Competencia: Analizar el fundamento y aplicación de las pruebas cruzadas

PRÁCTICA 10.
PRUEBAS CRUZADAS

I. INTRODUCCIÓN

La circulación sanguínea y su importancia fue descubierta por William Harvey en 1628,

sin embargo, la aplicación clínica de las transfusiones sanguíneas ocurrió posterior a la
descripción del sistema sanguíneo eritrocitario ABO por Karl Landstainer. Una vez
resueltos varios aspectos técnicos, en 1937 el médico Bernarnd Fantus establece el
primer centro de transfusión sanguínea en Chicago.

La transfusión sanguínea es un procedimiento médico ampliamente utilizado. En términos

generales, las transfusiones sanguíneas son utilizadas para recuperar y mantener un
volumen sanguíneo adecuado para evitar o tratar un choque hipovolémico. Otra indicación
terapéutica de las transfusiones, son el aporte de células como eritrocitos y/o plaquetas
y proteínas como factores de coagulación, albúmina o anticuerpos (Abs). Es importante
indicar que no existe transfusión de sangre total, ya que se fracciona en tres productos:
concentrado eritrocitario, concentrado plaquetario y plasma.

La transfusión sanguínea es un procedimiento médico frecuente que implica ciertos

efectos adversos que pueden ser severos y comprometer la vida del paciente si previo a
la transfusión no se realizan las pruebas de compatibilidad en forma adecuada.

Las complicaciones post-transfusionales se clasifican de acuerdo con su origen en

inmunológicas, metabólicas e infecciosas (Tabla 1). En esta práctica se abordarán
únicamente los aspectos inmunológicos de la transfusión de concentrados eritrocitarios.

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Tabla 1. Complicaciones de las transfusiones sanguíneas.

I INMUNOLÓGICAS
1. No hemolíticas Ab anti-HLA preformados
Inmediatas: sistemas ABO
2. Hemolíticas
Tardías: sistemas Rh, Kidd y Duffy
3. Inmunomodulación
4. GVH asociada a transfusión
II METABÓLICAS
Acidosis metabólica
1. Toxicidad por citrato
Hipocalcemia
2. Hipercalemia
3. Hipotermia
4. Hemorragia por efecto dilucional
5. Sobrecarga circulatoria
III INFECCIOSAS
1. Hepatitis A, B, C, D, CMV, VEB
2. HIV
3. Sífilis
4. Otras enfermedades virales CMV, VEB, HTVL-1
5. Paludismo
6. Enfermedad de Chagas Tripanosomiasis americana
Yersinia enterocolitica, sepsis por
7. Bacterianas
contaminación de Gram negativos
*Tomado de: Ruiz-Argüelles, G. J. (2009). Fundamentos de Hematología.

El estudio de laboratorio que permite establecer la compatibilidad entre donador y receptor

se llama pruebas cruzadas. Estas se realizan haciendo mezclas de eritrocitos y suero entre
donador y receptor, con el fin de detectar una posible reacción Ag–Ab, la cual, en caso de
ser positiva, indica una incompatibilidad.

Los antígenos (Ags) del sistema ABO son carbohidratos que inducen la producción de Abs
naturales llamados isohemaglutininas, de isotipo IgM. Si un receptor de grupo sanguíneo A
es transfundido con eritrocitos de un donador de grupo B, experimentará una reacción
post-transfusional en la que los Abs anti-B del receptor se fijan en los eritrocitos del
donador e inducen lisis mediada por complemento, liberación de hemoglobina (Hb) e
inducción de inflamación sistémica por la liberación de las anafilatoxinas C3a, C4a y C5a.
Esta reacción es un mecanismo de daño de hipersensibilidad tipo II (HS-II).
Cuando en una transfusión hay incompatibilidad del sistema ABO, la lisis eritrocitaria por
fijación de complemento es mediada por IgM, es intravascular y las manifestaciones
clínicas se presentan generalmente en forma inmediata; cuando existe incompatibilidad por
Ags proteicos (Rh, Kell, Kidd, Duffy, entre otros), los Abs efectores son de clase IgG (previa
sensibilización del receptor), la lisis eritrocitaria es extravascular y los síntomas aparecen
de 2 a 6 días posteriores a la transfusión.
Las reacciones inmediatas y tardías comparten signos y síntomas como fiebre, diaforesis,
náuseas y aumento de las bilirrubinas. En cambio, la lisis intravascular produce Hb libre en
el plasma y en la orina, que es característico de las reacciones inmediatas.

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Otros ejemplos de enfermedades con mecanismo de daño por HS-II citotóxica que involucra
antígenos eritrocitarios, son la enfermedad hemolítica del recién nacido y las anemias
hemolíticas autoinmunitarias.

Los criterios de selección de hemoderivados se presentan en la tabla 2 y 3.

Tabla 2. Opciones, en orden de referencia, para la transfusión de concentrado de eritrocitos

compatibles en los sistemas ABO y Rh (D) en adultos y niños mayores de 4 meses.

Grupo del
Primera Segunda Tercera Cuarta
paciente/receptor
O positivo O positivo O negativo Inexistente Inexistente
O negativo O negativo Inexistente Inexistente Inexistente
A positivo A positivo A negativo O positivo O negativo
A negativo A negativo O negativo Inexistente Inexistente
B positivo B positivo B negativo O positivo O negativo
B negativo B negativo O negativo Inexistente Inexistente
AB positivo ó A positivo ó B positivo ó O positivo ó
AB positivo
negativo negativo negativo negativo
AB negativo AB negativo A negativo B negativo O negativo

Nota: Para la transfusión de preparados de eritrocitos Rh (D) positivos a receptores Rh (D) negativos véase el apartado 11.2.3 de la
norma NOM-253-SSA1-2012

Tabla 3. Opciones para la transfusión de plasma compatible en el sistema ABO y Rh (D).

Orden de preferencia en cuanto al grupo ABO y Rh (D) del

plasma a transfundir
Grupo ABO y Rh
Primera Segunda Tercera Cuarta
(D) del receptor
O positivo ó A positivo ó B positivo ó AB positivo ó
O positivo
negativo negativo negativo negativo
O positivo ó A positivo ó B positivo ó AB positivo ó
O negativo
negativo negativo negativo negativo
A positivo A positivo A negativo AB positivo AB negativo
A negativo A negativo A positivo AB negativo AB positivo
B positivo B positivo B negativo AB positivo AB negativo
B negativo B negativo B positivo AB negativo AB positivo
AB positivo AB positivo AB negativo Inexistente Inexistente
AB negativo AB negativo AB positivo Inexistente Inexistente

Nota: -Los plasmas del grupo Rh (D) negativos que se pretendan transfundir a receptores Rh (D) positivos deberán carecer de
anticuerpos contra el antígeno D, conforme a lo establecido en el apartado 9.5.1.6 de la norma NOM-253-SSA1-2012.
-Los plasmas del grupo Rh(D) positivos que se pretendan transfundir a receptores Rh (D) negativos deberán carecer de contaminación
eritrocitaria.

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El paso inicial de la prueba cruzada se da en medio salino (solución salina), en este medio
los Abs que aglutinan son principalmente IgM. La segunda etapa se da en un medio proteico
(albúmina bovina), el cual favorece la detección de Abs de clase IgG que reaccionan a una
temperatura de 37°C. De no observarse una reacción macroscópica se utiliza el suero de
Coombs para evidenciar una reacción microscópica. La prueba cruzada consta de los
siguientes pasos:

a) Prueba cruzada mayor: consiste en la mezcla del suero del receptor (Abs) con los
eritrocitos del donador (Ags). Esta prueba in vitro es fundamental, por ser la mejor
forma de detectar Abs fijadores de complemento contra los glóbulos rojos
transfundidos; la existencia de aglutinación o hemólisis indica que los Abs del suero
del receptor se han unido a los hematíes del donador por lo que la prueba cruzada es
positiva e incompatible. Cuando no hay aglutinación o hemólisis significa que no hay
Abs en el suero del receptor, considerándose compatible el hemoderivado.
b) Prueba cruzada menor: consiste en la mezcla del suero del donador (Abs) con los
eritrocitos del receptor (Ags). Esta prueba in vitro es fundamental para detectar Abs del
donador que se unan a los Ags eritrocitarios del receptor y provoquen hemólisis.
Cuando no hay aglutinación o hemólisis significa que no hay Abs en el suero del
donador, considerándose compatible el hemoderivado.
c) Autotestigo: consiste en la mezcla de suero (Abs) y eritrocitos (Ags) del receptor,
es útil para la identificación de autoanticuerpos o isoinmunización.
d) Prueba de Coombs: el reactivo de Coombs es un suero con Abs anti-IgG y/o anti-
C3d, con este reactivo se puede evidenciar la presencia de microaglutinaciones no
perceptibles a simple vista.

Al término de las pruebas de compatibilidad se establece el siguiente resultado:

• Compatible: cuando no se observa aglutinación o hemólisis.

• Incompatible: cuando se presenta, aglutinación o hemólisis.

II. OBJETIVOS

1. Conocer la importancia clínica de las pruebas cruzadas en el contexto de una

transfusión sanguínea.
2. Elegir el grupo sanguíneo del donador de un hemoderivado para transfundir, a partir
del grupo sanguíneo del receptor.
3. Interpretar la importancia inmunológica de las pruebas cruzadas mayor y menor.

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III. MATERIAL, REACTIVOS Y EQUIPO

Material Reactivos Equipo

- Albúmina bovina al 22%
- Gradillas - Solución salina isotónica (SSI)
- Tubos de ensaye de - Reactivos: anti-A, anti-B, anti-AB, y anti-Rh - Centrífuga clínica
vidrio - Reactivo de Coombs - Incubadora
- Pipetas Pasteur - Muestra de suspensión de eritrocitos
- Muestra de suspensión de suero

IV. PROCEDIMIENTO

PRUEBAS CRUZADAS PARA LA TRANSFUSIÓN DE CONCENTRADO ERITROCITARIO

1. Determinar el grupo sanguíneo del r e c e p t o r . Reportar en la tabla 3 , indicando

los datos del receptor.
2. Con base en la tipificación del receptor, solicitar muestras piloto del donador en
orden de preferencia. Llenar la tabla 4.
3. Solicitar suero y eritrocitos del donador de acuerdo con el grupo sanguíneo del
receptor.
4. Marcar los tubos de acuerdo con la tabla 5.
5. Los tubos marcados como p ru e ba m a yor sa lin a (PMs), prueba menor salina
(pms) y au t ot e s t igo s a lin a (ATs) se le agregarán 1 gota de solución salina
isotónica y a los tubos marcados con p ru e b a m a yo r a lb ú m in a (PMa), prueba
menor albúmina (pma) y a u t o t e st i g o a lb ú m in a (ATa) se les agregarán 1 gota
de albúmina bovina al 22%.
6. PRUEBA MAYOR (PM): Adicionar a los tubos marcados como PMa, PMs 1 gota
de suero del receptor y 1 gota de la suspensión de eritrocitos del donador.
7. PRUEBA MENOR (pm): Adicionar a los tubos marcados como pma, pms 1 gota
de la suspensión de eritrocitos del receptor y 1 gota de suero del donador.
8. AUTOTESTIGO (AT): Adicionar a los tubos marcados como ATs y ATa 1 gota
de suero del receptor y 1 gota de la suspensión de eritrocitos del receptor.
9. Verificar las mezclas de reacción con ayuda de la tabla 5.

Tabla 3. Identificación del paciente: ______________________________________

Prueba en tubo
Anti-D RESULTADO
Suero Anti-
A B AB Rh Grupo Factor Rh

Aglutinación: + No Aglutinación: -

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Tabla 4. Solicitud del concentrado eritrocitario y paquete de suero o plasma.

SOLICITUD DE TRANSFUSIÓN SANGUÍNEA

Paquete eritrocitario o plaquetario del Paquete de suero o plasma del
donador en orden de preferencia donador en orden de preferencia
Grupo del receptor 1 2 3 4 1 2 3 4

TABLA 5. Guía para la preparación de pruebas cruzadas Mayores y menores (cantidad

en gotas).

Prueba Mayor (PM) Prueba menor (pm) Autotestigo (AT)

Salina (PMs) Albúmina (PMa) Salina (pms) Albúmina (pma) Salina (ATs) Albúmina (ATa)
Eritrocitos
del donador 1 1 1 1
Suero del
donador 1 1 1 1
Eritrocitos
del receptor 1 1
Suero del
receptor 1 1

PRUEBAS RÁPIDAS
10. Agitar los tubos y centrifugar a 1,500 rpm durante un minuto.
11. Resuspender la muestra e interpretar el resultado. Descartar los tubos en donde haya
aglutinación.
12. Reportar si hubo o no aglutinación en la tabla 6.

PRUEBAS ATEMPERADAS
13. Incubar a 37ºC durante 20 min.
14. Centrifugar todos los tubos a 1,500 rpm durante un minuto.
15. Resuspender la muestra e interpretar el resultado. Descartar los tubos en donde
haya aglutinación. Reportar los resultados en la tabla 6.

PRUEBA DE COOMBS (únicamente los tubos en suspensión con albúmina)

16. Lavar los eritrocitos adicionando a los tubos 2 mL de solución salina isotónica.
17. Centrifugar a 1500 rpm durante un minuto.
18. Decantar el sobrenadante y resuspender el botón celular.
19. Adicionar 2 gotas del reactivo de Coombs.
20. Agitar y centrifugar a 1500 rpm durante un minuto.
21. Observar si existe o no aglutinación, interpretar y reportar sus resultados en la tabla
6
22. Concluir sus resultados en la tabla 7.

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V. RESULTADOS

Tabla 6. Resultados de reacciones cruzadas Mayores y menores.

Grupo sanguíneo del donador:

Grupo sanguíneo del receptor:
____________________
____________________
PMs PMa pms pma ATs ATa

Pruebas rápidas

Pruebas atemperadas a 37ºC

Prueba de Coombs
Aglutinación: + No Aglutinación: -

Tabla 7. Resultados de la trasfusión sanguínea.

Muestra Compatible/incompatible
Eritrocitos del donador
Suero del donador

VI. CUESTIONARIO ADICIONAL

2.- En caso de un rechazo hiperagudo ¿Cuáles son las consecuencias inmunológicas?

3.- ¿Qué es el reactivo de Coombs?
5.- ¿Cuál es la implicación de una incompatibilidad en la prueba cruzada menor?
1.- ¿Qué tipo de rechazo de trasplante se genera en la incompatibilidad del grupo sanguíneo
ABO?
2.- ¿Qué es la prueba de Coombs directa e indirecta?
3.- ¿Cuál es el procedimiento a seguir para confirmar un grupo Rh negativo?
4.- ¿En qué consiste las plasmaféresis?
5.- ¿Por qué se debe irradiar la sangre durante su separación?

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VII. BIBLIOGRAFÍA
1. NORMA Oficial Mexicana NOM-253-SSA1-2012, Para la disposición de sangre humana
y sus componentes con fines terapéuticos.
2. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-017-SSA-1993. De los reactivos
hemoclasificadores para determinar grupos del Sistema ABO.
3. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-018-SSA-1993. Del reactivo anti-Rh para identificar
el antígeno D.
4. NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-019-SSA-1993. Del reactivo de Coombs
antiglobulina humana.
5. Abbas A, Lichtman A, Pillai S. Inmunología Celular y Molecular. 10ª ed. España:
Elsevier., 2022. 600 p. ISBN: 9788413822068.
6. Beutler, E. Preservation and clinical use of erythrocytes and whole blood. Ed.
Williams Hematology. 2001. Sixth Ed. Editores: Beutler E, Lichtman MA, Coller BS, Kipps
TJ, SeligsohnU. Ed. McGraw Hill.pp.1879-1892.
7. Calhoun L, Petz LD. Erythrocyte antigens and antibodies. En Williams Hematology.
2001. Sixth Ed. Editores: Beutler E, Lichtman MA, Coller BS, Kipps TJ, Seligsohn U. Ed.
McGraw Hill. 1843-1858 p.
8. Deveau SR. Blood products and their use in traumatic major haemorrhage. Emerg
Nurse. 2016 Feb;23(9):31-7; quiz 39.
9. Male D, Peebles R.S, Male V. Inmunología. 9ª ed. Elsevier., 2021. 432 p. ISBN:
9788413820309.
10. Ruiz Argüelles G.J, Ruiz Delgado G.J. Fundamentos de Hematología. 6ª ed.
Panamericana., 2021. 341p. ISBN: 9786078546428.

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