BACTERIOLOGÍA Y LABORATORIO CLÍNICO

Fecha: 21/08/2015
FORMATO GUIA DE
LABORATORIO Versión: 01
BLC-GLB-015-UDES

GUIA DE LABORATORIO No. 7

ANALISIS DE ALCOHOLEMIA POR EL MÉTODO DE FELSTEIN

Nombre del Profesor : MARIA MARTHA ORTIZ RANGEL

Nombre del Curso: LABORATORIO DE FARMACOLOGIA Y

TOXICOLOGÍA
Código del curso: 17407
Horas totales (desarrollo de la práctica): 3 horas

1. Introducción
Según el Código Nacional de Tránsito, la embriaguez es un estado de alteración transitoria de
las condiciones físicas y mentales causadas por una intoxicación aguda que no permite una
adecuada realización de actividades de riesgo, entre ellas la conducción.
Un elevado número de personas consume bebidas alcohólicas, son frecuentes las
intoxicaciones agudas y crónicas (alcoholismo). Con frecuencia el alcohol hace parte de la
escena del crimen en los accidentes de tránsito, muertes por proyectil de arma de fuego,
arma blanca y delitos sexuales.

2. Competencias
2.1 Competencia general
Me adiestro en el análisis de Alcoholemia por el método de FELDSTEIN Y KLENDSHOJ

2.2 Competencias específicas

 Defino que es Alcoholemia.
 Manejo adecuadamente los instrumentos de laboratorio y las muestras biológicas
 Ejecuto de manera técnica y sistematizada el procedimiento necesario para la
cuantificación de etanol en sangre por el método de micro difusión de Winick.

 Determino los criterios de aptitud de una muestra de sangre para este tipo de análisis.

3. Listas
3.1 Lista de Equipos
Pipetas de embolo de 1000 micro litros
Bureta de 2-10 mililitros de capacidad ( divisiones de 0.02 mililitros o menor)
Horno incubadora de 0-100°C

3.2 Lista de materiales y reactivos

 Espectrofotómetro UV-VIS
 Celdas de Difusión de Conway
 Puntas para pipetas de embolo de 500 micro litros
 Varilla de vidrio agitadora
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 Puntas para pipetas de embolo de 1000 micro litros

 Etanol
 Ácido sulfúrico 10N: disolver 278 mililitros de ácido sulfúrico en agua destilada hasta 100
mililitros.
 Dicromato de potasio 0.4N en ácido sulfúrico: pesar 19.614 gramos de dicromato de
potasio, previamente secado durante 6 horas, y disolverlo en el Acido sulfúrico 10N
hasta completar 1000 mililitros.

Patrones: soluciones de etanol previamente cuantificadas por cromatografía de gases de

50 mg%, 100 mg%, 150mg%, 200mg%

4. Procedimiento
1. Marcar las celdas Conway
Blanco de reactivos
Nivel 1 de la curva de calibración (cero mg% de etanol)
Nivel 2 de la curva de calibración (50 mg% de etanol)
Nivel 3 de la curva de calibración (100 mg% de etanol)
Nivel 4 de la curva de calibración (150 mg% de etanol)
Nivel 5 de la curva de calibración (200 mg% de etanol)
Muestra Problema
2. Colocar 500 microlitros de dicromato de potasio 0.4N preparado en ácido sulfúrico 10N en
la cámara central de cada celda de Conway
3. Colocar 1000 microlitros de Carbonato de potasio 20% y un mililitro de la muestra en la
cámara externa de la celda (adyacente a la cámara central)
4. Poner unas gotas de agua alrededor de la celda y tapar para garantizar hermeticidad
5. Rotar suavemente la celda para mezclar los fluidos en el compartimento interno
6. Dejar en reposo a 56°C durante 2 horas.
7. A las dos horas, retirar la cubierta de la tapa, tomar el fluido del compartimento central con
una micropipeta en un vial o tubo de vidrio y llevar de forma exacta a 10 mililitros, el
contenido de todas las celdas.
8. Leer en el espectrofotómetro UV-VIS el blanco de reactivos, los niveles de la curva de calibración y la
muestra problema a una longitud de onda de 450 nm.

5. Resultados y discusión
Realizada por el estudiante

6. Conclusiones
Realizada por el estudiante

7. Evaluación/Autoevaluación
1. Describo los fundamentos de la técnica de análisis Espectrofotometría UV-VIS
2. Establezca la diferencia entre Alcoholemia y embriaguez? Haga una comparación
entre los dos términos. Para que sirven?
3. En los análisis de muestra provenientes de occisos: La determinación de etanol en
sangre es equivalente a la determinación de etanol en humor vítreo, o a la
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determinación de etanol en orina? Si, No. porque? Explique.

4. Realice en papel milimetrado la curva de calibración y encuentre gráficamente el
valor de alcoholemia para su muestra problema . Hágalo también haciendo uso de
la herramienta Excel. Grafique (x,y) (concentración de etanol mg% versus
Absorbancia). Compare los resultados de la cuantificación obtenidos gráficamente
(papel milimetrado) versus los obtenidos con la curva de calibración realizada en
Excel. Son iguales? Diferentes? Explique.
5. Se analizará la repetibilidad del ensayo, mediante el análisis de los resultados de los
niveles de la curva y análisis de la muestra problema mínimo por duplicado y se
determinara la desviación estándar de los resultados y el coeficiente de variación
(desviación estándar/promedio). Averiguar cómo se calcula cada atributo
(repetibilidad, desviación estándar, coeficiente de variación)Compare los resultados
numéricos obtenidos para la misma muestra de sangre, cuantificando el etanol por el
método de WINNICK y por el método de FELDSTEIN Y KLENDSHOJ. Son iguales?
Diferentes? Explique.

6. Investigue si el método de FELDSTEIN Y KLENDSHOJ, es específico para etanol?

Si, No, justifique la respuesta.
7. Describa al menos otro método para determinación de alcoholemia, diferente al de
Winnick. Compárelo con el realizado y establezca ventajas y desventajas.
8. Compare los métodos de análisis de alcoholemia: Winnick y FELDSTEIN Y
KLENDSHOJ. Establezca ventajas y desventajas entre los dos.

8. Observaciones
Realizada por el estudiante
9. Bibliografía- Webibliografía
BIANCUCCI, G.F. et tal. Manual de procedimientos analíticos toxicológicos para laboratorios de
baja complejidad. Argentina 2007.

FRANCONE, J.P. Toxicología. Editorial Panamericana. Primera Edición 1983

GIANNUZI L y FERRARI, L.A. Manual de Técnicas Analíticas en el laboratorio de Toxicología y

Química Forense. Editorial Praia. Morón, Buenos Aires 2006.

MOFFAT, A.C. CLARKES isolation and identification of drugs I pharmaceuticals, body fluids
and post-mortem materials. Segunda edición. Londres 1986

NACIONES UNIDAS, Métodos recomendados para el ensayo de cocaína. New York 1986

NACIONES UNIDAS, Métodos recomendados para el ensayo de opio y morfina en bruto. New
York 1987

OSORIO, Raúl et tal. Manual de Toxicología. Universidad de Antioquia. 1986

PHARMACEUTICAL PRESS. Clarke´s Isolation and Identification of Drugs. Segunda Edición

London 1986
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STAHR, H.M. Analitical Methods in Toxicology. John Wiley. Unites States 1991

SUNSHINE I,Methodology for Analitical Toxicology; CRC Press Cleveland 1975

UNITED NATIONS, Recommended methods for the detection and assay of heroin and
cannabinoids in biologicas specimens. New York 1993

VALLEJO, M. del C. Manual de análisis químico toxicológico. UIS, Bucaramanga 1975

www.prof.uniandes.edu.co
www.virtual.unal.edu.cp/cursos/ciencias/2001184/lecciones/cap12/02
Experiencia del docente

Otra: Consultada por el estudiante para preparar la práctica y webibliografia del programa del
curso