PREPARACIÓN, CONTROL DE CALIDAD Y SIEMBRA DE MEDIOS DE CULTIVO
Gabriela Torres Vides, Daniel Alberto Gómez
01210172005@mail.udes.edu.co,
Grupo A1, Bacteriología I, Universidad de Santander
INTRODUCCIÓN
Los microrganismos son seres vivos exceptuando a
los virus que no son considerados como estos
debido a que son microorganismos acelulares,
además de que son “solo un código de DNA o RNA”
recubiertos por una membrana de proteínas (Virus,
2023). Estos se encuentran en diferentes
ecosistemas, pero no todos tienen la misma
capacidad de vivir en ciertas partes, por ejemplo,
hay microorganismos que son capaces de vivir en
condiciones extremas, estos son llamados
extremófilos (Ulla Rothschuh Osorio, 2022), pero hay
otros que tienen una alta demanda de nutrientes
para poder crecer.
En el laboratorio se usan cajas de Petri o tubos para
hacer crecer bacterias y hongos de manera “in vitro”,
dependiendo que se vaya a sembrar se debe
escoger un excelente medio de cultivo. Un medio de
cultivo es aquella solución o sustrato (el cual aporta
los nutrientes necesarios para el crecimiento de los
microorganismos) utilizado para aislar
microorganismos (admin, 2019), para conocer su
morfología tanto microscópica como macroscópica
en cuanto a la formación de colonias de este,
caracterizarlos dependiendo en que tipos de medios
de cultivos crezcan, además de poder hacer
exámenes con esos cultivos como urocultivos,
antibiogramas etc.
Todo medio de cultivo debe tener como mínimo los
siguientes componentes, una fuente de carbono o
CO2 dependiendo si es autótrofo, una fuente de
nitrógeno, vitaminas o iones como Na+, K+ y una
solución amortiguadora.
Los medios de cultivos se pueden clasificar según
su consistencia que son los medios sólidos, líquidos
y semisólidos. Los sólidos son aquellos que están
compuestos por agar (se extrae de las algas), a
diferencia con los semisólidos que son quienes
presentan una concentración menor de agar que los
sólidos y los líquidos que son llamados caldos los
cuales contienen los nutrientes en soluciones
acuosas. Un segundo aspecto para poder
clasificarlos es según su naturaleza, ya sea sintético
(composición química conocida) natural (aquellos
que son a base de extractos, sustancias a partir de
vegetales u animales) y semisintético (los cuales
solo se les agrega un factor de crecimiento) y por
últimos según su composición (admin, 2019) que se
dividen en:
• Nutritivos: Son aquellos donde pueden
crecer cualquier tipo de microorganismo que
no sea exigente, además de tener los
nutrientes básicos.
• Enriquecidos: Son aquellos que se les
adiciona un suplemento especial o
específico para aquellos que son de
exigencia nutricional.
• Selectivos: Son los que permiten el
crecimiento especifico de algún
microorganismo.
• Diferenciales: Son aquellos que permiten la
diferenciación de género y especie de
algunos microorganismos.
• Transporte: Son capaces de mantener una
cepa viva dentro de un periodo de tiempo.
El control de calidad de los medios de cultivo es un
aspecto determinante para poder realizar un
sembrado y un estudio de estos que sean de calidad
y con resultados confiables, los parámetros que hay
que seguir para el control de calidad para los
productos que se hacen dentro del mismo
laboratorio son los siguientes que personalmente los
denomine como CFCECF, esto haciendo referencia
a los aspectos a evaluar en este. Las características
físicas (CF) son aquellas que se ven
macroscópicamente, en este parámetro se evalúan
cosas como la presencia de burbujas en agares
sólidos, la concentración y volumen del agar en la
caja de Petri y entre otras cosas que se pueden ver
a simple vista; Otro aspecto a evaluar es el control
de esterilidad (CE) donde se debe tomar
aproximadamente un 5% del lote que se hizo para
ponerlos a incubación y observar si hay presencia
de microorganismos o si en verdad esta estéril, por
ultimo tenemos el control de funcionamiento (CF) en
el cual se usan cepas ATCC o cepas estándar para
evaluar la capacidad de funcionamiento de los
agares, es decir, si en los agares o caldos selectivos
crecen los microorganismos que deberían crecer o
no crecen los que no deberían crecer. Ejemplo un
hongo no debería crecer en el agar MacConkey que
se utiliza para aislar un Staphylococcus aureus.
Existen varios tipos de sembrados que se pueden
hacer dependiendo de los medios de cultivos que se
necesiten para la prueba, está el sembrado por
rejilla, por agotamiento y masivo; Para medios de
cultivo en tubos está el sembrado por picadura, por
estría y sembrado en caldo. Esto se escoge
dependiendo el tipo de examen que se hará o la
prueba que se quiere realizar. El objetivo de estas
practicas es afianzar los conocimientos sobre estas
y mejorar las técnicas además poder diferencias las
bacterias que se sembraran. Por ultimo se tiene
como objetivo también entender la importancia del
control de calidad de los agares y saber como
determinar que un agar o caldo esta en perfecto
estado para poder trabajarlos.

METODOLOGÍA
 RESULTADOS

Figura 2. Preparación de agar y caldo nutritivo.

Ilustración 1. Agar y caldo nutritivo, agar sangre.

Figura 3. Sembrado por agotamiento de Escherichia coli en agar

MacConkey.
Figura 4. Sembrado de Candida albicans en agar nutritivo, se
encuentra contaminado.

Figura 7. Escherichia coli, bacilo Gram negativo

Figura 5. Sembrado de Staphylococcus aureus en agar sangre

Figura 8. Candida Albicans

Figura 6. Staphylococcus Gram positivo

Figura 9. Control de calidad de los medios de cultivo y preparación de

nuevos agares para la práctica posterior.

Figura 10. Control de calidad de agares y caldos.
Figura 11. siembras en medio de cultivo sólido del lugar
del trabajo
ANÁLISIS Y DISCUSIÓN DE RESULTADOS
La figura 1 se muestra tres recipientes, uno
contiene agar nutritivo, otro agar sangre y el otro es
para caldo nutritivo, esto quiere decir, que con estos
tres diferentes envases se va a lograr hacer el agar
nutritivo que está formado por peptona, extracto de
carne bovina y agar, este tipo de agar proporciona
los nutrientes necesarios para la multiplicación de
un amplio número de microorganismos que no son
necesariamente exigentes, por otro lado con el
recipiente de caldo que permite hacer el caldo
nutritivo contiene pluripeptona que es una mezcla
de partes iguales de peptona de carne y de caseína
y extracto de carne que constituyen la fuente de
carbono y nitrógeno necesarias para el adecuado
desarrollo bacteriano.
En la figura 2 se observa un Erlenmeyer con la
solución de agar el cual está de forma sólida, debido
al almacenamiento que tuvo para posteriormente
pasarlo a estado líquido para poder pasarlo a cada
una de las cajas de Petri, hay que esperar a que
solidifique de nuevo, pero ahora en la caja de Petri
para que adopte esta forma para así poder sembrar
posteriormente.
Según las figuras 3, 4 y 5 se observa que el tipo de
sembrado es por agotamiento el cual consiste en
arrastra un asa de siembra circular en tres
cuadrantes de lado a lado y el cuarto cuadrante se
hace en zigzag, este es un método rápido. El
objetivo es poder visualizar las colonias de bacterias
por separado, se puede observar que los
sembrados por agotamiento en la figura 3 en el
cuadrante del zigzag quedo muy junto por ende no
se pueden ver bien las colonias por separado. Al
incubar la placa, crecen las bacterias distribuidas
sobre ella, cada una de las bacterias originará una
colonia, pero como control de calidad tenemos que
en las figura 4 se encuentran microorganismos
diferentes a la de la siembra, es decir, que la
siembra se encuentra contaminada por bacterias en
algunas cajas y en una se encuentra contaminada
por un hongo que pueden ser por ambiente o de la
incubadora, en otras palabras, creció una bacteria
desconocida o diferente a la que se sembró que
impidió el crecimiento de la Candida albicans,
mientras que en la figura 5 y 4 no se encontraron
una bacteria diferente a la que se sembró esto
quiere decir que este medio de cultivo sirve para
vistas macroscópicas y microscópicas como se
observan el las figuras 6, 7 y 8.
En la siguiente tabla se dan a conocer que tipos de
bacteria se encontraron en la vista microscópicas.
Ilustración Tipo de bacteria
Figura 6: Staphylococcus Cocos Gram
aureus positivos
Figura 7: Escherichia coli Bacilos Gram
negativos
Figura 8. Candida Albicans N/A, ya que es un
hongo y seria
incorrecto decir que
es Gram positivo.
El Staphylococcus aureus hace parte del género
estafilococo y hay más de 30 tipos, estos ocasionan
diferentes tipos de infecciones como infecciones
cutáneas, en los huesos, en el torrente sanguíneo,
intoxicación por alimentos, neumonías y shocks
tóxicos (Infecciones Por Estafilococo, 2020).
La Escherichia coli hace parte del microbiota de los
intestinos de las personas y animales, la mayoría de
las especies de estas solo causan diarrea, pero hay
algunas como la Escherichia coli O157:H7 ocasiona
diarrea con sangre, vómitos y cólicos fuertes. Esto
se puede adquirir por agua o alimentos
contaminados (E. Coli - Síntomas Y Causas - Mayo Clinic,
2022). Un dato curioso es que la E. coli es la bacteria
mejor conocida y estudiada.
La Candida albicans es un hongo dimórfico (o sea
que puede cambiar de forma sea levadura o hifa),
este tipo de hongo toma dominancia en la vagina,
tractos digestivos y respiratorio de los humanos,
además puede infectar uñas, piel y membrana
mucosas (Candida Albicans - Vircell, 2020).
En la figura 9 y 10 se hacen controles de calidad
de cada uno de los agares realizados durante la
práctica, mirando los aspectos físicos que tienen
todos los agares por ejemplo si el llenado estuvo
bien etc. Esto significa que cuando hacemos este
tipo de control de calidad vamos a evaluar que tan
bien se realizó la técnica o si al momento de servirlo
hubo contaminación de cada uno de estos, esto con
el fin de poder tener un cultivo sin contaminaciones,
en buenas condiciones, es decir, un cultivo
esterilizado, lo cual al momento de realizar la vista
macroscópica del crecimiento de la colonia no se
tendrá complicaciones al momento de buscar las
características macroscópicas del medio de cultivo,
por otro lado también si no se tiene en cuenta este
factor de contaminación, al momento de realizar ti
vista microscópicas observaras otro tipo de bacteria
diferente. Se pudo observar que hubo un buen
control de calidad debido a que los agares tanto
solidos como líquidos no presentaron algún aspecto
anormal, además que tuvieron llenados precisos
para tener un correcto sembrado.
De la figura 11 se pueden observar tipos de
siembras, para así poder realizar control de calidad
de cada una de las siembras.
También cabe recalcar que dentro de esta figura 11
se encuentran esquemas, como lo son:
Esquema A: se observan un tipo de sembrado por
agotamiento el cual es muy utilizado para obtener
un gran número de microorganismos para poder
hacer diferentes exámenes como por ejemplo un
antibiograma. En esta siembra utiliza un hisopo, el
cual se pasa por toda la superficie de la placa en 3
distintas direcciones y finalmente por el borde para
que el crecimiento de los microorganismos sea total
en la superficie de la placa. Además de esto como
muestra problema se utilizó el raspado bucal, lo cual
se ven bacterias donde estas son de forma normal
que se encuentren en esta zona, esta muestra no
presentó contaminación alguna por lo cual se pudo
analizar correctamente donde se ve que crecieron
algún tipo de bacteria bucal que a lo mejor no es
nociva.
Esquema B: también en este esquema se observa
el sembrado masivo, pero como muestra problema
tenemos al roce de las partes de adentro de la
incubadora, donde se deduce que dentro de esta
incubadora hay presencia de algún microorganismo,
se observa crecimiento de bacterias y hongos,
debido a que pueden existir diferentes factores de
contaminación, uno de ellos podría ser cajas de
Petri mal tapadas o mal selladas, como también
caldos no sellados correctamente, por lo que esto
podría estar generando varios tipos de
contaminación y así mismo afectando los diferentes
pruebas que realices durante el laboratorio, como la
incubación de la caja de Petri con la bacteria recién
sembrada.
Esquema C: el sembrado que se realizó también es
por siembra masiva, con la muestra problema del
mesón, el cual se observa que en este mesón se
encuentran hongos esto se evidencia durante el
crecimiento en el medio de cultivo, esto debido a
que muchas veces que se labore o se utiliza el
mesón se dejan caer partes de las soluciones
utilizadas durante la prueba o también podría ser por
el roce de los materiales utilizados durante un
siembramiendo de hongos o bacterias, etc.
Esquema D: durante este medio de cultivo se tomó
la caja de Petri con el agar y se pasó por todo el
laboratorio, pero sin tener contacto con algo solo
con el aire, donde como control de calidad
encontramos que mediante el aire se encuentran
bacterias, esto pasa porque al momento de hacer
las vistas macroscópicas del medio de cultivo con
las bacterias muchas veces las destapan o las abren
sin tener pendido el mechero, por lo que así se
puede generar este tipo de contaminación.
Montajes de las practicas.
En el esquema C: se tomó una muestra del mesón
con un hisopo y se puede observar un hongo
filamentoso de color blanquecino, con aspecto
velloso. Por lo tanto se puede decir el lugar de
trabajo no estaba esterilizado al momento de tomar
la muestra lo cual puede explicar la contaminación
del agar nutritivo del laboratorio pasado. Para
mejorar y evitar que pase esta situación se
recomienda esterilizar o limpiar con alcohol la
superficie de la mesa para al menos tener seguridad las bacterias y teniendo una forma ovalada o
que se esta trabajando en un ambiente aséptico. circular, como escamas.
En el esquema D: se tomó una muestra de la nevera
donde se almacenan las cajas de Petri y tubos con BIBLIOGRAFÍA
muestras de practicas y se puede ver el crecimiento
de un microorganismo que también aparece en la 1. Ulla Rothschuh Osorio. (2022, February 18).
figura 4, por lo que podemos deducir que la caja de Extremófilos: qué son, características y ejemplos.
Petri de esta figura se contamino en la nevera Ecologiaverde.com; Ecologiaverde.com.
debido a que tienen el mismo aspecto https://www.ecologiaverde.com/extremofilos-que-son-
macroscópico, para poder mejorar esta situación se caracteristicas-y-ejemplos-3768.html
recomienda sellar mejor las cajas de Petri y tubos, 2. Virus. (2023). Genome.gov.
además de mantener una asepsia cada semana o https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Virus
antes de que se metan muestras en la nevera. 3. admin. (2019, July 17). Medios de cultivo -
EduLabC. EduLabC; admin.
CONCLUSIONES https://edulabc.com.mx/medios-de-cultivo/
• Se pudo afianzar los conocimientos teóricos y 4. Infecciones por estafilococo. (2020).
prácticos sobre los diferentes tipos de Medlineplus.gov; National Library of Medicine.
sembrados, como sembrarlos y cuando se debe https://medlineplus.gov/spanish/staphylococcalinfections
hacerlo. .htm E. coli - Síntomas y causas - Mayo Clinic. (2022).
• Los tipos de sembrados son por rejilla, Mayoclinic.org; https://www.mayoclinic.org/es-
agotamiento, picadura, estrías, masivos y en es/diseases-conditions/e-coli/symptoms-causes/syc-
caldos 20372058
• Es importante tener un buen control de calidad 5. Candida albicans - Vircell. (2020). Vircell.com.
sobre todo el laboratorio y las muestras que se https://www.vircell.com/enfermedad/27-candida-
utilizan además de las técnicas para poder albicans/
realizar prácticas confiables y tener resultados
seguros y de calidad 6. Agar, N. (n.d.). B BBL Nutrient Agar U
• Se aprendió a definir macroscópicamente el PROCEDIMIENTOS DE CONTROL DE CALIDAD I.
crecimiento y los aspectos tantos INTRODUCCION II. REALIZACION DEL
macroscópicamente como microscópicamente PROCEDIMIENTO DE ANALISIS.
de la Escherichia coli, Staphylococcus aureus y https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=22881#:~:text=
Candida albicans. Nutrient%20Agar%20est%C3%A1%20formado%20por
• La diferencia principal de las bacterias Gram 7. (S/f-a). Britanialab.com. Recuperado el 12 de marzo
positivas con las negativas es que estas tienen de 2023, de
más peptidoglucano en sus membranas que las https://www.britanialab.com/back/public/upload/product
negativas haciéndolas teñir de azul. os/upl_6070769bd7fef.pdf
• El campo de trabajo se encuentra contaminado 8. (S/f-b). Uib.cat. Recuperado el 12 de marzo de 2023,
por varios microorganismos según lo estudiando de
y mostrado en las muestras tomadas de los https://www.uib.cat/depart/dba/microbiologia/micro2/pr
diferentes tipos de lugares. acticas.pdf
• Las diferentes cepas sembradas pueden ser 9. (S/f-c). Gob.ar. Recuperado el 12 de marzo de 2023,
nocivas para el ser humano y para el estudiante de https://www.saludneuquen.gob.ar/wp-
por lo que se recomienda tener una buena content/uploads/2021/08/ANAL-005-Microbiologia-
bioseguridad y desinfección después, durante y general.pdf
antes de usar las diferentes muestras
• Se afianzo los conocimientos sobre la
importancia de realizar buenas técnicas para
poder trabajar correctamente en los ambientes
de laboratorio
• Se pueden diferenciar microscópicamente las
muestras en cocos como formas circulares y
bacilos como bastones.
• Las levaduras pueden tener aspectos
macroscópicamente similares con las bacterias,
pero microscópicamente son diferentes en
tamaño y forma siendo estas mas grandes que