GUÍA DE PROYECTO DE AULA

1. INFORMACIÓN GENERAL

CARRERA INGENIERÍA FORESTAL

ASIGNATURA MICROBIOLOGÍA GENERAL
NIVEL PRIMERO
TÍTULO DEL PROYECTO PRODUCCIÓN DE UN BIOFERTILIZANTE
TEMAS QUE INTEGRAN EL PROYECTO Aislamiento de microorganismos
Crecimiento microbiano
Determinación del número de microorganismos
Técnicas microscópicas: tinción Gram
Conservación de microorganismos
Ciclo del nitrógeno

2. INTRODUCCIÓN

Un biofertilizante es una sustancia que contiene microorganismos vivos que, cuando se aplican a las
semillas, la superficie de las plantas o el suelo, colonizan la rizosfera o el interior de la planta y
promueven el crecimiento al aumentar el suministro o la disponibilidad de nutrientes primarios para
la planta huésped. Los biofertilizantes agregan nutrientes a través de los procesos naturales de fijación
de nitrógeno, solubilizando el fósforo y estimulando el crecimiento de las plantas a través de la síntesis
de sustancias que promueven el crecimiento. Los microorganismos en los biofertilizantes restauran el
ciclo natural de nutrientes del suelo y construyen la materia orgánica del suelo. Mediante el uso de
biofertilizantes, se pueden cultivar plantas sanas, al tiempo que se mejora la sostenibilidad y la salud
del suelo. Este tipo de microorganismos es conocido como "rizobacterias promotoras del crecimiento
de las plantas" (PGPR).

En este proyecto se producirá a escala de laboratorio un biofertilizante a base de microorganismos

fijadores de nitrógeno, aislados a partir de suelos fértiles.

3. OBJETIVOS
▪ Aislar microorganismos fijadores de nitrógeno (género Azotobacter)
▪ Construir un biorreactor artesanal para la producción del biofertilizante
▪ Caracterizar morfológicamente las cepas aisladas
▪ Obtener la curva de crecimiento microbiano y determinar los parámetros de crecimiento

4. MATERIALES

MUESTRAS REACTIVOS INSUMOS DE OTROS

BIOLÓGICAS LABORATORIO
Suelo H2O destilada estéril Frascos con tapa de Mangueras de aire
Manitol 500ml flexible 0,5mm
K2HPO4 cajas Petri (N-Free Bomba de pecera
MgCl2 Agar) Tubos de plástico
NaCl 2 filtros de 0,2um 0,4mm
CaCO3 Pinza para papel
FeCl3
 MnSO4 Recipiente de vidrio
Agar con tapa hermética
Nutrient broth metálica
glicerol
5. PROCEDIMIENTO

El proyecto se llevará a cabo en dos etapas:

ETAPA 1: AISLAMIENTO DEL MICROORGANISMO.

Para el aislamiento del microorganismo se utilizará la técnica de los gránulos de suelo. Esta técnica
consiste en sembrar gránulos de suelo fértil en un medio de cultivo selectivo libre de nitrógeno. El
medio que se utilizará es el medio de cultivo Pochon que utiliza manitol como fuente de Carbono.

Medio de cultivo Pochon (libre de nitrógeno con manitol)

Manitol 10 g/L
K2HPO4 0,5 g/L
MgCl2 0,2 g/L
NaCl 0,2 g/L
CaCO3 3 g/L
FeCl3 50 mg/L
MnSO4 50 mg/L
Agar 15 g/L

Después de 2 o 3 días de incubación se puede observar crecimiento bacteriano alrededor de los

gránulos. Estos microorganismos son aislados mediante siembras en cuadrante hasta llegar a cultivos
puros.

ETAPA 2: CARACTERIZACIÓN DE CEPAS Y CONSERVACIÓN

Los microorganismos aislados se caracterizan morfológicamente mediante observación de las colonias

y células al microscopio. Una vez caracterizadas las cepas se conservan con glicerol a 0°C.
ETAPA III: PRODUCCIÓN DE BIOMASA

Los microorganismos se multiplican en un biorreactor utilizando el medio nutrient broth. Durante la

producción de biomasa se determinan los parámetros cinéticos de crecimiento (velocidad de
crecimiento, tiempo generalcional)

PREGUNTAS GUÍA PARA RESOLUCIÓN DEL PROYECTO

1. Porqué se utiliza un medio libre de Nitrógeno para el aislamiento de bacterias fijadoras de

nitrógeno?
 2. Para qué me sirven las técnicas de siembra en el aislamiento de microorganismos
3. Cuáles son las características morfológicas de observables en las colonias bacterianas
4. ¿Qué tipo de bacterias aisló? ¿Gram+ o Gram -?, ¿cuál es su morfología?
5. De las características observada, ¿qué género de bacteriano cree que podría ser el aislado?
6. ¿Qué tiempo de incubación recomendaría para la producción de biomasa en su biorreactor?
7. ¿cuál fue la concentración microbiana obtenida? ¿Es una concentración adecuada para la
aplicación en campo?
8. ¿Por qué es recomendable reducir la fase de latencia y como se podría reducirla?
9. ¿Cuánto dura la fase exponencial?
10. ¿Cuánto dura la fase de latencia?

INSTRUCTIVO PARA PRESENTACIÓN DEL PROYECTO

DOCUMENTO ESCRITO

1. Marco teórico
a. Ciclo del nitrógeno
b. Plant Growth promoting Rizobacteria: Bacterias fijadoras de nitrógeno
c. Crecimiento microbiano: factores que influyen en el crecimiento
d. Biorreactores tipo Bach
e. Biofertilizantes microbianos
2. Procedimiento
a. Esquema de proceso: Aislamiento, caracterización, conservación y producción de
biomasa (incluir fotografías)
3. Resultados
a. Características morfológicas de la cepa aislada
b. Curva de crecimiento microbiano
c. Parámetros cienéticos

PRESENTACIÓN POWER POINT (10 min)

1. INTRODUCCIÓN
2. OBJETIVOS
3. RESULTADOS/DISCUSIÓN
4. CONCLUSIONES