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PRCTICA N01

ESPECTROFOTOMETRA
INTRODUCIN
La espectrofotometra puede definirse como la medida de la atenuacin que la
muestra efecta sobre una radicacin incidente sobre el mismo con un espectro
definido. En general, las medidas se realizan dentro del espectro comprendido
entre 220 y 800nm, y este espectro, a su vez, puede dividirse en dos amplias
zonas: la zona de la radiacin visible, situada por encima de 380nm, y la zona de
la radiacin ultravioleta situada por debajo de estos 380nm. La regin del infrarrojo
se sita por encima de los 800nm.
La espectrofotometra tambin se puede definir como la medicin de la cantidad
de energa radiante que absorbe o transmite un sistema qumico en funcin de la
longitud de onda; es el mtodo de anlisis ptico ms usado en las
investigaciones qumicas y bioqumicas. El espectrofotmetro es un instrumento
que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que
contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad
conocida de la misma sustancia.
La teora ondulatoria de la luz propone la idea de que un haz de luz es un flujo de
cuantos de energa llamados fotones; la luz de una cierta longitud de onda est
asociada con los fotones, cada uno de los cuales posee una cantidad definida de
energa.
En esta prctica se tiene como objetivo el conocer cmo usar el espectrofotmetro
y como utilizar los datos que este arroja. El anlisis cuantitativo por espectroscopia
de absorcin mide la absorbancia de una sustancia a varias longitudes de onda
crecientes. Despus al graficar el dato de absorbancia contra el de concentracin
se obtuvo una curva que recibe el nombre de grfica de la ley de Beer y Lambert.

OBJETIVOS

Obtener el coeficiente de absorbancia de la sustancia problema


Determinar la longitud de onda adecuada y los niveles de concentracin
para el anlisis cuantitativo por espectrometra.

MATERIALES
-

Tubos de ensayos
Solucin de (K2CrO4), (Cu2SO4) y (KMNO4)
Agua destilada
Espectrofotmetro

MARCO TERICO
La espectrofotometra UV-visible es una tcnica analtica que permite determinar
la concentracin de un compuesto en solucin. Se basa en que las molculas que
absorben las radiaciones electromagnticas y a su vez que la cantidad de luz
absorbida dependen de forma lineal de la concentracin. Adems es usada para
identificar compuestos por su espectro de absorcin y conocer la concentracin de
un material o sustancia, esto ltimo permite, seguir el curso de reacciones
qumicas y enzimticas as como determinar enzimas y protenas incluso cidos
nucleicos.
Para hacer este

tipo de medidas se emplea un espectrofotmetro, como ya

sabemos es un equipo de laboratorio que mide la cantidad de luz que pasa por
medio de una longitud de onda especifica. La cantidad de luz absorbida por un

medio es proporcional a la concentracin del soluto presente, es entonces as que


la concentracin de un soluto colorido en solucin puede ser determinada en el
laboratorio mediante la medicin de su absorcin de luz a una longitud de onda
especfica.
Las muestras en estos equipos se utilizan en estado lquido y se colocan en el
compartimiento de las muestras de celdas transparentes de diferentes tamaos y
materiales.
En espectroscopia el trmino luz no slo se aplica a la forma visible de radiacin
electromagntica, sino tambin a las formas UV e IR, que son invisibles. En
espectrofotometra de absorbancia se utilizan las regiones del ultravioleta (UV
cercano, de 195-400nm) y el visible (400-780nm).

La regin UV se define como el rango de longitudes de onda de 195 a 400nm. Es


una regin de energa muy alta.
En la regin visible apreciamos el color visible de una solucin y que
corresponde a las longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe. El
color que absorbe es el complementario del color que transmite.
Por tanto, para realizar mediciones de absorcin es necesario utilizar la longitud
de onda en la que absorbe luz la solucin coloreada.
La fuente de radiacin visible suele ser una lmpara de tungsteno y no
proporciona suficiente energa por debajo de 320nm.

La transmitancia (T) de una sustancia en solucin es la relacin entre la cantidad


de luz transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado la muestra y l a
absorbancia (A) es un concepto ms relacionado con la muestra puesto que nos
indica la cantidad de luz absorbida por la misma.

Ley de Lambert-Beer

Esta ley expresa la relacin entre absorbancia de luz monocromtica (de longitud
de onda fija) y concentracin de un cromforo en solucin:
A = log I/Io = cl
La absorbancia de una solucin es directamente proporcional a su concentracin a
mayor nmero de molculas mayor interaccin de la luz con ellas-; tambin
depende de la distancia que recorre la luz por la solucin a igual concentracin,
cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra ms molculas se encontrar;
y por ltimo, depende de , una constante de proporcionalidad -denominada
coeficiente de extincin- que es especfica de cada cromforo

PROCEDIMIENTO

Agregar a cada tubo de


ensayo la cantidad de
reactivo indicado.

Tenemos los tubos


numerados y solos con el
reactivo a utilizar.

Agregamos agua destilada


para igualar la cantidad en
cada solucin

Llevamos cada grupo de


soluciones al
espectrofotmetro para
determinar su absorbancia

Anotamos los datos


obtenidos para
posteriormente
realizar los grficos
correspondientes

RESULTADOS

Tubos
I
II
KMNO4
0
1
(0.015%)
Agua
4
3
Destilada
Mezclar - Leer a 475 nm
Concentrac
0
150
in
Absorbanci
0
0.189
a

III

IV

300

450

600

0.385

0.577

0.746

100

200

300

0.094

0.176

0.272 0.351

0.066

0.15

0.228 0.317

C= fc * Do

CuSO4
(10%)

KCrO2
(0.1%)

Concentrac
0
in
Absorbanci
0
a

Concentrac
0
in
Absorbanci 0

400

GRFICOS

KMNO4 (0.015%)
0.8

f(x) = 0x + 0
R = 1
0.7

0.6

0.5

Absorbancia
Linear (Absorbancia)

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0

100

200

300

400

500

600

700

CuSO4 (10%)
0.4

0.35

f(x) = 0x + 0
R = 1

0.3

0.25

Absorbancia
Linear (Absorbancia)

0.2

0.15

0.1

0.05

0
0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

KCrO2 (0.1%)
0.35

f(x) = 0.08x - 0.01


R = 1

0.3

0.25

0.2

Absorbancia
Linear (Absorbancia)

0.15

0.1

0.05

0
0

0.5

1.5

2.5

3.5

4.5

CUESTIONARIO

1. Cul crees que es el mtodo ms exacto para obtener la concentracin de


una muestra problema, el grfico o el analtico?
Por qu?
El analtico, ya que es un instrumento especializado para el

anlisis

qumico que sirve para medir, en funcin de la longitud de onda, la relacin


entre valores de una misma magnitud fotomtrica relativos a radiaciones y
la concentracin o reacciones qumicas que se miden en una muestra.
2. Qu factores alteran la ley de LAMBERT y BEER?
La ley de Beer-Lambert slo se cumple para concentraciones bajas, a partir
de una concentracin 0,01M empieza a haber desviaciones de la linearidad.
Adems, si la radiacin utilizada no es monocromtica, tambin puede
haber errores.
La existencia de otros equilibios qumicos en disolucin, como cido-base,
de precipitacin, de formacin de complejos, aunque no modifican la ley en
s misma, s que pueden modificar la concentracin de la sustancia que
estamos midiendo, y puede producir un error en el resultado.
3. Existe otro mtodo de ajuste de curvas?
-

Rectas de Regresin en mnimos cuadrados


El ajuste potencial y=AxM
El ajuste exponencial y= CeAx
Combinaciones lineales en mnimos cuadrados

4. Cul es el objetivo de utilizar el mtodo de los mnimos cuadrados?


Mnimos cuadrados es una tcnica de anlisis numrico enmarcada dentro
de la optimizacin matemtica, en la que, dados un conjunto de pares
ordenados: variable independiente, variable dependiente, y una familia de
funciones, se intenta encontrar la funcin continua, dentro de dicha familia,

que mejor se aproxime a los datos (un "mejor ajuste"), de acuerdo con el
criterio de mnimo error cuadrtico.
5. Mencione aplicaciones de la prctica en el campo de su especialidad
La

aplicacin

de

diversos

mtodos

matemticos

al

clculo

de

concentraciones y otras propiedades a partir de datos instrumentales se


conoce como quimiometra y es un rea de intensa actividad, sus
aplicaciones en la agroindustria son para procesos qumicos y/o fsicos, y
en estudios ambientales en general como por ejemplo la prediccin de
propiedades de carbones minerales a partir de datos del infrarrojo medio,
con el objetivo de desarrollar mtodos de anlisis rpidos y no destructivos
para estos materiales.
Otro ejemplo sera cuando un ingeniero agroindustrial de una embotelladora
est analizando la entrega de producto y el servicio requerido por un
operador

de

ruta

para

surtir

dar

mantenimiento

mquinas

dispensadoras. El ingeniero visita x locales al azar con mquinas


dispensadoras, observando el tiempo de entrega en minutos y el volumen
de producto surtido en cada uno. Las observaciones se grafican en un
diagrama de dispersin (no todos los puntos estn contenidos en una
recta), donde claramente se observa que hay una relacin entre el tiempo
de entrega y el volumen surtido; los puntos casi se encuentran sobre una
lnea recta, con un pequeo error de ajuste, para lo cual aplicaremos el
mtodo de los mnimos cuadrados.
CONCLUSIONES Y DISCUSIONES
1. Debido a que no fuimos muy exactos, utilizamos el mtodo de mnimos
cuadrados para poder ajustar la recta de la absorbancia.
2. Se identific que el equipo presenta una adecuada precisin y exactitud
determinando que las mediciones realizadas en este pueden ser confiables.
3. El conocer el adecuado uso del espectrofotmetro permiti obtener en el
laboratorio resultados con alta calidad analtica en las mediciones que son
emitidas por ste.

4. Se determin la longitud de onda ptima a las tres soluciones coloreadas


teniendo como resultados las siguientes: solucin amarilla 625 nm, para
solucin de color celeste 600, y para la solucin de color fucsia una longitud
de onda de 475nm, concluyendo que los datos obtenidos experimentalmente,
se encuentran dentro de los datos tericos.

BIBLIOGRAFA
1. Walton y Reyes. 1978. Anlisis qumico e instrumental moderno. Editorial
Reverte S.A. Espaa.
2. Borfost R. y Scholz, M.1964. Spektroskopische Methoden in der organischen.
Chemie. Berlin.
3. Snchez, D.1995. instrumentacin en Bioqumica. Consejo nacional de
Ciencia y Tecnologia (CONCYTEC). Lima.

LINKOGRAFA
1. http://www.academia.edu/4264776/FOTOCOLORIMETRIA_carlos_lavarez
2. http://www.slideshare.net/kelycaterine/espectrofotometro-28574184

Ao de la Promocin de la Industria Responsable y del Compromiso


Climtico

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA


FACULTAD DE INGENIERA
DEPARTAMENTO DE AGROINDUSTRIA

ESCUELA ACADMICA PROFESIONAL: INGENIERA AGROINDUSTRIAL


CURSO: BIOQUMICA
III CICLO

DOCENTE:
BLG. ETERIO ALVA MUOZ
ALUNMA:
CABALLERO BURGOS MLANHY

GRUPO: B

NUEVO CHIMBOTE- junio de 2014