Instituto Politécnico Nacional.

Escuela Superior de Ingeniería

Química e Industrias Extractivas.

LABORATORIO
ESPECTROSCOPIA
MOLECULAR Y ATOMICA.

 PRACTICA N°2 “Análisis

cuantitativo de un solo componente
determinación de cafeína en
refrescos de cola”.

Grupo:3IV66

 Docente: Angélica Jaime Fonseca

Alumno:

 Torres Orozco Raúl

Objetivos

Determinar la concentración de sustancias orgánicas en muestras problema por medio de

una curva de calibración, aplicando la ley de Beer.

Introducción

La Espectroscopía o Espectrofotometría UV-Vis es hoy en día, una de las técnicas de

análisis más populares debido a su sencillez, accesibilidad y amplio campo de utilización.
La Espectroscopía o Espectrofotometría UV-Vis es una técnica de análisis instrumental que
nos permite determinar la concentración de sustancias orgánicas en solución. Ésta técnica
está fundamentada en la capacidad de las moléculas de absorber radiación
electromagnética dentro del espectro Ultravioleta-Visible, y en que la cantidad de luz
absorbida es directamente proporcional a la concentración.
Cuando la energía electromagnética (en forma de luz) es absorbida por una sustancia
genera un salto desde un estado energético basal, a un estado de mayor energía (excitado).
Cuando esto sucede, la molécula sólo va a absorber la energía necesaria para que se
produzca este estado excitado.
Cada molécula tiene una serie de estados excitados que las distingue del resto de las
moléculas. Como consecuencia, su espectro de absorción, es decir, la absorción que
presenta a diferentes longitudes de onda, es una señal de identidad de ésta.
La región Ultravioleta corresponde al rango de longitudes de onda de 195 a 400 nm. Los
compuestos que contienen en su estructura dobles enlaces aislados, triples enlaces,
enlaces peptídicos, sistemas aromáticos, grupos carbonilo, etc. Tienen su máximo de
absorción en ésta región, por lo que ésta técnica es ideal para la determinación cualitativa
y cuantitativa de compuestos orgánicos.
La región visible permite la apreciación del color visible de una solución, y que corresponde
a la cantidad de energía que transmite, no que absorbe.
La transmitancia de una solución es la relación entre la cantidad de luz transmitida
que llega al detector una vez que atravesó la muestra (I t), y la cantidad de energía
que incidiió sobre ella: %T=(It/Io)x100.
La absorbancia es la cantidad de luz absorbida por la muestra: A= log (1/T) = -
log(T) = -log (It/I0).
Ley de Lambert-Beer. Si se hace incidir radiación monocromática sobre una
muestra con una concentración “C” de una sustancia que absorbe a esa longitud de
onda “λ”, la intensidad de la radiación que la atraviesa, I, está relacionada con la
intensidad incidente I0 y con el espesor de la muestra,l , por la expresión:
Según estas definiciones, queda finalmente la siguiente expresión que se conoce
con el nombre de la ley de Lambert-Beer:

Donde ε es la absortividad molar, que es un valor constante para cada sustancia a

cada longitud de onda. Si se opera, por tanto, a una longitud de onda dada y con
una cubeta de un determinado espesor, l, la absorbancia A, medible directamente,
es proporcional a la concentración molar de la muestra, c, lo que constituye el
fundamento del análisis espectrofotométrico cuantitativo.

Desarrollo de la práctica:
1. Encendido del equipo. Como se aprendió en la práctica de Rutinas de diagnóstico, el
encendido del equipo tiene una secuencia y es la siguiente: Regulador → Equipo →
computadora. Así se hizo, y procedimos a abrir el programa “Lambda 25”.
2. Preparación de estándares. Se procede a la preparación de los estándares 5, 10, 15 y 20
ppm de cafeína y de la muestra diluída.

3. Establcer las condiciones de barrido. Se establecieron las siguientes condiciones en el

software para el equipo:
- Lámpara UV
- Modo ABS
- Ordenada límite de 0-1.5
- Intervalo de longitud de onda: 300 a 200 nm
- Velocidad de barrido: 120nm/seg
4. Obtención del espectrograma. Se introdujeron uno por uno los estándares y las muestras
para obtener el espectrograma, siempre en presencia de un blanco de etanol.
DESARROLLO DE LA PRACTICA

Como preparar soluciones

Medir 50 ml Aforar a 500 ml con

agua destilada

 Solución de cafeína de 100 ppm

Pesar 0.01 g de cafeína y aforar a 100 ml

Instrucciones

Pesar 0.01 g de Aforar a 100 ml un

cafeína matraz
CALCULOS

Método grafico

Curva de Cafeina
2
C (ppm) Absorbancia
20, 1.6367
5 0.464
1.5
Absorbancia

10 0.85562
15, 1.2311
1 15 1.2311
10, 0.85562 abs
0.5 20 1.6367
5, 0.464 Linear (abs)
y = 0.0779x + 0.0735 Kick 0.98024
0 R² = 0.9998
0 5 10 15 20 25 pepsi 0.71452
Concentracion coca 0.6617

Calculo de la concentración de cafeína en muestras a partir de la curva de calibración.

𝑦 + 0.0735 𝐴 − 0.0735
𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏 = 0.0779𝑥 − 0.0735 ∴ 𝑥 = ∴𝐶=
0.0779 0.0779

Donde

y= Absorbancia

x= concentración
𝐴𝐶𝑜𝑐𝑎 = 0.6617
0.6617−0.0735
𝐶𝐶𝑜𝑐𝑎 𝑐𝑢𝑟𝑣𝑎 = = 7.57424 𝑝𝑝𝑚
0.0779
𝐴𝐾𝑖𝑐𝑘 = 0.98024
0.98024−0.0735
𝐶𝐾𝑖𝑐𝑘 𝑐𝑢𝑟𝑣𝑎 = = 11.6525 𝑝𝑝𝑚
0.0779
𝐴𝑝𝑒𝑝𝑠𝑖 = 0.71452
0.71452−0.0735
𝐶𝑝𝑒𝑝𝑠𝑖 𝑐𝑢𝑟𝑣𝑎 = = 8.30556 𝑝𝑝𝑚
0.0779

Aplicándolo por el factor de dilución

𝑉𝑎𝑓𝑜𝑟𝑜
𝐶𝑟𝑒𝑎𝑙 = 𝐶𝑒𝑐.𝑟𝑒𝑐𝑡𝑎 𝑉𝑎𝑙𝑖𝑐𝑢𝑜𝑡𝑎 𝑐𝑜𝑐𝑎𝑝𝑒𝑝𝑠𝑖𝑘𝑖𝑐𝑘 = 0.5𝑚𝑙
𝑉𝑎𝑙𝑖𝑐𝑢𝑜𝑡𝑎
PM de la cafeína= 194190mg/mol

1. Coca
10𝑚𝑙
𝐶𝑟𝑐𝑜𝑐𝑎 = 7.55361𝑝𝑝𝑚 ( ) = 151.485𝑝𝑝𝑚
0.5𝑚𝑙
𝑚𝑔
151.485 𝑙 𝑚𝑜𝑙
𝑀𝑟𝑐𝑜𝑐𝑎 = 𝑚𝑔 = 0.00078 𝐿
194190 𝑚𝑜𝑙
2. Kick

10𝑚𝑙
𝐶𝑟𝑘𝑖𝑐𝑘 = 11.6525𝑝𝑝𝑚 ( ) = 233.05𝑝𝑝𝑚
0.5𝑚𝑙
𝑚𝑔
233.05 𝑙 𝑚𝑜𝑙
𝑀𝑟𝑘𝑖𝑐𝑘 = 𝑚𝑔 = 0.0012 𝐿
194190 𝑚𝑜𝑙
3. Pepsi
10𝑚𝑙
𝐶𝑟𝑝𝑒𝑝𝑠𝑖 = 8.30556𝑝𝑝𝑚 ( ) = 164.111𝑝𝑝𝑚
0.5𝑚𝑙
𝑚𝑔
164.111 𝑙 𝑚𝑜𝑙
𝑀𝑟𝑝𝑒𝑝𝑠𝑖 = 𝑚𝑔 = 0.000845 𝐿
194190 𝑚𝑜𝑙

Tabla de resultados

Kick pepsi Coca

Concentración ppm 11.6525 8.30556 7.57424

Concentración real
233.05 164.111 151.485
ppm
Molaridad real 0.0012 0.000845 0.00078
Método analítico

Abs a λ272 Concentración Concentración E ( L/mol*cm) Eprom( L/mol*cm)

( ppm) (mol/L)
0.4640 5 0.00003 18020.832 16616.369

0.85562 10 0.00005 16615.2

1.2311 15 0.00008 15937.8206

1.6367 20 0.00010 15891.53865

0.98024 Kick 0.00006 16616.369

0.71452 Pepsi 0.00004 16616.369

0.6617 coca 0.0000398 16616.369

Cambiando de ppm a mol

PM de la cafeína= 194190mg/mol

𝑚𝑔
5 𝐿 𝑚𝑜𝑙
𝐶5𝑝𝑝𝑚 = 𝑚𝑔 = 0.00003 𝐿
194190 𝑚𝑜𝑙
𝑚𝑔
10 𝐿 𝑚𝑜𝑙
𝐶10𝑝𝑝𝑚 = 𝑚𝑔 = 0.00005 𝐿
194190 𝑚𝑜𝑙
𝑚𝑔
15 𝐿 𝑚𝑜𝑙
𝐶15𝑝𝑝𝑚 = 𝑚𝑔 = 0.00008
194190 𝑚𝑜𝑙 𝐿

𝑚𝑔
20 𝐿 𝑚𝑜𝑙
𝐶20𝑝𝑝𝑚 = 𝑚𝑔 = 0.00010 𝐿
194190 𝑚𝑜𝑙
Absortividad molar

Sabiendo que

𝑨𝒃𝒔
𝑬=
𝒃∗𝒄
0.464 𝐿
𝐸5𝑝𝑝𝑚 = = 18020.832
𝑚𝑜𝑙 𝑚𝑜𝑙 ∗ 𝑐𝑚
1𝑐𝑚 ∗ 0.00003 𝐿

0.85562 𝐿
𝐸10𝑝𝑝𝑚 = = 16615.28478
𝑚𝑜𝑙 𝑚𝑜𝑙 ∗ 𝑐𝑚
1𝑐𝑚 ∗ 0.00005 𝐿
1.23110 𝐿
𝐸15𝑝𝑝𝑚 = = 15937.8206
𝑚𝑜𝑙 𝑚𝑜𝑙 ∗ 𝑐𝑚
1𝑐𝑚 ∗ 0.00008 𝐿
1.63670 𝐿
𝐸10𝑝𝑝𝑚 = = 15891.53865
𝑚𝑜𝑙 𝑚𝑜𝑙 ∗ 𝑐𝑚
1𝑐𝑚 ∗ 0.00010 𝐿
𝐿
(18020.832 + 16615.28478 + 15937.8206 + 15891.53865) 𝑚𝑜𝑙 ∗ 𝑐𝑚 𝐿
𝐸𝑝𝑟𝑜𝑚 = = 16616.369
4 𝑚𝑜𝑙 ∗ 𝑐𝑚
Concentración de las muestras y aplicándolo por el factor de dilución

Sabiendo que
𝐴𝑏𝑠
𝐶𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 =
𝜀∗𝑏

Y
𝐿
𝐸𝑝𝑟𝑜𝑚 = 16616.369
𝑚𝑜𝑙 ∗ 𝑐𝑚

0.98024 𝑚𝑜𝑙
𝐶𝑘𝑖𝑐𝑘 = = 0.00006
𝐿 𝐿
16616.369 𝑚𝑜𝑙 ∗ 𝑐𝑚 ∗ 1𝑐𝑚
10
𝑚𝑜𝑙 1000 𝐿 𝑚𝑜𝑙
𝐶𝑟𝑘𝑖𝑐𝑘 = 0.00006 ∗ = 0.00118
𝐿 0.5 𝐿
1000 𝐿
0.71452 𝑚𝑜𝑙
𝐶𝑝𝑒𝑝𝑠𝑖 = = 0.00004
𝐿 𝐿
16616.369 𝑚𝑜𝑙 ∗ 𝑐𝑚 ∗ 1𝑐𝑚
10
𝑚𝑜𝑙 1000 𝐿 𝑚𝑜𝑙
𝐶𝑟𝑝𝑒𝑝𝑠𝑖 = 0.00004 ∗ = 0.00086
𝐿 0.5 𝐿
1000 𝐿
0.6617 𝑚𝑜𝑙
𝐶𝑐𝑜𝑐𝑎 = = 0.0000398
𝐿 𝐿
16616.369 𝑚𝑜𝑙 ∗ 𝑐𝑚 ∗ 1𝑐𝑚
10
𝑚𝑜𝑙 1000 𝐿 𝑚𝑜𝑙
𝐶𝑟𝑝𝑒𝑝𝑠𝑖 = 0.0000398 ∗ = 0.000796
𝐿 0.5 𝐿
1000 𝐿

Tabla de resultados

M. analítico Kick Pepsi Coca

Molaridad real 0.00118 0.00086 0.000796

M. grafico Kick Pepsi Coca

Molaridad real 0.0012 0.00085 0.00078

Observaciones

Durante la experimentación es importante tener bien seleccionado el blanco que se va a

utilizar que en este caso fue el etanol, otra cosa que se tendría que tener en cuenta es tener
cuidado al colocar la celda en el espectrofotómetro ya que tiene caras más lisas que otras
no se debe de tocar la parte lisa ya que causan interferencias y esto hace que tengamos
malas proyecciones, está de más decir que la celda antes de utilizarla hay que ver si está
completamente limpia y seca

Conclusiones

A la hora de aforar se tiene que tener mucho cuidado en la exactitud ya que con ello si
llegamos a tener menos o más podemos afectar a la concentración teórica ya haciendo
dilución la concentración real saldría afectada, toda está practica partió de la ley de Beer.
Cuestionario

1. Explique la ley de Lambert-Beer

R= La ley de Beer-Lambert relaciona la intensidad de luz entrante en un medio con
la intensidad saliente después de que en dicho medio se produzca absorción.

2. Diga cuales son las principales limitaciones de esta ley.

R= La concentración. Sólo es aplicable a disoluciones diluidas (menor 10-2 M); en
disoluciones concentradas la distancia entre partículas absorbentes es tan pequeña
que se produce una modificación en la distribución de cargas de las mismas, lo que
se traduce en una alteración en la capacidad de absorción a una longitud de onda
determinada. Este efecto se puede eliminar mediante dilución.
 La interacción entre el soluto y la radiación debida a mecanismos diferentes
a la absorción pero que producen alteraciones en la intensidad de la luz,
tales como la dispersión, reflexión, la fluorescencia, etc.
 Utilización de radiación no monocromática, puesto que la ley está definida
para radiaciones con una sola longitud de onda. Sin embargo, si la calidad
del equipo no es buena, se obtienen bandas de radiaciones con un estrecho
intervalo de longitudes de onda.
  Falta de uniformidad de la muestra o especie absorbente, o presencia de
impurezas.
 Desviaciones químicas, debidas a reacciones del absorbente con el
disolvente

3. En la ecuación de Lambert-Beer, explique que es el coeficiente de

Absorción Molar
R= Coeficiente de extinción puede referirse a distintas magnitudes relacionadas con
la absorción de luz en un medio material:
En química, el coeficiente másico de extinción (también llamado coeficiente másico de
atenuación o coeficiente másico de absorción) y el coeficiente molar de extinción son
parámetros que definen cuán fuertemente una sustancia absorbe la luz a una longitud de
onda dada por unidad de masa o por concentración molar, respectivamente.
4. Explique en qué consiste el método de cuantificación por Curva de Calibración
R= La curva de calibración es un método muy utilizado en química analítica para
determinar la concentración de una sustancia (analito) en una muestra desconocida,
sobre todo en disoluciones. El método se basa en la relación proporcional entre la
concentración y una determinada señal analítica (propiedad). Conociendo esta
relación, será posible conocer la concentración en una muestra dada mediante la
medida de esa señal. La relación concentración – señal se suele representar en una
gráfica a la que se le conoce como curva de calibración o curva de calibrado.
5. ¿Que otro método de cuantificación existe y que casos puede ser utilizado?
R= Colorimetría: que implica reacciones en disolución con formación en color y la
comparación subsiguiente de intensidades de haces de luz visible, transmitidos a
través de la solución, que se analiza con una serie de soluciones estándares con
una gradación establecida de color.
6. Defina los siguientes términos
a) Absorbancia: se relaciona la intensidad que sale o se transmite con la
intensidad que ingresa o incidente. La absorbancia, en definitiva, cuantifica el
fenómeno que ocurre con la radiación lumínica y las sustancias. Al incidir la luz
sobre la muestra, una parte de la radiación es absorbida por la sustancia.
b) Transmitancia: La transmitancia o transmitencia es una magnitud que expresa
la cantidad de energía que atraviesa un cuerpo en la unidad de tiempo
7. ¿Cuáles son los factores que influyen en los máximos de la absorbancia?
R= pH, concentración de sal y disolvente
8. Mencione los factores que influyen en los corrimientos de la longitud de onda.
R= Las longitudes de onda de las radiaciones que una molécula puede absorber y
la eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atómica y de las
condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza iónica, constante dieléctrica), por lo
que dicha técnica
9. ¿Qué características deben tener los disolventes empleados en la técnica UV-Vis?
R=
 Bibliografía:
- “Determinación de cafeína por UV-Vis” FarmUpibi
http://farmupibi.blogspot.mx/2015/03/determinacion-de-cafeina-por-uv-vis.html
- http://navarrof.orgfree.com/Docencia/AnalisisInstrumental/UT2/UV2.htm
- Escuela Superior de Ingeniería Química e Industrias Extractivas. “Manual de
prácticas de laboratorio de Espectroscopía Molecular y Atómica”.