N/P  (10:1),  PEI25Kd  evidenció  
CCR3  (A)  y  CCR5  (B)  se  normalizaron  con  GAPDH.   :  Significativamente  diferente  
una  retención  prolongada  de  ADN  plasmídico  en  el  hígado,  en  comparación   de  los  otros  grupos  en  el  mismo  tejido  (Pb0.001,  ANOVA  y  prueba  de  comparación  
con  PEI2Kd  (Fig.  2 ) .  al  día  1 múltiple  de  Student­Newman  Keuls).
Machine Translated by Google

G.­J.  Jung  et  al. /  Revista  de  publicación  controlada  118  (2007)  118–125 123

ENTREGA  
GENES
DE  

Fig.  6.  Micrografías  ópticas  de  los  órganos  tras  administraciones  repetidas  de  complejos  PEI/DNA.  Después  de  la  administración  repetida  de  complejos  PEI/ADN  dos  veces  por  semana  
durante  3  semanas  consecutivas,  los  ratones  fueron  sacrificados.  Los  ratones  no  tratados  se  usaron  como  control  (5  ratones/grupo).  Los  tejidos  se  fijaron  en  paraformaldehído.  Se  realizó  
una  evaluación  histopatológica  en  secciones  de  tejido  incluidas  en  parafina,  teñidas  con  hematoxilina  y  eosina  de  cada  órgano.

respectivamente.  Tres  días  después  de  la  dosis  (Fig.  2C),  notamos  una   los  diversos  complejos  PEI/ADN.  A  diferencia  de  los  patrones  de  expresión  
mayor  retención  de  ADN  plasmídico  en  el  bazo  después  del  parto  en  PEI2Kd   observados  en  el  hígado,  los  niveles  de  ARNm  en  el  pulmón  se  vieron  
con  una  relación  N/P  de  80:1. afectados  significativamente  por  el  tipo  de  PEI  complejado  con  ADN  
plasmídico,  mostrando  los  niveles  más  altos  de  ARNm  después  del  
3.3.  Cinética  de  expresión  del  ADN  plasmídico  en  varios  órganos. suministro  en  PEI25Kd  lineal  (Fig.  3B ) .  En  el  riñón,  los  niveles  más  altos  
de  expresión  de  ARNm  se  observaron  después  de  la  administración  de  
De  manera  similar  a  lo  que  se  determinó  con  respecto  al  patrón  de   ADN  en  PEI2Kd  ramificado  en  una  relación  N/P  de  80:1  (Fig.  3C).  En  el  
distribución  del  ADN  plasmídico,  la  cinética  de  expresión  de  la  IL­2  codificada   bazo,  los  niveles  de  expresión  de  ARNm  fueron  más  prolongados  en  el  
en  pVAXmIL­2  estuvo  influenciada  por  los  pesos  moleculares  y  las   grupo  tratado  con  PEI2Kd  ramificado  en  una  relación  N/P  de  80:1  (Fig.  3D).
estructuras  de  las  PEI.  Dado  que  el  hígado,  los  pulmones,  los  riñones  y  el  
bazo  evidenciaron  niveles  relativamente  más  altos  de  retención  de  ADN   3.4.  Expresión  de  ADN  plasmídico  en  ovario
plasmídico  hasta  3  días  después  de  la  dosis  (Fig.  2C),  se  evaluó  la  cinética  
de  expresión  del  ADN  plasmídico  en  estos  órganos  durante  los  8  días   Dada  la  importancia  de  la  seguridad  para  los  órganos  reproductores,  se  
posteriores  a  la  administración.  En  el  hígado,  se  encontró  que  los  niveles   evaluaron  los  patrones  de  expresión  del  ADN  plasmídico  en  el  ovario  tras  la  
de  expresión  de  mIL­2  eran  más  de  3  órdenes  de  magnitud  más  altos  1  día   administración  intravenosa  de  ADN  plasmídico  complejado  con  varios  PEI.  
después  de  la  entrega  de  ADN  de  plásmido  en  varios  complejos  de  PEI  que   De  manera  similar  a  lo  observado  con  los  patrones  de  expresión  en  otros  
lo  que  se  observó  después  de  la  administración  de  ADN  en  forma  desnuda   órganos,  los  niveles  de  expresión  de  mIL­2  en  el  ovario  difirieron  
(Fig.  3A ) .  Además,  1  día  después  de  la  administración,  no  detectamos   significativamente  entre  los  grupos  tratados  con  PEI  de  diferentes  
diferencias  significativas  en  los  niveles  de  ARNm  de  mIL­2  en  el  hígado  entre propiedades  (Fig.  4).  No
 Machine Translated by Google

124 G.­J.  Jung  et  al. /  Revista  de  publicación  controlada  118  (2007)  118–125

ENTREGA  
GENES
DE  
La  expresión  de  ARNm  se  detectó  en  el  ovario  después  del  parto  en  forma   Entre  varios  complejos  PEI/ADN,  los  complejos  lineales  PEI25Kd/ADN  
desnuda.  Los  niveles  de  expresión  alcanzaron  su  punto  máximo  4  días   evidenciaron  una  distribución  de  ADN  y  perfiles  de  expresión  de  ARNm  
después  de  la  administración  de  ADN  plasmídico  en  complejos  con   más  eficientes  en  el  pulmón  (Figs.  2,  3).  En  particular,  observamos  niveles  
PEI25Kd  ramificado  en  una  relación  N/P  de  10:1,  o  con  PEI2Kd  ramificado   más  altos  de  distribución  en  el  pulmón  a  partir  de  los  15  min  después  de  la  
en  una  relación  N/P  de  80:1.  8  días  después  de  la  inyección,  la  expresión   administración  de  los  complejos  lineales  PEI25Kd/DNA  que  con  cualquiera  
de  mIL­2  en  el  ovario  se  detectó  solo  en  estos  dos  grupos. de  los  otros  complejos  PEI/DNA  (Fig.  2A ) .  Es  posible  que  sea  necesario  
dilucidar  más  los  mecanismos  subyacentes  al  suministro  pulmonar  
3.5.  Histología  y  la  inducción  de  la  expresión  del  receptor  de  quimiocinas   preferencial  y  rápido  por  PEI25Kd  lineal.  Sin  embargo,  se  puede  especular  
proinflamatorias  después  de  la  administración  repetida  de  complejos  PEI/ que  la  alta  distribución  de  ADN  plasmídico  en  el  pulmón  podría  estar  
ADN relacionada,  en  parte,  con  el  rápido  cruce  de  las  barreras  epiteliales  
pulmonares  por  complejos  PEI/ADN  lineales  administrados  por  vía  
Para  evaluar  la  seguridad  tras  administraciones  repetidas  de  complejos   intravenosa  [21] .
PEI/ADN,  evaluamos  la  inducción  de  receptores  de  quimiocinas   Además,  un  estudio  reciente  demostró  que  las  microesferas  de  ácido  
proinflamatorios.  Se  determinó  que  los  niveles  de  expresión  de  los   poli(láctico­co  glicólico)  con  un  tamaño  de  partícula  relativamente  grande  
receptores  de  quimioquinas  CC,  CCR5  y  CCR3,  eran  marcadores   de  12,8  μm  podrían  ser  aplicables  para  el  cisplatino  dirigido  a  los  pulmones  
bioquímicos  para  la  posible  inducción  de  inflamación. [22].  Teniendo  en  cuenta  que  los  materiales  de  mayor  tamaño  tienden  a  
PEI25Kd  ramificado  evidenció  una  inducción  significativa  tanto  de  CCR3   distribuirse  fácilmente  al  pulmón,  existe  la  posibilidad  de  que  los  tamaños  
como  de  CCR5  en  el  riñón  después  de  administraciones  repetidas  (Fig.  5).   más  grandes  de  los  complejos  de  PEI25Kd/ADN  lineales  que  los  de  otros  
Sin  embargo,  con  la  excepción  de  PEI25Kd  ramificado,  ningún  otro  PEI   complejos  puedan  contribuir  al  suministro  de  los  complejos  al  pulmón  
efectuó  aumentos  significativos  en  la  producción  de  receptores  de   después  de  la  administración  sistémica.  De  hecho,  el  PEI25Kd  lineal  formó  
quimiocinas  proinflamatorios.  A  continuación,  considerando  los  niveles  de   complejos  con  el  ADN  del  plásmido  en  tamaños  más  grandes  que  los  otros  
expresión  significativos  de  mIL­2  en  el  pulmón  después  del  suministro  en   PEI  ramificados  (Tabla  1).
complejos  PEI25Kd/DNA  lineales  en  una  relación  N/P  de  10:1,  y  aquellos   Aunque  observamos  niveles  más  altos  de  expresión  génica  en  el  
en  el  riñón  después  del  suministro  en  complejos  PEI2Kd/DNA  ramificados   pulmón  proporcionados  por  PEI  lineal  en  comparación  con  PEI  ramificado,  
en  un  N/  Relación  P  de  80:1,  las  pruebas  histológicas  se  realizaron   Rudolph  et  al.  [23]  informaron  que  después  de  la  administración  pulmonar  
después  de  inyecciones  repetidas  de  PEI25Kd/DNA  lineal  en  una  relación   a  través  de  la  aplicación  de  aerosol,  la  expresión  del  gen  reportero  mediada  
N/P  de  10:1,  o  complejos  de  PEI2Kd/DNA  ramificados  en  una  relación  N/P   por  PEI  ramificado  de  25  kDa  fue  mayor  que  la  observada  con  los  PEI  
de  80:1.  En  comparación  con  el  grupo  de  control  no  tratado,  las  imágenes   lineales  de  22  y  25  kDa.  La  discrepancia  entre  nuestros  resultados  y  los  
de  tinción  con  hematoxilina­eosina  muestran  que  las  administraciones   del  estudio  anterior  [23]  puede  deberse  a  las  diferencias  en  la  vía  de  
repetidas  de  complejos  PEI25Kd/ADN  lineales  y  complejos  PEI2Kd/ADN   administración.  En  este  estudio,  hemos  utilizado  una  vía  intravenosa  para  
ramificados  no  tuvieron  efecto  en  la  histología  de  una  variedad  de  órganos   la  administración  de  varios  complejos  PEI/DNA,  mientras  que  en  el  estudio  
(Fig.  6 ) . anterior  se  utilizó  un  dispositivo  de  aerosol  para  la  administración  pulmonar  
directa  de  complejos  PEI/DNA.
4.  Discusión
En  este  estudio,  proporcionamos  evidencia  de  que  la  relación  N/P  
En  este  estudio,  demostramos  que  la  distribución  del  ADN  del  órgano   puede  afectar  las  distribuciones  in  vivo  de  los  complejos  PEI/ADN.  Aunque  
y  la  expresión  del  ADN  del  plásmido  in  vivo  podrían  modularse   la  razón  de  la  mayor  eficiencia  de  la  expresión  génica  del  riñón  
significativamente  a  través  de  la  selección  de  PEI  de  diferentes   proporcionada  por  la  relación  N/P  más  alta  de  80:1  requiere  mayor  
propiedades  fisicoquímicas,  incluido  el  peso  molecular,  la  estructura  y  las   aclaración,  los  niveles  más  altos  de  distribución  de  ADN  en  el  riñón  
proporciones  de  complejación  de  PEI:  ADN. después  del  parto  en  PEI2Kd/ADN  ramificado  (80:1)  revelan  la  presencia  
Tras  la  administración  de  complejos  de  ADN  plasmídico  con  PEI,  el   de  mecanismos  preferenciales  de  captación  de  los  complejos  en  el  riñón.
tiempo  medio  de  residencia  se  prolongó  (fig.  1).  El  aumento  en  el  tiempo   También  observamos  que  la  producción  de  receptores  de  quimiocinas  
medio  de  residencia  puede  atribuirse,  en  parte,  a  la  estabilidad  de  los   proinflamatorios  fue  inducida  por  inyecciones  repetidas  de  PEI25Kd  
complejos  PEI/ADN  dentro  del  suero.  Previamente,  nosotros  [8]  y  otros   ramificado,  pero  no  por  ningún  otro  PEI.  La  inducción  de  la  producción  de  
[19]  hemos  observado  el  aumento  de  la  estabilidad  del  ADN  plásmido   quimiocinas  proinflamatorias  por  PEI  se  ha  estudiado  recientemente  con  
frente  a  las  nucleasas  tras  la  formación  de  complejos  con  PEI. respecto  a  su  eficacia  como  marcador  bioquímico  de  daño  tisular  [24].  
Aunque  todos  los  complejos  PEI/DNA  exhibieron  un  aumento  en  el  tiempo   Además  de  los  receptores  de  quimiocinas,  la  actividad  similar  a  la  
medio  de  residencia  en  comparación  con  lo  que  se  observó  con  el  ADN   caspasa­1  se  ha  empleado  para  evaluar  la  posible  inflamación  de  tejidos  
desnudo,  el  PEI25Kd/DNA  ramificado  evidenció  el  tiempo  medio  de   tratados  con  complejos  PEI/ADN  [21].
residencia  más  alto  entre  los  diversos  complejos  PEI/DNA. Estos  marcadores  bioquímicos  pueden  tener  algunas  ventajas  sobre  la  
Los  mecanismos  para  esto  quedan  por  dilucidar  con  más  detalle. tinción  histológica  en  términos  de  sensibilidad.  Sin  embargo,  existe  un  
Sin  embargo,  actualmente  no  podemos  descartar  la  posibilidad  de  que  la   peligro  con  respecto  a  la  posibilidad  de  resultados  falsos  positivos,  debido  
fuerza  de  condensación  entre  el  PEI25Kd  ramificado  y  el  ADN  pueda   a  la  mayor  sensibilidad  de  la  reacción  bioquímica.
contribuir  al  aumento  de  la  resistencia  del  complejo  contra  la  degradación   En  conclusión,  nuestros  resultados  indican  que  los  PEI  lineales  y  
en  la  sangre.  Previamente,  se  ha  demostrado  que  las  PEI  con  estructuras   ramificados  se  pueden  utilizar  de  manera  diferente  in  vivo,  dependiendo  
ramificadas  se  condensan  en  mayor  grado  que  las  PEI  lineales  [20]. de  los  tejidos  objetivo  finales.  Además,  nuestros  datos  sugieren  un  posible  
papel  para  PEI25Kd  lineal  en  la  entrega  de  genes.
Machine Translated by Google

G.­J.  Jung  et  al. /  Revista  de  publicación  controlada  118  (2007)  118–125 125

Agradecimientos [12]  S.  Werth,  B.  Urban­Klein,  L.  Dai,  S.  Hobel,  M.  Grzelinski,  U.  Bakowsky,  F.  Czubayko,  A.   ENTREGA  

GENES
DE  

Aigner,  Una  fracción  de  bajo  peso  molecular  de  polietilenimina  (PEI)  muestra  un  aumento  
eficiencia  de  transfección  de  ADN  y  siRNA  en  complejos  frescos  o  liofilizados,  J.  Control.  
Este  estudio  fue  apoyado  por  subvenciones  del  Ministerio  de   Versión  112  (2006)  257–270.
Ciencia  y  Tecnología  (F104AA010002­06A0101­00210)  en  
Corea,  del  Programa  de  Investigación  Básica  de  la  Fundación  de   [13]  CH  Ahn,  SY  Chae,  YH  Bae,  SW  Kim,  Poli  (etilenimina)  biodegradable  para  el  suministro  de  

Ciencia  e  Ingeniería  de  Corea  (KOSEF  R01­2005­000­10292­0),   ADN  plasmídico,  J.  Control.  Versión  80  (2006)  273–282.

y  de  la  Programa  SRC  (R11­2005­008­00000­0)  de  MOST/  
[14]  YK  Oh,  D.  Suh,  JM  Kim,  HG  Choi,  K.  Shin,  JJ  Ko,  captación  celular  mediada  por  minas  de  
KOSEF  a  través  del  Centro  de  Materiales  Nano­Bio  Inteligentes   polietileno,  tráfico  de  núcleos  y  expresión  de  ADN  de  plásmido  de  citoquinas,  Gene  Ther.  9  
de  la  Universidad  Femenina  Ewha. (2002)  1627–1632.
[15]  Boussif,  F.  Lezoualc'h,  MA  Zanta,  MD  Mergny,  D.  Scherman,  B.

Referencias Demeneix,  JP  Behr,  Un  vector  versátil  para  la  transferencia  de  genes  y  oligonucleótidos  a  
células  en  cultivo  e  in  vivo:  polietilenimina,  Proc.  nacional
Academia  ciencia  EE.  UU.  92  (1995)  7297–7301.
[1]  SD  Patil,  DG  Phodes,  DJ  Burgess,  Terapias  basadas  en  ADN  y  sistemas  de  administración  
[16]  LZ  Benet,  Tiempo  medio  de  residencia  en  el  cuerpo  versus  tiempo  medio  de  residencia  en  el  
de  ADN:  una  revisión  exhaustiva,  AAPS  J.  7  (2005)  E61–E77.
compartimento  central,  J.  Pharmacokinet.  Biofarmacia  13  (1985)  555–558.
[2]  MA  Kay,  JC  Glorioso,  L.  Naldini,  Vectores  virales  para  terapia  génica:  el  arte  de  convertir  
[17]  HC  Jung,  JM  Kim,  IS  Song,  CY  Kim,  Helicobacter  pylori  induce  una  serie  de  citocinas  
agentes  infecciosos  en  vehículos  terapéuticos,  Nat.  Medicina.  7  (2001)  33–40.
proinflamatorias  en  células  epiteliales  gástricas  humanas:  cuantificación  de  ARNm  para  
interleucina­8,­1/,  factor  estimulante  de  colonias  de  granulocitos  y  macrófagos ,  proteína  
[3]  DJ  Wells,  Métodos  virales  y  no  virales  para  la  transferencia  de  genes  al  músculo  esquelético,  
quimioatrayente  de  monocitos­1  y  factor  de  necrosis  tumoral,  J.  Gastroenterol.  Hepatol.  12  
Curr.  Opinión  Descubrimiento  de  drogas  desarrollo  9  (2006)  163–168.
(1997)  473–480.
[4]  D.  Favre,  N.  Provost,  V.  Blouin,  G.  Blancho,  Y.  Cherel,  A.  Salvetti,  P.
[18]  FR  Fischer,  L.  Santambrogio,  Y.  Luo,  MA  Berman,  WW  Hancock,  ME
Moullier,  Seguridad  inmediata  y  a  largo  plazo  de  la  inyección  de  virus  recombinantes  
Dorf,  Modulación  de  la  encefalomielitis  autoinmune  experimental:  efecto  del  ligando  
adenoasociados  en  el  músculo  de  primates  no  humanos,  Molec.
peptídico  alterado  sobre  la  expresión  de  quimiocinas  y  receptores  de  quimiocinas,  J.  
El  r.  4  (2001)  559–566.
Neuroimmunol.  110  (2000)  195–208.
[5]  M.  Haider,  A.  Hatefi,  H.  Ghandehari,  Polímeros  recombinantes  para  la  terapia  génica  del  
[19]  WT  Godbey,  MA  Barry,  P.  Saggau,  KK  Wu,  AG  Mikos,  Transfección  mediada  por  poli  
cáncer:  una  minirevisión,  J.  Control.  Versión  109  (2005)  108–119.
(etilenimina):  un  nuevo  paradigma  para  la  entrega  de  genes,  J.  Biomed.  Mate.  Res.  51  
[6]  D.  Putnam,  Polímeros  para  el  suministro  de  genes  a  través  de  escalas  de  longitud,  Nat.  Mate.  5
(2000)  321–328.
(6)  (junio  de  2006)  439–451.
[20]  DD  Dunlap,  A.  Maggi,  MR  Soria,  L.  Monaco,  Estructura  nanoscópica  del  ADN  condensado  
[7]  M.  Neu,  D.  Fischer,  T.  Kissel,  Avances  recientes  en  el  diseño  racional  de  vectores  de  
para  la  entrega  de  genes,  Nucleic  Acids  Res.  15  (1997)  3095–3101.
transferencia  de  genes  basados  en  poli(etilenimina)  y  sus  derivados,  J.  Gene  Med.  7  (2005)  
[21]  D.  Goula,  N.  Becker,  GF  Lemkine,  P.  Normandie,  J.  Rodrigues,  S.
992–1009.
Mantero,  G.  Levi,  BA  Demeneix,  Cruce  rápido  de  la  barrera  endotelial  pulmonar  por  
[8]  YK  Oh,  JP  Kim,  H.  Yoon,  JM  Kim,  JS  Yang,  CK  Kim,  Retención  prolongada  de  órganos  y  
complejos  de  polietilenimina/ADN,  Gene  Ther.  7  (2000)  499–504.
seguridad  del  ADN  plasmídico  administrado  en  complejos  de  polietilennimina,  Gene  Ther.  
8  (2001)  1587–1592.
[22]  D.  Huo,  S.  Deng,  L.  Li,  J.  Ji,  Estudios  sobre  las  microesferas  de  ácido  poli(láctico­co­glicólico)  
[9]  JY  Shin,  D.  Suh,  JM  Kim,  HG  Choi,  JA  Kim,  JJ  Ko,  YB  Lee,  JS
de  cisplatino  para  atacar  los  pulmones,  Int.  J.  Pharm.  289  (2005)  63–67.
Kim,  YK  Oh,  Polietilenimina  de  bajo  peso  molecular  para  la  transfección  eficaz  de  células  
[23]  C.  Rudolph,  U.  Schillinger,  A.  Ortiz,  C.  Plank,  MM  Golas,  B.  Sander,  H.
CD34+  derivadas  de  sangre  del  cordón  umbilical  y  hematopoyéticas  humanas,  Biochim.  
Stark,  J.  Rosenecker,  Cantidades  de  nanogramos  en  aerosol  de  ADN  de  plásmido  median  
Biografía.  Acta  1725  (2005)  377–384.
la  entrega  de  genes  altamente  eficiente  al  epitelio  de  las  vías  respiratorias  del  ratón,  Molec.
[10]  L.  Wightman,  R.  Kircheis,  V.  Rossler,  S.  Carotta,  R.  Ruzicka,  M.  Kursa,  E.
El  r.  12  (2005)  493–501.
Wagner,  Comportamiento  diferente  de  la  polietilenimina  ramificada  y  lineal  para  la  
[24]  S.  Kawakami,  Y.  Ito,  P.  Charoensit,  F.  Yamashita,  M.  Hashida,  Evaluación  de  la  producción  
administración  de  genes  in  vitro  e  in  vivo,  J.  Gene  Med.  4  (2001)  362–372.
de  citoquinas  proinflamatorias  inducida  por  complejos  de  polietilenimina/ADN  de  plásmido  
[11]  JW  Wiseman,  CA  Goddard,  D.  McLelland,  WH  College,  Una  comparación  de  polietilenimina  
lineales  y  ramificados  en  ratones,  J.  Pharmacol.  Exp.
lineal  y  ramificada  (PEI)  con  liposomas  DCChol/DOPE  para  la  administración  de  genes  a  
El  r.  317  (2006)  1382–1390.
células  epiteliales  in  vitro  e  in  vivo,  Gene  Ther.  10  (2003)  1654–1662.