Tinciones Más Frecuentemente Utilizadas para El Estudio Histológico

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Histología y biología celular, 2e
Capítulo 2: Técnica histológica y sus aplicaciones
Tinciones más frecuentemente utilizadas para el estudio histológico
Debido a que las células y el material intracelular son transparentes, es necesario utilizar colorantes, mismos que son identificables en función de su
afinidad por las diferentes estructuras celulares, aprovechando sus propiedades físicas y químicas. Los fenómenos físicos pueden ser: fuerzas de
capilaridad y ósmosis, absorción y adsorción. En cambio, las reacciones químicas, por lo general, tienen que ver con cromógenos que poseen la
propiedad de reducirse con facilidad. Aprovechando esta capacidad, cabe utilizar diversos métodos de tinción y referirse a los más comunes. La
manera en que se combinan estos colorantes con los tejidos permite adentrarse en la fascinante área de las tinciones de rutina y especiales que se
mencionan a continuación.
Hematoxilina y eosina
La combinación de estos dos colorantes tiñe los núcleos de azul, los citoplasmas en rosa, el músculo en tonos rojizos a rosados fucsia, los glóbulos
rojos en naranja o rojo y la fibrina en rosa intenso: la hematoxilina tiñe los núcleos de azul oscuro y es el colorante natural más utilizado, el cual se
extrae del palo de Campeche (especie nativa de Centroamérica). En 1860 comenzó a usarse para tinciones de tejidos, la solución de este colorante
combinado con aluminio, tungsteno, hierro y otros elementos, es utilizada para teñir núcleos. La eosina es el colorante más usado en soluciones
alcohólicas, mismo que tiñe el citoplasma en diferentes tonos de rosa; es la tinción más útil y rutinaria en la mayoría de los laboratorios (figura 21).
Figura 21.
Resalta en esta imagen las diferencias que la tinción de hematoxilina y eosina permite identificar: núcleos en morado y citoplasma en rosa (páncreas).
Métodos tricrómicos
Se emplean tres colorantes para teñir distintos componentes en diversos colores. Muchos métodos tricrómicos pueden utilizarse para poner de
manifiesto la arquitectura general, resaltar las fibras de sostén o diferenciar el tejido conjuntivo de las fibras musculares, el colágeno y las fibras
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reticulares se tiñen en medios muy ácidos con colorantes ácidos.
Tinciones más frecuentemente utilizadas para el estudio histológico, Verónica RodríguezMata; Vianey Rodríguez Lara; Teresa I. Fortoul van der Page 1 / 17
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Entre ellas, la técnica más común es el tricrómico de Masson (figura 22), que requiere fijación o posfijación en Bouin, y permite ver:
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Métodos tricrómicos
Se emplean tres colorantes para teñir distintos componentes en diversos colores. Muchos métodos tricrómicos pueden utilizarse para poner de
manifiesto la arquitectura general, resaltar las fibras de sostén o diferenciar el tejido conjuntivo de las fibras musculares, el colágeno y las fibras
reticulares se tiñen en medios muy ácidos con colorantes ácidos.
Entre ellas, la técnica más común es el tricrómico de Masson (figura 22), que requiere fijación o posfijación en Bouin, y permite ver:
Figura 22.
La técnica tricrómico de Masson identifica el tejido conjuntivo (colágeno) en color azul, los núcleos en negro y la queratina en rojo (piel de axila).
a. Núcleos en negro.
b. Músculo, citoplasma y queratina en rojo.
c. Colágena en azul o verde dependiendo del contraste que se use.
El tricrómico de Gallego (figura 23) le sigue en importancia y permite observar:
Figura 23.
En este corte de tendón, la técnica de tricrómico de Gallego tiñe al colágeno de verde y los núcleos en azulnegro.
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Tinciones más frecuentemente utilizadas para el estudio histológico, Verónica RodríguezMata; Vianey Rodríguez Lara; Teresa I. Fortoul van der
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El tricrómico de Gallego (figura 23) le sigue en importancia y permite observar:
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Figura 23.
En este corte de tendón, la técnica de tricrómico de Gallego tiñe al colágeno de verde y los núcleos en azulnegro.
a. Núcleos en azul.
b. Fibras elásticas en magenta.
c. Eritrocitos en verde limón.
d. Otras estructuras en verde.
Tricrómico de Gomori (figura 24), se usa tanto para tejidos como para extendidos celulares y se visualizan:
Figura 24.
La técnica de tricrómico de Gomori da el colágeno en verdeazul, los núcleos en azul o negro, las células β del páncreas, rosa y los eritrocitos en color
naranja (páncreas).
a. Fibras musculares en rojo.
b. Colágeno en verde. Page 3 / 17
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c. Núcleos de azul a negro.
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a. Fibras musculares en rojo.
b. Colágeno en verde.
c. Núcleos de azul a negro.
d. Fibras elásticas, células β de los islotes pancreáticos y los gránulos de la hipófisis, en tonos que van desde el violeta hasta el morado.
Para fibras elásticas se utiliza la tinción de Verhoeff (figura 25) que permite ver:
Figura 25.
Las fibras elásticas resaltan en color negro con la tinción de Verhoeff. En esta arteria elástica (aorta) es muy notoria su identificación en la capa media.
a. Fibras elásticas negras.
b. Núcleos en negro.
c. Colágeno en rojo.
d. Otras estructuras en amarillo.
Una modificación a la tinción de Mallory (figura 26) permite utilizarla para tejido nervioso y permite observar:
Figura 26.
Con la tinción de Mallory el tejido conjuntivo se ilumina en tonos de azul, de igual manera que el cartílago (pulmón).
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Una modificación a la tinción de Mallory (figura 26) permite utilizarla para tejido nervioso y permite observar:
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Figura 26.
Con la tinción de Mallory el tejido conjuntivo se ilumina en tonos de azul, de igual manera que el cartílago (pulmón).
a. Núcleos, mielina y eritrocitos en rojobrillante.
b. Tejido conjuntivo, astrocitos, moco, amiloide, matriz ósea, cartilaginosa y otras sustancias hialinas en diferentes tonos de azul.
c. Fibras elásticas en rosa.
Métodos argénticos
En condiciones apropiadas, determinados componentes biológicos reducen el nitrato de plata, que se precipita en forma de depósitos negros de plata
metálica en el lugar donde se produce la reducción química, la cual requiere de la ayuda de agentes reductores. Si se modifican las condiciones de la
solución de nitrato de plata que se utilice, es factible emplearla para manifestar una amplia variedad de estructuras como membranas basales, fibras
reticulares y melanina.
En el tejido nervioso también se emplea el nitrato de plata, seguido de la plata amoniacal; en el caso de bloques de parafina con tejido se realiza una
impregnación por largos lapsos, utilizando otros reactivos como cloruro de oro e hiposulfito de sodio y después se hacen los cortes, lo que las
convierte en técnicas muy costosas. Considere a continuación varios ejemplos:
GrosBielschowsky (figura 27), observe:
Figura 27.
Cuando se aplica la técnica de GrosBielschowsky se observan los axones en negrorojizo y las neurofibrillas en negro (nervio periférico).
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GrosBielschowsky (figura 27), observe:
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Figura 27.
Cuando se aplica la técnica de GrosBielschowsky se observan los axones en negrorojizo y las neurofibrillas en negro (nervio periférico).
a. Axones en negro.
b. Neurofibrillas en negro.
RíoHortega (figura 28), neurofibrillas en negro.
Figura 28.
La técnica RíoHortega tiñe las neurofibrillas y cuerpos neuronales en negro (corteza cerebral).
Grimelius (figura 29).
Figura 29.
Con la tinción de Grimelius, las células del sistema neuroendocrino difuso resaltan en color negro (intestino).
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Grimelius (figura 29).
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Figura 29.
Con la tinción de Grimelius, las células del sistema neuroendocrino difuso resaltan en color negro (intestino).
Los gránulos en las siguientes células se aprecian en negro.
a. Células α del páncreas.
b. Células gastrointestinales enterocromafines.
c. Células C de la tiroides.
d. Células productoras de adrenalina y noradrenalina.
e. Células de la hipófisis relacionadas con la secreción de ACTH.
f. Las demás estructuras se ven del color del contraste utilizado, como en el caso de la eosina, que se observa en tonos rosarojos.
SevierMunger (figura 210).
Figura 210.
En esta imagen de corteza cerebral, las fibras nerviosas se ven negras y el resto en color café.
a. Fibras nerviosas en negro.
b. Otras estructuras en diferentes tonos de café.
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Para fibras reticulares se utiliza la técnica de GordonSweet (figura 211), que está sustituyendo a la de Wilder, ya que en esta última se emplea
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nitrato de uranio, muy difícil de manipular y desechar, con lo cual se observan:
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a. Fibras nerviosas en negro.
b. Otras estructuras en diferentes tonos de café.
Para fibras reticulares se utiliza la técnica de GordonSweet (figura 211), que está sustituyendo a la de Wilder, ya que en esta última se emplea
nitrato de uranio, muy difícil de manipular y desechar, con lo cual se observan:
Figura 211.
Con la técnica de GordonSweet en hígado, las fibras reticulares se marcan en color negro.
a. Fibras reticulares en negro.
b. Núcleos en rosarojo.
c. Fondo en rosa pálido.
Otras técnicas para tejido nervioso
No requieren el uso de sales de plata y facilitan la diferenciación de sus estructuras. A continuación se listan algunas.
El método de Luxol Fast Blue (figura 212) es un colorante soluble en alcohol en el cual la base de la lipoproteína reemplaza la base del colorante y
permite que el tejido se tiña. Es factible contrastarlo con reactivo de Schiff y es ampliamente utilizado para tejido nervioso, en el cual se observa:
Figura 212.
La técnica con Luxol tiñe mielina en azul y cuerpos neuronales en rosa.
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a. Mielina en azul.
permite que el tejido se tiña. Es factible contrastarlo con reactivo de Schiff y es ampliamente utilizado para tejido nervioso, en el cual se observa:
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Figura 212.
La técnica con Luxol tiñe mielina en azul y cuerpos neuronales en rosa.
a. Mielina en azul.
b. Membranas basales, hongos y cuerpos neuronales en rosa.
Nissl distingue (213).
Figura 213.
Con la técnica de Nissl los cuerpos neuronales y la mielina se tiñen de azul (médula espinal).
a. Células nerviosas en azul brillante.
b. Fondo menos azul.
Kluver Barrera (figura 214).
Figura 214.
La técnica de Kluver Barrera muestra mielina en azul y las otras estructuras en rosa o morado (corteza cerebral).
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Kluver Barrera (figura 214). Access Provided by:
Figura 214.
La técnica de Kluver Barrera muestra mielina en azul y las otras estructuras en rosa o morado (corteza cerebral).
a. Mielina, fosfolípidos en azul.
b. Células en tonos que van del rosa al violeta.
Métodos para carbohidratos
Ácido peryódico de Schiff (PAS) (figura 215).
Figura 215.
La glándula sublingual marca en rosa las mucosustancias de sus ácinos mucosos.
Algunos de los múltiples usos de la reacción incluyen:
1. Demostración de fibras reticulares y membranas basales.
2. Demostración de hongos.
3. Demostración de ciertos tipos de mucosustancias secretadas por el epitelio de varios órganos del tracto digestivo, respiratorio y genital femenino
(cérvix).
Todas ellas se pueden ver en PAS positivas en color magenta con núcleos azules.
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Técnicas que utilizan azul alciano
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El azul alciano es un colorante básico polivalente soluble en agua y tiñe en azul por la presencia de moléculas de cobre. En soluciones acuosas
2. Demostración de hongos. Access Provided by:
3. Demostración de ciertos tipos de mucosustancias secretadas por el epitelio de varios órganos del tracto digestivo, respiratorio y genital femenino
(cérvix).
Todas ellas se pueden ver en PAS positivas en color magenta con núcleos azules.
Técnicas que utilizan azul alciano
El azul alciano es un colorante básico polivalente soluble en agua y tiñe en azul por la presencia de moléculas de cobre. En soluciones acuosas
reacciona con compuestos que contienen grupos aniónicos, tales como mucosustancias ácidas, mucinas ácidas y ácido desoxirribonucleico (DNA); se
utiliza con diferente pH.
Con pH 2.5 se tiñen (figura 216):
Figura 216.
Otra tinción para mucosustancias ácidas es la técnica de azul alciano pH 2.5, lo que es muy notorio en este corte de estómago.
a. Mucosustancias carboxiladas y sulfatadas, las mucinas ligeramente ácidas las tiñe en azul.
b. Núcleos rojos.
c. Citoplasma rosa pálido.
Con pH 1 se tiñen (figura 217):
Figura 217.
Cuando el pH es de 1, las mucosustancias más sulfatadas se tiñen de azul (estómago).
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Con pH 1 se tiñen (figura 217):
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Figura 217.
Cuando el pH es de 1, las mucosustancias más sulfatadas se tiñen de azul (estómago).
a. Mucosustancias sulfatadas en azul.
b. El resto del tejido puede verse rosa, según el contraste que se decida utilizar.
Métodos metacromáticos
Ciertos colorantes reaccionan con diferentes componentes del tejido, tiñéndolos en diferente color al del colorante que originalmente había sido
utilizado. Algunos ejemplos de este fenómeno ocurren con: azul de metileno, azul de toluidina, azure A, B, C, tionina, café de Bismarck, safranina,
cristal violeta y violeta de metilo. Las sustancias que se tiñen de forma metacromática son llamadas cromótropos, y su propiedad común es el ser
estructuras con un alto peso molecular. En este grupo se encuentran el amiloide, los glucosaminoglucanos, los gránulos de las células cebadas, los
mucopolisacáridos sulfatados, así como los ácidos nucleicos.
Son de uso común las tinciones de Giemsa o Wright (figura 218), ambas con resultados similares; se observan:
Figura 218.
Con la tinción de Wright, en la sangre se pueden identificar los leucocitos, como en esta imagen en la que se aprecia un linfocito y un eosinófilo con sus
gránulos rojizos.
b. Eritrocitos en rojo. Page 12 / 17
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c. Cromatina y glóbulos blancos en morado.
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b. Eritrocitos en rojo.
c. Cromatina y glóbulos blancos en morado.
d. Gránulos de eosinófilos en rosa.
e. Gránulos de neutrófilos en morado.
f. Bacterias en azul oscuro.
g. Núcleos de parásitos protozoarios en rojo.
h. Citoplasma basofílico en linfocitos y monocitos; para los protozoarios en azul.
Métodos para demostrar pigmentos
Los pigmentos son componentes identificables en las células normales, aunque también en condiciones patológicas. Se clasifican en dos grupos:
a. Como artefactos, al fijar el tejido; los más comunes son los que ocasionan precipitados: debido al formaldehído, al mercurio presente en
fijadores como Zenker y Helly, y depósitos por cromo presente en fijadores como Orth, Müller y Kolmer, por mencionar algunos.
b. Los que están presentes dentro de las células llamados pigmentos endógenos; entre ellos los más comunes son: hemoglobina (que es una
proteína básica ligada al hierro de color rojizo), melanina (la cual consta de grupos que forman de manera natural polímeros complejos de color
cafénegros) y lipofuscina (cuya composición química es variable y compleja de color amarillocafé resultantes de la oxidación y polimerización de
lípidos insaturados).
El método de Perls (figura 219) se utiliza para demostrar hemosiderina, que es un producto de la degradación de la hemoglobina (pigmento
endógeno rico en hierro).
Figura 219.
Cuando se quiere identificar la presencia de hemosiderina se recurre al método de Perls, que la tiñe en azul (coágulo en la luz de un vaso).
a. Hierro en azul de Prusia.
b. Fondo en rosarojo.
El método de FontanaMasson (figura 220) identifica melanina en color negro.
Figura 220.
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En el caso de la melanina, la tinción de Fontana Masson la tiñe en negro, como es el caso del tejido aquí observado; los núcleos se tiñen de rojo
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a. Hierro en azul de Prusia.
b. Fondo en rosarojo.
El método de FontanaMasson (figura 220) identifica melanina en color negro.
Figura 220.
En el caso de la melanina, la tinción de Fontana Masson la tiñe en negro, como es el caso del tejido aquí observado; los núcleos se tiñen de rojo
(melanoma).
a. Gránulos argentafines en negro.
b. Núcleos y citoplasma de rosa a rojo.
La lipofuscina (figura 221) fue demostrada con el método del PAS y se aprecia en rojomagenta.
Figura 221.
La lipofuscina en miocardio se identifica con facilidad utilizando la técnica de PAS, que la hace ver rojomagenta (corazón).
Métodos para detectar ácidos nucleicos
Cuando el tejido se trata con ácido clorhídrico (figura 222), el ácido ribonucleico (RNA) se degrada, pero el DNA mantiene mejor su estructura, por lo
que es la técnica de preferencia para identificar las fases en el ciclo celular, haciendo evidentes la posición de los cromosomas en el citoplasma
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durante la mitosis. Los cromosomas se observan de color magenta.
Figura 222.
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Métodos para detectar ácidos nucleicos
Cuando el tejido se trata con ácido clorhídrico (figura 222), el ácido ribonucleico (RNA) se degrada, pero el DNA mantiene mejor su estructura, por lo
que es la técnica de preferencia para identificar las fases en el ciclo celular, haciendo evidentes la posición de los cromosomas en el citoplasma
durante la mitosis. Los cromosomas se observan de color magenta.
Figura 222.
La belleza de los cromosomas en movimiento se identifica de forma maravillosa con la técnica de Feulgen (raíz de lirio).
Métodos para demostrar microorganismos
Los microorganismos de importancia médica son subdivididos en los siguientes grupos:
a. Bacterias; organismos unicelulares cuya talla varía entre 0.2 y 5 micrómetros.
b. Hongos; de los cuales existe una gran variedad y se clasifican por su forma.
c. Virus; organismos diminutos, la mayoría son visibles sólo mediante el microscopio electrónico.
d. Protozoarios, mismos que parecen poseer estructuras muy simples pero tienen funcionalidad muy compleja.
BrownBrenn para demostrar bacterias.
a. Células grampositivas azulnegro.
b. Células gramnegativas rosarojo.
c. Citoplasma amarillocafé.
d. Tejido conjuntivo rojo.
e. Tejido necrótico café amarillento.
ZiehlNeelsen (figura 223) para bácilos ácidorápidos. Se utiliza la fuscina en una solución de fenol que es el responsable de resaltar la tinción y
aparentemente se combina dentro del bacilo ácidorápido, también funciona como solvente, existen diversas opiniones del porqué ocurre, pero
muchos investigadores piensan que se debe a la permeabilidad selectiva de la membrana celular, además, parece que hay una correlación entre el
contenido de lípidos y la habilidad para teñirse, esto permite visualizar:
Figura 223.
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A fin de identificar a los bacilos ácidoalcohol resistentes en el pulmón, se emplea la técnica de ZiehlNeelsen que los tiñe de rojo (pulmón).
e. Tejido necrótico café amarillento. Access Provided by:
ZiehlNeelsen (figura 223) para bácilos ácidorápidos. Se utiliza la fuscina en una solución de fenol que es el responsable de resaltar la tinción y
aparentemente se combina dentro del bacilo ácidorápido, también funciona como solvente, existen diversas opiniones del porqué ocurre, pero
muchos investigadores piensan que se debe a la permeabilidad selectiva de la membrana celular, además, parece que hay una correlación entre el
contenido de lípidos y la habilidad para teñirse, esto permite visualizar:
Figura 223.
A fin de identificar a los bacilos ácidoalcohol resistentes en el pulmón, se emplea la técnica de ZiehlNeelsen que los tiñe de rojo (pulmón).
a. Bacilos ácidorápidos rojo brillante.
b. Otros elementos tisulares azules.
Grocott para hongos (figura 224). El primer paso en el procedimiento es la oxidación del tejido y polisacáridos del hongo a grupos aldehído que
después son reducidos con nitrato de plata a plata metálica, reacción propiciada por la adición de metenamina (que tiene propiedades
alcalinizadoras) y la solución de borato (la cual funciona como un búfer), el cloruro de oro para revelar a la plata metálica, el tiosulfato para fijar la
reacción de la plata en el tejido y detenerla, por último, se utiliza un contraste que por lo general es el verde rápido, de manera que permite ver:
Figura 224.
Para identificar hongos, la técnica de Grocott los resalta en color negro (pulmón).
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a. Hongos en negro.
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b. El resto del tejido en verde.
reacción de la plata en el tejido y detenerla, por último, se utiliza un contraste que por lo general es el verde rápido, de manera que permite ver:
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Figura 224.
Para identificar hongos, la técnica de Grocott los resalta en color negro (pulmón).
a. Hongos en negro.
b. El resto del tejido en verde.
Antes de cerrar este capítulo es preciso recalcar la dificultad que implica obtener tejido normal en óptimas condiciones de fijación y que personal
experto lo haya procesado, por lo cual se requiere que el estudiante trate con sumo cuidado las preparaciones que tiene el privilegio de observar en
las aulaslaboratorio de su escuela o facultad, pues ello permitirá que futuras generaciones también las utilicen y continúen enriqueciendo su
aprendizaje sobre la Histología.
Correlación clínica
En 1981, Robert Knodell propuso una clasificación histológica para evaluar la actividad de la enfermedad en el caso de la hepatitis crónica activa
asintomática, en biopsias de hígado. Su propuesta incluyó el uso de tres parámetros. Con la hematoxilina y la eosina se identificaba la inflamación y
otros cambios. Utilizando la tinción tricrómico de Masson calificaba la cantidad de tejido conjuntivo fibroso. Con estos datos se puede realizar el
seguimiento de la progresión de la enfermedad en los pacientes.
¿Sabías que…?
La mayoría de los colorantes utilizados en la técnica histológica, habían sido primero probados en la industria textil. Un ejemplo es la
hematoxilina, que se obtiene del árbol palo de Campeche, común en México, la cual es extraída del parénquima del tallo e inicialmente es
incolora, sin embargo, se deja madurar (oxidar) al aire libre por varias semanas (más de cuatro) obteniendo su característico e intenso color.
¿Sabías que…?
Otro colorante utilizado en la técnica histológica de origen animal es el carmín, mismo que se obtiene de la cochinilla hembra y tiene amplio uso en
la industria alimentaria, en la preparación de bebidas alcohólicas y no alcohólicas, mermelada, yogur y alimentos que requieren color rojo; también
se le da uso en la industria de cosméticos en la elaboración de labiales, polvos para ojos y mejillas; así como en la industria farmacéutica para la
elaboración de jarabes, grageas y pastas dentífricas.
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