METODOLOGÍA PARA DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE

Multiresiduos por UPLC- MS

PR-001MS

1. Resumen del método

Esta metodología fue desarrollada para la determinación de Multiresiduos mediante

cromatografía UPLC -MS.

2. Materiales

❖ Columna cromatográfica Browniee SPP Phenyl-Hexyl 2.1x100 mm 2.7 µm.

❖ Filtro para jeringa 0.20 mm
❖ Micropipeta de 200-1000 µL.
❖ Puntas para micropipeta de 200-1000 µL.
❖ Matraces aforados de 100 mL.
❖ Probetas de 100, 500 y 1000 mL.
❖ Sonicador
❖ Microespátulas.
❖ Botellas de cristal de 1L para fase móvil.

3. Condiciones Cromatográficas

Condiciones cromatográficas LC

Columna cromatográfica Browniee SPP Phenyl-Hexyl 2.1x100 mm 2.7 µm .

Fase móvil B Metanol HPLC 4mM de formiato de amonio.
Fase móvil A Agua HPLC 4mM de formiato de amonio
Tiempo de corrida 35 Minutos.
Volumen de inyección 10 µL.
Temperatura Horno 40°C
Temperatura Muestras 10°C

Condiciones cromatográficas Espectometro de masas

Drying Gas 60
HSID Temperature (°C) 320°C
Nebulizer Gas 250
Electro spray V1 Pos 5500 eV
Source 1 Temperature 300 °C.
4. Reactivos:
a) Agua grado HPLC.
b) Metanol grado HPLC.
c) Formiato de Amonio

5. Procedimiento
5.1 Preparación de fase móvil cromatográfica

Metanol 5 mM de Formiato de Amonio

Masar 0.315g de formiato de amonio y añadir 1000mL de Metanol. Posteriormente sonicar
durante 20 minutos, una vez transcurrido este tiempo la fase móvil se deja ambientar para poder
ser utilizada.

Agua 5mM de Formiato de Amonio

Masar 0.315g de formiato de amonio y añadir 1000mL de Agua. Posteriormente sonicar
durante 20 minutos, una vez transcurrido este tiempo la fase móvil se deja ambientar para poder
ser utilizada.

5.2 Estabilización del equipo

Acondicionar la columna cromatográfica con solución de fase móvil ( Metanol 5mM acido
Formico/Agua 5mM acido Formico 80%:20% v/v) con un flujo de 0.3 mL/min. Acondicionar con la
fase móvil por lo menos 30 minutos o hasta que el sistema esté en equilibrio en su línea base y
presión.

5.3 Preparación de muestra.

Tomar 100 µL de la muestra inyectada previamente por HPLC, llevar aforo con 100mL y luego
pasar a vial con un filtro de jeringa 13mM.
5.4 Utilizacion del UPLC acoplado a MS-MS

1. Se abre el programa Simplicity 3Q y la consola waters (Figura 1 y 2)

Figura1. Consola Waters

Figura 2. Simplicity 3Q

2. En la consola de Waters se procede a acondicionar el equipo, en la pestaña control se

realiza prime Solvents. dejar aproximadamente 25 a 30 minutos.

Figura 3. Prime solvent para acondicionar el equipo.

3. Posteriormente dirigirse a la pestaña que de Batch list Creator y crear la lista para
posteriormente
 Figura 4. Batch List Creator.

4. Dirigirse a save batch as.. para poder guardar el listado con el nombre deseado.

Figura 5. Save Batch as...

5. Posteriormente a la opcion de submit to acquistion queue, para cargar la lista y se pueda

empezar la corrida.
6. Le damos a START-

Figura 6. Start para correr el batch.

7. Para evaluar las muestras ir a Quantitation methot editor.

Figura 7. Quantitation methot editor

8. Abrir el archivo en Open data file, buscar la fecha de la inyeccion y posteriormente apretar
OK para cargar toda las inyecciones o buscar una inyeccion individual y seleccionarla.

Figura 8. Open Data Filer

9. Seleccionamos la muestra y el analito para verificar presencia o ausencia .

Figura 9. Pantalla de analisis de los analitos y seleccion de muestra.