NORMA TÉCNICA NTC

COLOMBIANA 5594

2008-02-27

CALIDAD DEL AGUA.

DETECCIÓN Y RECUENTO DE PSEUDOMONAS
AERUGINOSA POR EL MÉTODO DE FILTRACIÓN
POR MEMBRANA

E: WATER QUALITY. DETECTION AND ENUMERATION OF

PSEUDOMONAS AERUGINOSA. METHOD BY MEMBRANE
FILTRATION.

CORRESPONDENCIA: esta norma es una adopción modificada

(MOD), respecto al documento de
referencia, la norma ISO 16266:2006.

DESCRIPTORES: agua; método horizontal, método de

análisis; microbiología; análisis
microbiológico; recuento; recuento en
placa; pseudomonas aeruginosa.

I.C.S.: 07.100.20; 07.100

Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC)

Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. (571) 6078888 - Fax (571) 2221435

Prohibida su reproducción Editada 2008-03-07

 PRÓLOGO

El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo

nacional de normalización, según el Decreto 2269 de 1993.

ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el
sector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en
los mercados interno y externo.

La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica

está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último
caracterizado por la participación del público en general.

La NTC 5594 fue ratificada por el Consejo Directivo del 2008-02-27.

Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en
todo momento a las necesidades y exigencias actuales.

A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a

través de su participación en el Comité Técnico 25 Microbiología.

ALIMENTOS POLAR COLOMBIA S.A. LABCONTROL E.U.

ALPINA PRODUCTOS ALIMENTICIOS S.A. LABFARVE LABORATORIO DE
ANNAR DIAGNOSTICA IMPORT LTDA. FARMACOLOGÍA VEGETAL
ARCHIVO DE BOGOTÁ LABORATORIO EMICAL LTDA.
ASBIOQUIM LTDA. LABORATORIO SFC LTDA.
ASEBIOL LABORATORIO LTDA. LABORATORIOS GRAM LTDA.
ASINAL LTDA. LABORATORIOS MICROLAB LTDA.
ASOCIACIÓN COLOMBIANA DE CIENCIA LESNIAK E.U.
Y TECNOLOGÍA COSMÉTICA -ACCYTEC- MERCADEO DE ALIMENTOS DE
AVESCO KOKORICO S.A. COLOMBIA S.A.
BIANALISIS MERCK S.A.
BIOCONTROL LTDA. MICROBIÓLOGOS ASOCIADOS LTDA.
BIOQUILAB LTDA. NULAB LTDA.
BIOTRENDS LABORATORIOS LTDA. PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
CALIDAD INDUSTRIAL LTDA. PURIFICACIÓN Y ANÁLISIS DE FLUIDOS
CARULLA VIVERO S.A. LTDA.
CONGELAGRO S.A. QUALA S.A.
DUPONT QUALICON DE COLOMBIA QUIK LTDA.
ENZIPÁN DE COLOMBIA LTDA. SECRETARÍA DISTRITAL DE SALUD DE
INDUSTRIAS ALIMENTICIAS ZENU S.A. BOGOTÁ
INSTITUTO DE GENÉTICA UNIVERSIDAD SERVICIOS DE LABORATORIO CLÍNICO
NACIONAL DE COLOMBIA LTDA.
INSTITUTO NACIONAL DE NORMAS SUIZO S.A.
TÉCNICAS Y CERTIFICACIÓN-ICONTEC UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA. UNIVERSIDAD MANUELA BELTRÁN
JHONSON DIVERSEY COLOMBIA LTDA. UNIVERSIDAD NACIONAL DE COLOMBIA
KOYOMAD S.A. VILASECA LTDA.
Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las
siguientes empresas:

3M COLOMBIA S.A. INSTITUTO NACIONAL DE SALUD

ACEITES Y GRASAS VEGETALES S.A. INVIMA - INSTITUTO NACIONAL DE
ALGARRA S.A. VIGILANCIA MÉDICA
AQUALAB LA CONSTANCIA COLOMBIA
ASOCIACIÓN COLOMBIANA DE LABORATORIO DE GENÉTICA Y
MICROBIOLOGÍA BAVARIA S.A. BIOLOGÍA MOLECULAR
BIOMERIEUX COLOMBIA LABORATORIO MICROBIOLÓGICO SIS
BLANCA USECHE LABORATOTORIO MICROBIOLÓGICO DE
CASA LUKER S.A. BARRANQUILLA
CENICAÑA LARKIN
CENTROAGUAS S.A. E.S.P. LEVAPÁN S.A.
CERCAL LTDA. LLOREDA GRASAS S.A.
CERVECERÍA LEONA MEDIIMPLANTES LTDA.
COMPAÑÍA NACIONAL DE CHOCOLATES MICROLABY LTDA.
S.A. CONSULTORÍAS MICROBIOLÓGICAS MINISTERIO DE PROTECCIÓN SOCIAL.
COOPERATIVA DE GANADEROS DE NESTLÉ DE COLOMBIA S.A.
CARTAGENA LTDA. PASIFLORA COLOMBIANA S.A.
CREPES Y WAFLES S.A. PRODUCTORA DE CONCENTRADOS Y
EMPRESA DE ACUEDUCTO Y JUGOS DE FRUTA
ALCANTARILLADO DE BOGOTÁ QUIOS LTDA.
FABRICA DE ESPECIAS Y CONDIMENTOS REPRESENTACIONES
EL REY S.A. BIOTECNOLÓGICAS LTDA.
FRIGORÍFICO GUADALUPE S.A. RICA RONDO, INDUSTRIA NACIONAL DE
FRIGORÍFICO SUIZO S.A. ALIMENTOS S.A.
FRIGORÍFICOS COLOMBIANOS S.A. SCHERING COLOMBIANA S.A.
FRUGAL S.A. TECNIMICRO LABORATORIO DE ANÁLISIS
HOSPITAL DEPARTAMENTAL DE UNIVERSIDAD CATÓLICA INGECAL
VILLAVICENCIO INGENIO PICHICHI S.A. UNIVERSIDAD JORGE TADEO LOZANO
INGENIO RIOPAILA VIKINGOS
INSTITUTO COLOMBIANO AGROPECUARIO
-ICA-

ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales y otros documentos relacionados.

DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5594 RESUMEN

CONTENIDO

Página

INTRODUCCIÓN..................................................................................................................... 1

1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN........................................................................1

2. REFERENCIAS NORMATIVAS....................................................................................1

3. DEFINICIONES............................................................................................................ 2

4. FUNDAMENTO........................................................................................................... 2

4.1 FILTRACIÓN............................................................................................................... 2

4.2 RECUENTO................................................................................................................. 2

4.3 CONFIRMACIÓN.........................................................................................................2

5. DILUYENTES, MEDIOS DE CULTIVO Y REACTIVOS...............................................3

5.1 GENERALIDADES......................................................................................................3

5.2 MEDIO DE CULTIVO...................................................................................................3

5.3 MEDIOS DE CONFIRMACIÓN Y REACTIVOS...........................................................5

6. EQUIPOS Y MATERIAL DE VIDRO............................................................................6

6.1 GENERALIDADES......................................................................................................6

6.2 MATERIAL DE VIDRIO...............................................................................................7

6.3 INCUBADORA............................................................................................................ 7

6.4 LÁMPARA ULTRAVIOLETA.......................................................................................7

7. MUESTREO................................................................................................................. 7
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5594 RESUMEN

Página

8. PROCEDIMIENTO.......................................................................................................7

8.1 GENERALIDADES......................................................................................................7

8.2 FILTRACIÓN POR MEMBRANA................................................................................7

8.3 INCUBACIÓN DE LAS MEMBRANAS........................................................................7

8.4 EXAMEN DE LAS MEMBRANAS...............................................................................8

8.5 CONFIRMACIÓN.........................................................................................................8

9. EXPRESIÓN DE RESULTADOS.................................................................................9

10. INFORME DE ENSAYO............................................................................................10

11. DATOS ESTADÍSTICOS...........................................................................................10

12. INTERFERENCIAS....................................................................................................10

13. ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD.......................................................................11

DOCUMENTO DE REFERENCIA.........................................................................................15

TABLAS

Tabla 1. Etapas requeridas para la confirmación de las colonias

desarrolladas en agar CN.....................................................................................................8

Tabla 2. Ensayo interlaboratorios de Pseudomonas en agar: tasa media de

recuperación (%) con respecto al número presente en agar nutritivo
tras dilución en agua destilada y filtración.......................................................................10

ANEXOS

ANEXO A (Informativo)
INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA SOBRE PSEUDOMONAS AERUGINOSA................12

ANEXO B (Informativo)
MEDIOS ALTERNATIVOS....................................................................................................13

BIBLIOGRAFÍA..................................................................................................................... 14
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5594 RESUMEN

CALIDAD DEL AGUA.

DETECCIÓN Y RECUENTO DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA
POR EL MÉTODO DE FILTRACIÓN POR MEMBRANA

INTRODUCCIÓN

Pseudomonas aeruginosa es un organismo oportunista patógeno para el hombre que es capaz

de crecer en el agua con concentraciones de nutrientes muy bajas. Es conveniente que las
aguas minerales naturales y las aguas de manantial estén exentas de Pseudomonas
aeruginosa, tanto en origen como en el momento de su comercialización, al examinar 250 ml
de muestra. El resto de aguas embotelladas comercializadas tiene que estar exentas de
Pseudomonas aeruginosa en 250 ml de muestra. Algunas veces, por razones de salud pública,
puede investigarse la presencia de Pseudomonas en otros tipos de aguas, entre las que se
incluyen las aguas de piscina y las aguas destinadas al consumo humano. En estos casos
suele examinarse generalmente un volumen de 100 ml.

ADVERTENCIA Los usuarios de esta norma deberían estar familiarizados con las prácticas habituales de
laboratorio. En esta norma no se pretende abordar todos los potenciales problemas relativos a la seguridad que
pudieran presentarse en su utilización. Es responsabilidad del usuario establecer las prácticas de seguridad y salud
laborales y asegurarse de que se cumplen todas las condiciones impuestas por la reglamentación nacional.

IMPORTANTE Es absolutamente indispensable que los ensayos realizados según esta norma sean llevados a
cabo por personal correctamente entrenado.

1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN

Esta norma especifica un método que permite el aislamiento y el recuento de Pseudomonas

aeruginosa en muestras de agua embotellada, mediante una técnica por filtración por
membrana. Este método se puede aplicar a otros tipos de agua con una flora subyacente más
baja, por ejemplo, aguas de piscina y aguas destinadas al consumo humano.

2. REFERENCIAS NORMATIVAS

Los siguientes documentos normativos referenciados son indispensables para la aplicación de

este documento normativo. Para referencias fechadas, se aplica únicamente la edición citada.
Para referencias no fechadas, se aplica la última edición del documento normativo referenciado
(incluida cualquier corrección).

NTC 4491-1, Microbiología de los alimentos y alimentos para animales. Preparación de las
muestras de ensayo, suspensión inicial y diluciones decimales para examen microbiológico.
Parte 1: Reglas generales para la preparación de la suspensión inicial y las diluciones
decimales (ISO 6887-1).
1 de 15
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5594 RESUMEN

NTC 5395, Agua para uso en análisis de laboratorio. Especificación y métodos de análisis.

NTC-ISO 5667-1, Calidad del agua. Muestreo. Parte 1: Directrices para el diseño de programas
de muestreo.

NTC-ISO 5667-2, Calidad del agua. Muestreo. Parte 2: Técnicas generales de muestreo.

NTC-ISO 5667-3, Calidad del agua. Muestreo. Parte 3: Directrices para la preservación y
manejo de las muestras.

ISO 7704, Water Quality. Evaluation of Membrane Filters Used for Microbiological Analyses.

ISO 8199, Calidad del agua. Guía general para el recuento de microorganismos sobre medios
de cultivo.

ISO 19458, Water Quality. Sampling for Microbiological Analysis.

3. DEFINICIONES

Para los propósitos de esta norma se aplica la siguiente definición:

3.1 Pseudomonas aeruginosa. Microorganismos que se desarrollan en medios selectivos que

contienen cetrimida y que producen piocianina o microorganismos que se desarrollan en
medios selectivos que contienen cetrimida, son oxidasa positivos, producen fluorescencia bajo
la luz UV (360  20) nm, y son capaces de producir amoníaco a partir de la acetamida.

2
NORMA TÉCNICA COLOMBIANA NTC 5594 RESUMEN

BIBLIOGRAFÍA

[1] Directiva 80/777/CEE del Consejo, de 15 de julio de 1980, relativa a la aproximación de

las legislaciones de los Estados miembros sobre explotación y comercialización de
aguas minerales naturales. Diario Oficial de las Comunidades Europeas 1980 n° L229/
1-10.

[2] Directiva 96/70/CE del Parlamento Europeo y del Consejo de 28 de octubre de 1996 por
la que se modifica la Directiva 80/777/CEE del Consejo relativa a la aproximación de las
legislaciones de los Estados miembros sobre explotación y comercialización de aguas
minerales naturales. Diario Oficial de las Comunidades Europeas 1996 n° L299/ 26-28.

[3] Directiva 98/83/CE del Consejo de 3 de noviembre de 1998 relativa a la calidad de las
aguas destinadas al consumo humano. Diario Oficial de las Comunidades Europeas
1998 n° L330/ 32-53.

[4] Standard Methods for the Examination of Water and Wasterwater, Method 9213.E.
Membrane filter Technique for Pseudomonas aeruginosa.18 th ed, APHA, AWWA,
WPCF, 2005.

[5] Drake, C. H. 1966. Evaluation of Culture Media for the Isolation and Enumeration of
Pseudomonas aeruginosa. Health Lab. Sci. 3: 10.

[6] Brown, M. R. W. &J. H. Scott Foster. 1970. A Simple Diagnostic Milk Medium for
Pseudomonas aeruginosa. J. Clin. Pathol. 23:172.

[7] Levin, M. A. & V. J. Cabelli. 1972. Membrane Filter Technique for Enumeration of
Pseudomonas aeruginosa. Appl. Microbiol. 24:864.

[8] Dutka, B. J. & K. K. Kwan. 1977. Confirmation of the Single-step membrane filter
procedure for estimating Pseudomonas aeruginosa Densities in Water. Appl. Environ,
Microbiol. 33:240.

[9] Brodsky, M. H. & B W. Ciebin. 1978. Improved Medium for Recovery and Enumeration
of Pseudomonas aeruginosa from Water using Membrane Filters. Appl. Environ.
Microbiol. 36:26.

3
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IMPORTANTE

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