UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL

CUSCO
FACULTAD DE INGENIERÍA MINAS, GEOLÓGICAS Y METALÚRGIA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA METALÚRGIA

INTEGRANTES : FRANCISCO CONDORI CCAHUANA 174974

: CHAMPI CHECYA LUIS ALFREDO 211917

TEMA : CURVAS DE CALIBRADO Y ESPECTROSCOPIA ULTRAVIOLETA

VISIBLE
CURSO : ANALISIS QUIMICO E INSTRUMENTAL
DOCENTE : ROLANDO RAMOS OBREGON
 CURVAS DE CALIBRACIÓN

Definición

Curvas de calibración se utilizan para comprender la respuesta instrumental a un analito

y predecir la concentración en una muestra desconocida. Por lo general, un conjunto de
muestras estándar se hacen a diferentes concentraciones con una gama que incluye al
desconocido de interés y se registra la respuesta instrumental en cada concentración.
Para más exactitud y comprender el error, se puede repetir la respuesta en cada
concentración por lo que se obtiene una barra de error. Los datos entonces se caben con
una función por lo que se pueden predecir las concentraciones desconocidas. Por lo
general la respuesta es lineal, sin embargo, una curva se puede hacer con otras funciones
como la función es conocida. La curva de calibración puede utilizarse para calcular el
límite de detección y límite de cuantificación.. Al hacer soluciones para una curva de
calibración, cada solución puede hacerse por separado. Sin embargo, puede tomar un
montón de material de partida y llevar mucho tiempo. Otro método para hacer muchos
diferentes concentraciones de una solución es utilizar diluciones seriadas. Con
diluciones seriadas, se diluye una muestra concentrada abajo de una manera paso a paso
para hacer concentraciones más bajas. La siguiente muestra es de la dilución anterior, y
el factor de dilución a menudo se mantiene constante. La ventaja es que se necesita
solamente una solución inicial. La desventaja es que los errores en decisiones de
solución, pipetear, formación, etc. — Haz propagado como soluciones más. Por lo tanto,
se debe tener cuidado al hacer la solución inicia

Elaboración de una curva de calibración

La elaboración de una curva de calibrado se puede dividir en dos pasos: preparación de

las disoluciones patrón y obtención de la función señal – concentración (construcción de
la curva propiamente dicha). Una vez obtenida la curva de calibración se podrá utilizar
para conocer la concentración de analito en una muestra desconocida. Veamos estos
pasos aplicados a una recta de calibración.

Preparación de patrones
Para elaborar una curva de calibrado se parte de varias disoluciones con una
concentración conocida de analito (la sustancia a medir). Estas disoluciones se conocen
como disoluciones patrón. Se han de elaborar una batería de patrones suficiente para
cubrir un rango que incluya la concentración esperada en las muestras desconocidas.

Las concentraciones utilizadas en los patrones también han de estar dentro del rango
válido para la técnica analítica que se va a utilizar. Es decir, han de estar por encima del
mínimo de concentración de analito cuantificable por la técnica utilizada. Este mínimo
es conocido como límite mínimo cuantificable. También ha de estar por debajo del
límite de linealidad. La relación lineal entre concentración y señal no se suele mantener
a altas concentraciones y el límite de linealidad marca la concentración máxima para la
cual la curva de calibración sería fiable.

Construcción de la curva: relación concentración de analito y señal analítica

La curva de calibrado se construye midiendo la señal analítica en cada uno de los

patrones previamente elaborados. En el eje de ordenadas se asigna el valor de la señal
medida y en el eje de abscisas la concentración del patrón. De esta forma podemos
señalar puntos en la gráfica según las coordenadas (concentración (x), señal (y)).

A estos puntos podemos aplicar la regresión lineal, generalmente mediante el ajuste por
mínimos cuadrados, para obtener la recta que los relaciona y su función.

Uso de la curva de calibración con muestras desconocidas

Teniendo una muestra de concentración desconocida, se puede medir la señal analítica y

estimar la concentración por extrapolación sobre la gráfica obtenida anteriormente. Pero
se puede obtener de forma más exacta a través de la ecuación explícita de la recta que,
aplicada a nuestra curva, sería:

Dónde:
  B es la ordenada en el origen (intersección de la recta en el eje de ordenadas)
 M es la pendiente de la recta
 CA es la concentración del analito, representada en el eje de abscisas
 Y es la señal medida

Tomando dos puntos de la recta, se calcula la pendiente y ya se podría obtener la

concentración de analito midiendo la señal:

Tipos de calibrado que se suelen emplear en el análisis químico

-Calibrado externo

Se lleva a cabo la comparación de señal de analito en la muestra con las obtenidas al

medir una serie de patrones preparados. Los patrones suelen ser acuosos (es decir, se
disuelve el analito en agua) pero también puede ser recomendable usar una matriz
parecida a la de la muestra. Por ejemplo, para la determinación de metales en muestras
sólidas, previamente digeridas con ácidos, se suele usar una disolución acuosa con la
misma proporción de ácidos que la muestra tratada. En este tipo de calibrado se
representa la señal de los patrones frente a su concentración y se obtiene la ecuación de
la recta de mejor ajuste. Una vez hecho esto, para calcular la concentración de analito en
una muestra se sustituye la señal medida para dicha muestra en la ecuación de la recta y
se despeja la correspondiente concentración. Hay que asegurarse de que el valor de
señal de la muestra se encuentre entre el mínimo y el máximo de las señales de los
patrones (se debe interpolar, no extrapolar) y, si no es así, tratar de diluir la muestra o
los patrones, según sea necesario, para que se cumpla este requisito.
Calibrado por adición patrón

Se realiza añadiendo cantidades conocidas y crecientes de analito a distintas porciones

de muestra para construir la curva de calibrado (se debe incluir la muestra sin adición).
Se representa la señal obtenida para cada porción frente a la concentración o cantidad
añadida a dicha porción. La concentración de la muestra se obtiene como el punto de
corte de la prolongación de la recta en el eje de abscisas. Matemáticamente se iguala la
señal a cero y se despeja la concentración (cambiando de signo).

Calibrado con patrón interno

En algunas ocasiones, debido a la forma de introducir una muestra en el sistema de
medida o a un tratamiento previo de la misma, ésta puede sufrir pérdidas de analito. El
problema surge cuando al repetir el mismo proceso una y otra vez las pérdidas de
analito son diferentes, con lo que estaremos ante un problema en la repetitividad del
método.

ESPECTROSCOPÍA ULTRAVIOLETA VISIBLE

La espectroscopia UV-Vis está basada en el proceso de absorción de la radiación
ultravioleta-visible (radiación con longitud de onda comprendida entre los 160 y 780
nm) por una molécula. La absorción de esta radiación causa la promoción de un electrón
a un estado excitado. Los electrones que se excitan al absorber radiación de esta
frecuencia son los electrones de enlace de las moléculas, por lo que los picos de
absorción se pueden correlacionar con los distintos tipos de enlace presentes en el
compuesto. Debido a ello, la espectroscopía UV-Vis se utiliza para la identificación de
los grupos funcionales presentes en una molécula. Las bandas que aparecen en un
espectro UV-Vis son anchas debido a la superposición de transiciones vibracionales y
electrónicas.
La espectroscopía NIR está basada en la absorción de la radiación a longitudes de onda
entre 800 y 2700nm. En esta zona del espectro electromagnético el proceso de absorción
es debido a presencia de sobretonos y bandas de combinación originados por
transiciones vibracionales intensas que se producen a longitudes de onda mayores.
Los espectros NIR están dominados por la presencia de bandas anchas de baja
intensidad lo que restringe su uso a muestras sólidas y líquidas. Se usa principalmente
en análisis medioambiental, farmacéutico y de alimentos, así como en la industria de
polímeros y plásticos.
Aplicaciones
 Determinación de grupos funcionales en moléculas orgánicas
 Análisis de muestras bioquímicas
 Determinación de metales en compuestos de coordinación
 Análisis de semiconductores
 Medidas de color
 Determinación cuantitativa
 Seguimiento de la cinética de procesos químicos y bioquímicos

¿Qué es la espectroscopia ultravioleta-visible?

La espectroscopia ultravioleta-visible es un tipo de espectroscopia de absorción en la
que se ilumina una muestra con rayos electromagnéticos de varias longitudes de onda en
el rango ultravioleta (UV) y visible (VIS). Según la sustancia, la muestra absorbe
parcialmente los rayos de luz ultravioleta o visible. El resto de la luz, es decir, la luz
transmitida, se registra como una función de la longitud de onda mediante un detector
adecuado. El detector produce entonces el espectro UV-VIS único de la muestra
(también conocido como el “espectro de absorción”).
¿Qué son la absorbancia y la transmitancia?
Cuando la luz incide en un objeto, este puede absorberla, normalmente porque la
longitud de onda de la luz absorbida corresponde a una excitación electrónica en el
objeto. El resto de la luz se transmite, es decir, atraviesa el objeto.

En un espectrofotómetro, la transmitancia se mide dividiendo el espectro de intensidad

de la luz transmitida a través de una muestra (I0) por el espectro de intensidad de la luz
transmitida a través del blanco (I).
La absorbancia (A), también conocida como “densidad óptica” (DO), es la cantidad de
luz absorbida por el objeto y puede expresarse de la siguiente manera:

La absorbancia (A):

Transmitancia (T):

¿Qué es la ley de Beer-Lambert?

La ley de Beer-Lambert establece que la cantidad de
energía que absorbe una solución es proporcional al paso
de luz y a la concentración. En pocas palabras, una
solución más concentrada absorbe más luz que una
diluida.
La fórmula matemática de la ley de Beer-Lambert es:
                               A = ϵ.d.c
Donde ϵ = absortividad molar, d = paso de luz y c = concentración.
La absortividad molar es una constante física única de la muestra que está relacionada
con la capacidad de la muestra de absorber luz a una determinada longitud de onda. ϵ
presenta la unidad como L·mol-1·cm-1.

¿Cuál es la diferencia entre los espectrofotómetros de barrido y de red de diodos?

Un espectrofotómetro UV-VIS es un instrumento diseñado para medir la absorbancia en
la región UV-VIS mediante la ley de Beer-Lambert. Mide la intensidad de la luz que
atraviesa una solución de muestra en una cubeta y la compara con la intensidad de la luz
antes de atravesar la muestra.
Los componentes principales de un espectrofotómetro UV-VIS son una fuente de luz,
un porta muestras, un dispositivo de dispersión para separar las distintas longitudes de
onda de la luz y un detector adecuado.
¿Cuál es la diferencia entre los espectrofotómetros de barrido y de red de diodos?
Los espectrofotómetros de barrido convencionales se basan en el principio de realizar
mediciones consecutivas de la transmitancia en cada longitud de onda definida. La luz
se divide en diferentes longitudes de onda mediante una red de difracción. Se coloca
una cubeta de muestra entre la red de difracción y el detector.
En un espectrofotómetro de red de diodos, la muestra se ilumina de manera conjunta, es
decir, con todos los componentes espectrales de la luz a la vez, por lo que absorbe
simultáneamente la luz de diferentes longitudes de onda. A continuación, una red de
reflexión difracta la luz transmitida. Esta instrumentación ayuda a adquirir el espectro
UV-VIS más rápidamente de lo que se puede obtener con un espectrofotómetro de
barrido tradicional.

En comparación con un espectrofotómetro de barrido, un espectrofotómetro de red de

diodos no tiene piezas móviles. Por lo general, ofrece unas mejores prestaciones ópticas
y unos requisitos de mantenimiento proporcionalmente bajos.

ESPECTRO DE TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA

MEDIDA EXPERIMENTAL DE TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA

LIMITACIONES DE APLICACIÓN DE LA LEY DE BEER

La atenuación de una radiación es cuantitativamente proporcional a ala

concentración de la especie absorbente

La proporcionalidad directa entre absorbancia y concentración cuando b es cte

presenta desviaciones:

A) Limitaciones reales de la ley

B) Limitaciones Químicas

C) Limitaciones Instrumentales

A) Limitaciones reales de la ley

- Disoluciones de concentración elevada (c > 0.01 M) dan malos

resultados.
- La absortividad a y la absortividad molar  dependen del índice de
refracción de la muestra.
B) Limitaciones Químicas
Se produce cuando el analito se disocia, asocia o reacciona con el disolvente

para dar productos que presentan propiedades de absorción diferentes de las

del analito.

C) Limitaciones Instrumentales

El cumplimiento estricto de la Ley de Beer sólo se observa para radiaciones

monocromáticas (radiación formada por una sola longitud de onda) y éstas en

la práctica no se consiguen, ya que con los dispositivos disponibles (filtros,

monocromadores) se obtienen una banda de longitudes de onda más o menos

simétrica entorno a la deseada.

Otra desviación: Presencia de radiación parásita o dispersa.

INSTRUMENTACIÓN PARA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIÓN UV-VIS

FOTÓMETROS
* Instrumento sencillo utilizado para medir la absorbancia y que emplea filtros

de absorción o interferencia para seleccionar la longitud de onda.

* Suelen usarse prácticamente en la región del Visible.

* Ventajas: Son sencillos, bastante económicos, robustos y facilidad en cuanto

a mantenimiento. Pueden transportarse, lo que lo convierte en un aparato útil

para realizar análisis espectroscópicos de campo.

* Inconvenientes: No puede utilizarse para obtener espectros de absorción.

ESPECTROFOTÓMETROS

* Instrumento empleado para medir la absorbancia que utiliza un selector

monocromático para seleccionar la longitud de onda.

* Puede usarse en la región UV, Vis e IR.

* Pueden ser de un solo haz o de doble haz

Fundamentos de las mediciones del color

Los colores hacen que nuestro mundo sea más interesante. Cuando vemos un objeto, la
luz que este refleja entra en nuestros ojos y la recogen varios tipos de fotorreceptores de
la retina. Según la sensibilidad de los fotorreceptores, cada persona puede percibir el
mismo color de forma diferente.
Para aceptar la exactitud de un color específico de manera universal, hay que asignar
valores numéricos. En resumen, los equipos de medición, como los espectrofotómetros
y los colorímetros, arrojan los resultados del color en forma de valores para asegurar la
exactitud y repetibilidad de la determinación del color.
Los espectrofotómetros cuantifican los datos de color recogiendo y filtrando las
longitudes de onda transmitidas a través de una muestra. Se aplica una ecuación
matemática a los datos espectrales para asignar el color a una escala de colores.
La escala de colores CIE (Commission internationale de l'éclairage) se define mediante
tres parámetros: tono, croma y luminosidad.
 El tono es el color dominante de un objeto. La combinación de los colores
primarios y secundarios conforma el tono.
 El croma, también conocido como “saturación”, describe lo intenso o apagado
que es un color.
  La luminosidad es la intensidad luminosa del color (si es oscuro o claro).
 Análisis de micro volúmenes mediante un espectrofotómetro UV-VIS
¿Cómo realizar un análisis de micro volúmenes en la espectroscopia ultravioleta-
visible?
Un espectrofotómetro de micro volúmenes mide volúmenes de muestra de tan solo
1 µl. La concentración de ácidos nucleicos en una muestra suele ser del orden de nano o
microgramos por mililitro.
La dilución de estos micro volúmenes y la obtención de resultados exactos suponen
todo un reto. Por tanto, el microanálisis sin dilución resulta esencial para el análisis
posterior de los ácidos nucleicos.
Durante el análisis de los ácidos nucleicos, la muestra de micro volumen se pipetea en el
compartimento fino de la superficie del pedestal. La fibra óptica guía el haz de luz
procedente de la fuente de luz hasta la plataforma de micro volúmenes. Como el paso de
luz se reduce al orden de un milímetro, se puede analizar con precisión una mayor
concentración de analito sin necesidad de realizar varias diluciones.
Un sistema de micro volúmenes usa la tecnología de fibra óptica junto con las
propiedades inherentes de la muestra (como la tensión superficial) para retener la
muestra en la plataforma del pedestal y determinar la absorbancia de las muestras en
tiempo real a bajos volúmenes.
Con estas ventajas, el análisis de micro volúmenes se convierte en una opción idónea
para el análisis biomolecular.
¿Cuáles son las aplicaciones de la espectroscopia ultravioleta-visible en las distintas
industrias?
La espectroscopia ultravioleta-visible se usa para una gran variedad de aplicaciones en
muchos sectores, como por ejemplo:

Alimentación
Determinación del color (por ejemplo, vino), análisis del contenido (fosfato o SO2),
adulteración, amargor, color, ácidos alfa, polifenoles totales, amino nitrógeno libre,
antocinógeno, yodo, contenido de hierro y valores de ácido tiobarbitúrico (por ejemplo,
cerveza).
Productos farmacéuticos
La espectroscopia ultravioleta-visible se usa ampliamente en la industria farmacéutica
para el análisis cualitativo (prueba de identificación), el análisis de los ingredientes
farmacéuticos activos (API), los estudios de disolución, el ensayo de las indicaciones
del etiquetado, la creación de perfiles de impurezas o la pureza por absorción, el análisis
de la composición porcentual, el análisis del color y la estabilidad de los fármacos.

Cosmética
Evaluación de la foto estabilidad de los agentes para las formulaciones, caracterización
de partículas del agente de bloqueo UV, evaluación del índice cromático, detección de
adulteraciones (industria de los perfumes), estudio de las propiedades ópticas,
cuantificación de colorantes, antioxidantes, etc.

Productos petroquímicos
Caracterización de petróleo crudo, cálculo de fracciones de asfaltenos, formulación de
índices de contenido aromático, calidad de la gravedad del petróleo crudo, contenido de
azufre, cálculo del factor de solubilidad de Hildebrand (ampliado al betún, los petróleos
pesados y esquistosos, y los petróleos procedentes del craqueo catalítico fluidizado, la
coquización o la licuefacción de carbón).

Productos químicos
Determinación de propiedades químicas, evaluación de la calidad final del producto
acabado, estudio de la composición de los polímeros, cualificación de las aguas
residuales, determinación de la pureza y la eficacia del colorante, degradación
fotocatalítica de polímeros/colorantes y residuos de pesticidas en el suelo o el agua.

Biotecnología
Concentración y pureza de ácido nucleico, proteínas (A280, BCA, Biuret, Bradford
Lowry u OD 600), mediciones de cultivos de células microbianos, desnaturalización de
proteínas, estudios cinéticos (actividad enzimática) y muestras biológicas, como sangre,
plasma, suero, etc.

CONCLUSION
La espectroscopia ultravioleta-visible (UV-VIS) es una potente técnica para
diversas aplicaciones de distintas industrias y segmentos de mercado. Cuando una
sustancia absorbe el máximo de luz a una determinada longitud de onda, se da una
relación única entre la sustancia y su espectro UV-VIS.
En espectroscopía UV-Vis, la luz pasa a través de una muestra en una determinada
longitud de onda en el ultravioleta o del espectro visible. Si la muestra absorbe parte de
la luz, no toda la luz será pasar a través de, o transmitirse.
Un espectrofotómetro UV-VIS es un instrumento diseñado para medir la absorbancia en
la región UV-VIS mediante la ley de Beer-Lambert. Mide la intensidad de la luz que
atraviesa una solución de muestra en una cubeta y la compara con la intensidad de la luz
antes de atravesar la muestra.
La Espectroscopía UV-Vis se fundamenta en la transmisión y/o absorción de la
radiación electromagnética cuando ésta interacciona con la materia, en el entorno de
longitudes de onda entre 190 y 900 nm, que se amplía en los equipos UV-VIS-NIR
hasta 3300 nm.
BIBLIOGRAGIA
https://books.google.es/books?
hl=es&lr=&id=htRP2dHJkXgC&oi=fnd&pg=PR5&dq=an
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