Pruebas

pretransfusionales

M en C Luis A. Gordillo Reséndiz

Opción Técnica “Banco de Sangre”
Transfusión y riesgos
 Transfusión:
 Procedimiento durante el cual se administra sangre o componentes
de la sangre directamente en el torrente sanguíneo del paciente a
través de una vena. Se administra sangre donada por otra persona o
sangre del paciente que se extrajo y se almacenó para usar cuando
se necesite. También se llama hemotransfusión, transfusión y
transfusión sanguínea.
 Riesgos:
 Enfermedades, aloinmunización, reacciones febriles y hemolíticas,
reacciones de inmunomodulación.
 Manifestaciones:
 Debe sospecharse una reacción aguda cuando ocurre algo de lo siguiente:
fiebre o incremento en más de 1 oC con o sin escalofríos, dolor
en espalda o pecho, hipotensión, náusea, rubor, disnea,
hemoglobinuria, sangrado difuso y oliguria o anuria.
¿Qué son y para que sirven las pruebas
pre-transfusionales?
 Son las pruebas que tienen como fin conocer la compatibilidad
sanguínea entre el donante y el receptor antes de la transfusión de
sangre.
 La importancia de estas pruebas radica en evitar una reacción
hemolítica por el rechazo de la sangre o hemoderivados transfundidos
al receptor, garantizando el éxito de la transfusión.
 Deben de estar acordes a la NOM-253
Pruebas pre-transfusionales

 Tipificación de grupos AB0 y Rh del paciente y de la unidad a transfundir

 Detección de Ac irregulares receptor
 Pruebas cruzadas (mayor y menor)
 Detección de antiglobulina humana.
 Identificación adecuada y completa del paciente
 Solicitud debe estar correctamente llena, sin abreviaturas y firmada por el
médico solicitante.
 Compatibilidad
 Falta de reacción inmune
entre Ag y Ac de donante y
receptor.
 La compatibilidad no
garantiza identidad entre
ambos, solamente indica
que, en ese momento, no
habrá disminución de
rendimiento transfusional
por causa inmune.

http://www.donarsangre.org/grupos-sanguineos/
Factores que afectan las pruebas
pretransfusionales
 Antígeno  Condiciones de reacción
 Interacciones génicas  pH
 La dosis  Concentración de Ag y Ac
 Sitio del antígeno en el eritrocito  Temperatura
 Edad de las células  Tiempo de incubación
 Condiciones de almacenaje  La centrifugación
 Anticuerpo  La fuerza iónica
 Capacidad de fijación del coplemento  El tipo de medio
 Fenómeno de Rouleaux
 La contaminación bacteriana
Ley de acción de masas

 K1
[Antígeno] + [Anticuerpo] [Ag-Ac]

[Antígeno] + [Anticuerpo]
K2
[Ag-Ac]

 K1 = Constante de asociación
 K2 = Constante de disociación

 K = Constante de afinidad
 A mayor afinidad mayor interacción Ag-Ac
Aloinmunización

 Desarrollo de anticuerpos por la exposición a antígenos de

la misma especie
 Tipificación de eritrocitos sistema AB0

 Tipificación  Tipificación inversa

directa  Anticuerpos
 Antígenos de  A: Anti-B
superficie
 B: Anti-A
 A (N-acetil
galactosamina)  AB: Ninguno
 B (Galactosa)  0: Anti-A y Anti-B
 AB (ambos)
 Ninguno
Determinación directa de grupo
sanguíneo en tubo.
 Preparar una solución de eritrocitos lavados al 5%.
 Lavado de eritrocitos: Separar los eritrocitos del plasma, tomar 5 ml de eritrocitos,
agregar 5 – 10 ml de SSF, mezclar por inversión, centrifugar a 2500 rpm/3 min,
repetir 3 veces.
 Preparación suspensión de eritrocitos 5%: 2ml de suspensión = 400ml de eritrocitos +
1600ml de SSF.
 Rotular 4 tubos de hemolisis
 Tubo 1: Testigo, Tubo 2: A, Tubo 3: B, Tubo 4: AB
 Agregar a cada tubo 2 gotas de la suspensión de eritrocitos
 Agregar 2 gotas de antisuero a cada tubo según corresponda, al testigo se le
agregaran dos gotas de albumina bovina.
Determinación directa de grupo
sanguíneo en tubo. (cont…)
 Mezclar y reposar por 2 minutos a temperatura ambiente
 Centrifugar 2500rpm/1min
 Agitar suavemente para comprobar la aglutinación.
 En caso de que exista duda, repetir el procedimiento incubando a 37ºC
durante 30 minutos.
Hemotipificación directa
Testigo A B AB
Determinación inversa de grupo
sanguíneo en tubo.
 Separar el suero del paciente
 Rotular 3 tubos
 Tubo 1: A1, Tubo 2: A2, Tubo 3: B, Tubo 4: O
 Agregar 2 gotas de suero del paciente a cada tubo
 Agregar 2 gotas de eritrocitos conocidos a cada tubo según corresponda
 Mezclar e incubar 2 minutos a temperatura ambiente
 Centrifugar 2500rpm/1min
 Agitar suavemente para comprobar la aglutinación.
 En caso de que exista duda, repetir el procedimiento incubando a 37ºC
durante 30 minutos.
Hemotipificación inversa
 Antígenos sanguíneos se encuentran recubriendo los eritrocitos de cada
persona.
 Anticuerpos contra los antígenos sanguíneos se localizan en el suero o plasma,
en el caso del sistema AB0 se habla de anticuerpos naturales

Grupo Antígenos (Eritrocitos) Anticuerpos (Suero o

sanguíneo plasma)
A A (N-acetilgalactosamina) Anti-B
B B (Galactosa) Anti-A
AB AyB Ninguno
0 Ninguno Anti-A y Anti-B
Reactivo Suero

No hay anticuerpos

No aglutina
A1

Grupo AB
No aglutina
A2

No aglutina
B

No aglutina

0
Reactivo Suero
Anti-B

No aglutina
A1

Grupo A
No aglutina
A2

YYYYYYY
aglutina
YYYYYYY
B

YYYYYYY
No aglutina
YYYYYYY
0
Reactivo Suero
Anti-A

YYYYYYY
aglutina
YYYYYYY
A1

Grupo B
YYYYYYY
YYYYYYY aglutina
A2

No aglutina
B

YYYYYYY
No aglutina
YYYYYYY
0
Reactivo Suero
Anti-A y
Anti-B
YYYYYYY
aglutina
YYYYYYY
A1

Grupo 0
YYYYYYY
YYYYYYY aglutina
A2

YYYYYYY
aglutina
YYYYYYY
B

No aglutina

0
Discrepancias
Factor Rh

 No presenta
anticuerpos
naturales
 Se determina la
presencia del
antígeno D en la
superficie del
eritrocito
Prueba de Coombs (Identificación de Du
o D débil)
 Cuando se detecta un Rh negativo
se debe realizar prueba de
antiglobulina humana.
 Preparar una suspensión de
eritrocitos del 3 al 5 %
 Rotular tubo con la identificación
correspondiente
 Agregar una gota de la suspensión
de eritrocitos
 Añadir una gota de anti-D
 Mezcla e incubar a 37ºC/30
minutos
 Lavar 3 veces la suspensión anterior
con SSF o PBS
 Añadir 5 a 10 ml de SSF o PBS.
 Centrifugar 1000rpm/1 min
 Decantar el sobrenadante
 Repetimos la operación.
 Añadir 2 gotas de antiglobulina
humana (coombs)
 Mezclar y centrifugar 30 segundos a
1000 rpm
 Agitar suavemente para verificar la
aglutinación.
Pruebas cruzadas

 Prueba Mayor
 Eritrocitos del donador + suero del receptor
 Dos gotas del suero del receptor + una gota de eritrocitos lavados al 5% del donador
 Prueba menor
 Eritrocitos del receptor + suero del donador
 Dos gotas del suero o plasma del donador + una gota de eritrocitos lavados al 5% del
receptor.
 Autotestigo
 Dos gotas del suero del receptor + una gota de eritrocitos lavados al 5% del
receptor.
Procedimiento pruebas cruzadas
 Suspensión de eritrocitos del receptor y donador al 5%
 Suero del receptor y donador

 Prueba mayor
 Colocar en un tubo de lisis 2 gotas de la suspensión de eritrocitos al 5%
 Agregar 2 gotas del suero del receptor
 Mezclar y centrifugar 30s a 3400 rpm
 Revisar si existe aglutinación. Si aglutina la prueba es positiva, existen anticuerpos
contra los antígenos eritrocitarios.
 Si la prueba es negativa, probablemente no hay presencia de anticuerpos.
Fase de albumina

 Colocar en un tubo de lisis 2 gotas de la suspensión de eritrocitos al 5%

 Agregar 2 gotas del suero del receptor
 Incubar 15 minutos a 37ºC
 Centrifugar a 1000rpm/1min
 Dos gotas de albumina
 Centrifugar 1000rpm/1 min
 Revisar aglutinación. Si es positiva, hay presencia de anticuerpos incompletos. Si es
negativa, probablemente no hay presencia de anticuerpos
Fase de Coombs

 Realizar 3 lavados con SSF

 Después del último lavado agregar 2 gotas de antiglobulina humana (suero
Coombs)
 Centrifugar a 1000 rpm/15 seg.
 Verificar la aglutinación.

 En caso negativo realizar Coombs indirecto.

Rastreo de anticuerpos irregulares

 Anticuerpos que se forman que se generan por la

exposición a grupos sanguíneos menores, generalmente
por inmunización transfusional o fetomaterna.
 Pueden producir reacciones postransfusionales.
 Su determinación se realiza enfrentando el suero del
receptor a eritrocitos tipados, es decir, eritrocitos que
conocemos exactamente los antígenos de membrana.
Metodología

 Test de Coombs
 Consiste en la incubación previa del suero y de los eritrocito para
sensibilizar a esto últimos. Posteriormente añadimos suero Coombs
para demostrar la presencia o ausencia de los anticuerpos
irregulares.
 Enzimática
 Consiste en tratar previamente los con enzimas como la papaína,
tripsina, bromelina o ficina, para facilitar la aglutinación.
 Prueba a 4ºC
 Consiste en incubar al suero y eritrocitos a 4ºC,posteriormente se
centrifugan para mejorar la aglutinación.
Panel de eritrocitos tipados
 Preparar suspensión de eritrocitos del receptor como autocontrol.
 Rotular 11 tubos de hemolisis con los diferentes grupos menores y el tubo 12
para el autocontrol
 Dispensar 50ml de cada suspensión de eritrocitos en el tubo correspondiente
 Agregar 100ml de suero o plasma del receptor
 Incubar 1 hora a 37ºC en baño de agua
 Lavar 3 veces cada tubo con SSF. En el último llevar a sequedad, dejando solo el
botón de eritrocitos
 Agregar 50ml de suero de Coombs
 Centrifuga 1min/1000rpm
 Verificar la presencia de aglutinación
Pruebas cruzadas

 Donador A (-)
 Receptor O (+)

Eritrocitos Suero receptor Eritrocitos Suero donador

donador receptor
Ag-A Ac-A Ag-D Ac-B
Ac-B

 Se puede donar Suero o plasma

 Donador A(+)
 Receptor A(-)

Eritrocitos Suero receptor Eritrocitos Suero donador

donador receptor
Ag-A Ac-B Ag-A Ac-B
Ag-D

Se pueden donar eritrocitos

 Donador O (+)
 Receptor AB (+)
Prueba Mayor Prueba menor
Eritrocitos Suero receptor Eritrocitos Suero donador
Donador receptor
Ag-D Sin Ac Ag-A Ac-A
Ag-B Ac-B
Ag-D
 Se puede donar eritrocitos
 Donador O(-)
 Receptor AB(-)

Eritrocitos Suero receptor Eritrocitos Suero donador

donador receptor
Ag-A Ac-A
Ag-B Ac-B

 Se puede donar eritrocitos