ESPECTROSCOPIA UV/VIS

CUANTIFICACIÓN DE CAFEINA EN BEBEIDAS COMERCIALES

Derly Natalia Álvarez Álvarez.

derly.alvarez00@usc.edu.co

Universidad Santiago de Cali, Facultad de Ciencias Básicas, Programa de Química,

Laboratorio de Análisis instrumental.
Santiago de Cali, Colombia
16 de febrero  de 2023
Objetivo
Emplear el Espectrofotómetro UV/VIS para cuantificar cafeína en bebidas comercial como café, té, bebidas
colas.

MARCO TEÓRICO

En muchos análisis químicos se mide la respuesta del procedimiento analítico a cantidades conocidas de
analito (llamadas patrones o estándares) para interpretar luego la respuesta a cantidades desconocidas. Con
este fin, de ordinario se prepara una línea de calibrado, que es un gráfico en donde se presenta la respuesta de
un método analítico en función de cantidades conocidas del analito.

La mayoría de las veces se trabaja en una región en la que la línea de calibrado es recta. Dado un conjunto de
puntos experimentales, que tienen un cierto error y no están exactamente alineados, ¿cuál es el “mejor” modo
de trazar una recta de ajuste? Como se ve en la gráfica anterior, la mejor recta será la que deje unos puntos por
arriba y otros por debajo de ella.

El método de mínimos cuadrados es la técnica más ampliamente utilizada para ajustar una recta a un conjunto
de puntos. Este procedimiento supone que los errores de los valores de y son mucho mayores que los de los
valores de x. Esta condición normalmente es cierta en una línea de calibración en la cual la respuesta
experimental medida (valores de y) es menos cierta que la cantidad del analito (valores de x). Un segundo
supuesto es que las incertidumbres (las desviaciones estándar) de todos los valores de y son similares.

La ecuación de la recta es y = mx + b donde m es la pendiente y b es la ordenada en el origen. Consulte en un

libro de estadística y haga un ejemplo de cómo se trabaja la el ajuste de la línea de calibración por el método
de mínimos cuadrados; cómo se encuentra por este método el valor de la pendiente, el intercepto (ordenada en
el origen) y el valor de r (correlación), que indica este valor?

Una curva de calibrado representa la respuesta de un método analítico a concentraciones conocidas de analito.
Un espectrofotómetro mide la absorbancia de la luz, que es proporcional a la cantidad de analito analizado.
Las soluciones que contienen concentraciones conocidas de analito se llaman soluciones patrón o estándar.
Las soluciones que contienen todos los reactivos y solventes usados en el análisis, pero sin analito, se llaman
soluciones blanco o simplemente blancos. Los blancos miden la respuesta del procedimiento analítico a las
impurezas o especies interferentes que existan en los reactivos.

Para construir una línea de calibración se adopta el siguiente procedimiento:

1. Se preparan muestras conocidas de analito que cubran un intervalo adecuado de concentraciones, y se mide
la respuesta del procedimiento analítico a estos patrones.

2. Se resta la absorbancia media de los blancos de cada medida de la absorbancia para obtener la absorbancia
corregida. El blanco mide la respuesta del procedimiento cuando no hay analito presente.

3. Se traza un gráfico con las absorbancias corregidas frente a la cantidad de analito analizado. Se halla la
recta que “mejor” se ajusta a alos datos que se encuentran dentro del rango lineal. Se halla la pendiente y
ordenada en el origen mediante el método de mínimos cuadrados.

4. Se analiza después una solución de concentración desconocida, se mide la absorbancia correspondiente al

blanco. Se resta la absorbancia del nuevo blanco de la absorbancia de la muestra problema para poder obtener
la absorbancia corregida.

Se prefieren procedimientos de calibrado de respuesta lineal, es decir, de señal analítica corregida

proporcional a la cantidad de analito. No es fiable extrapolar cualquier línea de calibración más allá del
intervalo de los patrones medidos. Hay que medir patrones en todo el intervalo de concentración de interés
analítico.