INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA SUPERIOR DE INGENIERÍA QUÍMICA E

INDUSTRIAS EXTRACTIVAS

INGENIERÍA QUIMICA INDUSTRIAL

LABORATORIO DE ESPECTROSCOPIA MOLECULAR Y ATÓMICA

PRÁCTICA 1
“RUTINAS DE DIAGNOSTICO”

INTEGRANTES:
 Maldonado Bello Luis Eduardo.
 Pérez Montes Karen Ayled.

Grupo: 3IM66
Profesora: Adriana Naranjo Martínez
OBJETIVOS
 Conocer las principales partes de un espectrofotómetro.
 Saber el manejo adecuado del espectrofotómetro, así como su cuidado y
mantenimiento.
 Conocer que tipo de compuestos se pueden analizar y en que regiones.
MARCO TEORICO

Espectrofotóm etro UV-VIS

Utiliza radiación electromagnética (luz) de las regiones visible,
ultravioleta cercana (UV) e infrarroja cercana (NIR) del espectro
electromagnético.

Tienen una longitud de onda entre 380nm y 780nm y la

radiación absorbida por las moléculas desde esta región
provocan transiciones electrónicas que pueden ser
cuantificadas.

Se utiliza para identificar algunos grupos funcionales y además,

para determinar el contenido y fuerza de una sustancia, así
como en la determinación cuantitativa de los componentes de
soluciones de iones de metales de transición y compuestos
orgánicos altamente conjugados.

Partes del espectrofotometro:

* Fuente de luz.
* Monocromador.
* Compartimento de muestra.
* Detector.
* Fotodetectores.
* Celdas.

Las fuentes más comunes son: Deuterio UV, Tungsteno VIS.

Area de muestra: celdas de cuarzo, cubetas de cuarzo.

 Es una forma de calibración de los
instrumentos para obtener análisis
exactos.

a) Empleando oxido de holmio

Exactitud fotometrica:

D IA G N O S T IC O
Se define como la cercanía de una

R U T IN A S D E
Longitudes de onda teóricas del filtro
medida a su valor real.
de óxido de holmio
Obtener el espectro bajo las
condiciones: N° Longitud de
onda (nm)
Ancho de banda espectral:
1 279.0
Se define como la cercanía de una
Intervalo λ 700-200 nm
medida a su valor 287.0
2 real.
Modo ABS 3 333.5
Ordenada 4 360.5
0-3 5 418.0
limite
Linealidad fotométrica:
Lámpara UV-Vis 6 445.0
Se define7como la cercanía de una
453.0
Velocidad de medida a su valor real.
120 nm/min 8 459.5
barrido
9 536.0
10 637.0
Exactitud:
11 648.5
Grado de concordancia entre el valor
exacto de la entrada y el valor medido.
Se expresa en % sobre fondo de escala.

Precisión:
Grado de concordancia entre los
resultados. La precisión se cuantifica a
partir de la repetitividad y la
b) Empleando el vapor de benceno reproducibilidad.

Obtener el espectro bajo las Longitudes de onda teóricas del vapor

condiciones: de benceno
DESARROLLO EXPERIMENTAL
Intervalo λ 280-230 nm N° Longitud de
onda (nm)
Modo ABS 1 237.0
Ordenada 2 242.2
0-1 3 247.8
limite
Lámpara UV 4 253.6
Velocidad de 5 259.6
15 nm/min 6 266.8
barrido
Medir 2.69 ml de y
Acido sulfurico 0.2N aforar a 500 ml con
agua destilada.
Preparación de
soluciones
Pesar 0.01 g de
Dicromato de potasio dicromato de potasio y
100 ppm aforar a 100 ml con
0.2 N.
c) Linealidad fotométrica

Preparar una solución Preparar a partir de la

de K 2 Cr2 O7 de 100 ppm solución madre tres
usando como solvente estándares de 25, 50 y
H 2 SO4 0.2N 75 ppm.

Obtener el espectro bajo las

condiciones:

Analizar la absorbancia Intervalo λ 450-250 nm

de cada uno de los
Modo ABS
estándares a la λ maxteórica
Ordenada
de 350 nm. limite
0-1.5
Lámpara UV-Vis
Velocidad de
120 nm/min
barrido

Construir la curva de
Determinar la λ max y
calibración graficando
comparar la obtenida
ABSORBANCIA vs
con la teoría 350 nm.
CONCENTRACIÓN.
CUESTIONARIO DE LA PRÁCTICA

1. ¿Cuál es el fundamento de los métodos espectroscópicos de análisis?

Se basan en las interacciones de la radiación electromagnética con la materia

2. ¿Qué se entiende por transición electrónica?

Es un cambio de un electrón de un nivel de energía a otro dentro de un átomo
o átomo artificial. Aparece como discontinuo cuando el electrón "salta" de un nivel
de energía a otro en unos pocos nanosegundos o menos

3. ¿Cuáles son las transiciones electrónicas que se presentan en compuestos

orgánicos?
Implican la absorción de radiación UV-VIS por electrones situados en orbitales n, p
o s de las moléculas lo que provoca su promoción orbitales anti-enlazante de
energía superior (estado excitado).

4. ¿Qué tipo de compuestos se pueden analizar por esta técnica?

Se utiliza para identificar algunos grupos funcionales de moléculas, y además, para
determinar el contenido y fuerza de una sustancia. Se utiliza de manera general en la
determinación cuantitativa de los componentes de soluciones de iones de metales de
transición y compuestos orgánicos altamente conjugados.

5. De dos ejemplos de compuestos que absorban en la región UV-Vis.

Proporciona la formula desarrollada.

Benceno Alquenos

6. Describa brevemente, ¿Cuál es el objetivo de la práctica?

Manejar, conocer y verificar las condiciones del espectrofotómetro.

7. Mencione, ¿Cuáles son las partes que constituyen un espectrofotómetro UV-

Vis?
 Fuente de luz.
 Monocromador.
 Compartimento de Muestra.
 Detector.
  Fotodetectores.
 Celdas.

8. Explique cuál es el propósito de verificar los equipos antes de realizar

cualquier tipo de análisis instrumental
Obtener análisis exactos, verificar que el equipo sea capaz de funcionar bajo las
condiciones normales esperadas y potenciales condiciones adversas así como
garantizar que se cuenta con medidas de seguridad y que éstas se ajustan a los
estándares establecidos.

9. ¿Qué se entiende por barrido espectral?

Es la variación de la longitud de onda, necesaria para la búsqueda de una λmax
donde el analito absorbe más luz.

10. ¿Qué información analítica proporcionan los resultados de un espectrograma?

Es el resultado de calcular el espectro de tramas enventanadas de una señal. Resulta
una gráfica tridimensional que representa la energía del contenido frecuencial de la
señal según va variando ésta a lo largo del tiempo.

11. ¿En qué tipo de industrias se puede aplicar la técnica UV-Vis?

Industrias farmacéutica, química, de alimentos y bebidas y biotecnológica.
 TABLA DE SOLUCIONES
Ácido sulfúrico Q.P.
Benceno Q.P.
Dicromato de potasio Q.P.

Cálculo de soluciones
C 1 V 1=C 2 V 2

Despejando V 1 :
C2V 2
V 1=
C1

Teniendo:
A partir de una solución de K 2 Cr2 O7 de 100 ppm
25 ppm vol. de aforo 10 ml.
50 ppm vol. de aforo 10 ml.
75 ppm vol. de aforo 10 ml.
mg
(25 )(10 ml)
L
 V 1 ,25 ppm= =2.5 ml
mg
(100 )
L

mg
(50 )(10 ml)
L
 V 1 ,50 ppm= =5 ml
mg
(100 )
L

mg
(75 )(10 ml)
L
 V 1 ,75 ppm= =7.5 ml
mg
(100 )
L

Estándares de K 2 Cr2 O 7
V 1 (ml) V 2 (ml) C 1( ppm ) C 2( ppm)
2.5 10 100 25
5 10 100 50
 7.5 10 100 75

MANUAL DE USUARIO DEL EQUIPO

SOFTWARE

1. Escaneo
2. Reloj (cinética de la reacción)
3. Leer absorbancia a diferentes longitudes.
4. Etiqueta para picos.
5. Cursor vertical.
6. Poner el nombre o etiqueta al espectrograma.

SCAN

1. Poner donde inicia y termina la longitud de onda.

2. Poner un intervalo de trabajo de 1 nm.
3. Poner número de ciclos: 1
 OUTPUT

1. Poner la ordenada máxima y

mínima dependiendo de la altura
de los picos.
2. Display: serial para un solo
gráfico y overlay para tres
mediciones en un solo gráfico.

INSTRUMENT

1. Lámpara a utilizar: UV o Vis.

2. Smooth: suavizar picos, por lo general se ocupa 2 nm.
3. Slith: 2 nm.
4. Lampara visible: 319.2 nm.

SAMPLE

1. Nombre del archivo

2. Calculo del factor: 1
 START

o Se pone cuando ya tienes todo en el equipo y tu muestra lista.

Revisar que no queden celdas en los porta muestra del espectrofotómetro.

 1. Apagar el espectrofotómetro.
2. Cerrar todas las ventanas de PERKIN-ELMER UVWINLAB.
3. Apagar la PC.
4. Apagar la impresora y el regulador.
TABLA DE DATOS EXPERIMENTALES
 Vapor de benceno
Datos teóricos Datos
experimentale
s
N° Longitud Longitud de Porc. de
de onda onda (nm) error (%)
(nm)
1 237 237.03 0.012658228
2 242.2 242.27 0.028901734
3 247.8 247.73 0.028248588
4 253.6 253.46 0.055205047
5 259.6 259.58 0.00770416
6 266.8 266.88 0.029985007

 Oxido de Holmio
 Valor Valor Porc. de error
teórico exp. (nm) (%)
(nm)

279 280 0.358422939

287 289 0.696864111
333.5 334 0.149925037
360.5 361 0.138696255
418 419 0.23923445
445 444 0.224719101
453 454 0.220750552
459.5 460.4 0.195865071
536 538 0.373134328
637 638 0.156985871
648.5 649 0.077101002
GRÁFICAS EN EXCEL (CON TITULO, UNIDADES Y TABLA DE DATOS
GRAFICADOS, ESPECTROGRAMAS)
concentraci Absorban
ón cia
25 0.27807
50 0.51003
75 0.78397

Absorvancia vs Concentración
0.9
0.8
0.7
0.6
Absorbancia

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
20 30 40 50 60 70 80
Concentración
CÁLCULOS DESGLOSADOS
Cálculos de volumen
mg
(25 )(10 ml)
L
 V 1 ,25 ppm= =2.5 ml
mg
(100 )
L

mg
(50 )(10 ml)
L
 V 1 ,50 ppm= =5 ml
mg
(100 )
L

mg
)(10 ml)
(75
L
 V 1 ,75 ppm= =7.5 ml
mg
(100 )
L
 Cálculos de Vapor de benceno

%Error=|237−237.03
237 |x 100=¿0.012658228
242.2−242.27
%Error=| |x 100=¿0.028901734
242.2

247.8−247.73
%Error=| |x 100=¿0.028248588
247.8

253.6−253.46
%Error=| |x 100=¿0.055205047
253.6

259.6−259.58
%Error=| |x 100=¿0.00770416
259.6

266.8−266.88
%Error=| |x 100=¿0.029985007
266.8

 Oxido de holmio

%Error=|279−280
279 |
x 100=¿ 0.358422939

287−289
%Error=|
287 |
x 100=¿ 0.696864111
%Error=|333.5−334
333.5 |
x 100=¿0.149925037

360.5−361
%Error=|
360.5 |
x 100=¿0.138696255

418−419
%Error=|
418 |
x 100=¿0.23923445

445−444
%Error=|
445 |
x 100=¿ 0.224719101

453−454
%Error=|
453 |
x 100=¿ 0.220750552

459.5−460.4
%Error=| |x 100=¿0.195865071
459.5

536−538
%Error=|
536 |
x 100=¿ 0.373134328

637−638
%Error=|
637 |
x 100=¿0.156985871

648.5−649
%Error=|
648.5 |
x 100=¿ 0.077101002

TABLA DE RESULTADOS
Oxido de Holmio
Valor Valor Porc. de error
teórico exp. (nm) (%)
(nm)

279 280 0.358422939

287 289 0.696864111
333.5 334 0.149925037
360.5 361 0.138696255
418 419 0.23923445
445 444 0.224719101
453 454 0.220750552
459.5 460.4 0.195865071
536 538 0.373134328
 637 638 0.156985871
648.5 649 0.077101002
Vapor de Benceno
Datos teóricos Datos
experimentale
s
N° Longitud Longitud de Porc. de
de onda onda (nm) error (%)
(nm)
1 237 237.03 0.012658228
2 242.2 242.27 0.028901734
3 247.8 247.73 0.028248588
4 253.6 253.46 0.055205047
5 259.6 259.58 0.00770416
6 266.8 266.88 0.029985007
CONCLUSIONES
Las rutinas de diagnóstico permiten conocer si los equipos se encuentran calibrados o no,
ya que al tener una mala calibración se puede caer en obtener datos analíticos erróneos.
De igual forma no se puede manejar un espectrofotómetro UV-VIS si no se conocen sus
partes y que tipo de lámpara se ocupa en cada zona, ya que comúnmente la lampara de
deuterio es utilizada es la zona UV.
La curva de calibración que se hizo con las soluciones de K2Cr2O7 nos permiten conocer
si dicho equipo sigue la ley de Lambert-Beer, como se puedo observar a una mayor
concentración se tiene una mayor absorbancia.
Es importante decir que para manejar este tipo de equipo siempre deben hacerse estas
rutinas ya que si no es así no se puede tener una seguridad de que el equipo este trabajando
al 100%, de igual forma es recomendable conocer el software que maneja dicho equipo, un
parámetro erróneo puede darnos espectros equivocados.
Por último, cabe señalar que este tipo de equipos se muy caros al igual que las celdas a
utilizar por lo que siempre se deber tener concentración y tranquilidad cuando se opera.
BIBLIOGRAFÍA DE LIBROS
Department of Chemistry, U. o. (30 de SEPTEMBER de 2010). Espectroscopy
("filled-empty") Orbital Interactions. Obtenido de
http://chemistry.umeche.maine.edu/CHY252/HOMO-LUMO.html
McBride, J. M. (2011). Espectroscopia UV-VIS. Obtenido de
https://sstti.ua.es/es/instrumentacion-cientifica/unidad-de-rayos-x-de-monocristal-y-
espectroscopias-vibracional-y-optica/espectroscopia-ultravioleta-visible.html