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Informe de Espectrofotometría
2do Cuatrimestre 2017
Autores:
Comisión 01 - Grupo 23: Bastiani Santiago, Camacho Vidal Cristina, Otero Daniela,
Rivanera Camila, Seva Nicolás, Simonotti Ornella Fabiola.
Docentes:
Fischerman Laura, Kouyoumdzian Nicolás, Monczor Federico, Nievez Luciano, Scochera
Florencia, Yaneff Agustín.
Fecha de entrega:
31/10/2017
Formatted: Left
❏ OBJETIVOS
❏ FUNDAMENTOS
● Figura 1: Luz que incide sobre un tubo conteniendo una solución coloreada
Para hacer referencia a la intensidad de luz absorbida por una sustancia se definen los
parámetros de transmitancia y absorbancia. La transmitancia (T) se define como la
fracción de intensidad de luz que se transmite (It) a través de la solución respecto de la
intensidad de luz incidente (Io). El espectrofotómetro determina transmitancia a partir de la
medida de intensidad transmitida comparándola con la intensidad incidente. Por otra parte,
la absorbancia (Abs) se define a partir de la transmitancia, mediante un cálculo matemático.
El parámetro absorbancia es creado a partir de una relación matemática que surge de la
Ley de Lambert-Beer:
Abs = -log T = a.l.c,
en donde l representa al paso óptico, c a la concentración y a a la absortividad, una
constante propia de cada sustancia que depende de la longitud de onda, la temperatura, y
el solvente con el que se trabaja. Se puede definir como la absorbancia que presenta una
solución de concentración unitaria de sustancia, observada bajo un espesor unitario.
Las soluciones que cumplen con la Ley de Lamber-Beer presentan una relación lineal entre
su concentración y su absorbancia siempre que se trabaje con luz monocromática y bajas
concentraciones. No obstante, son comunes las desviaciones debidas a factores de orden
físico, químico o instrumental.
Por otro lado, además de las medidas que hay tomar en cuanto a la solución que se utiliza
para trabajar, se debe comprobar que el espectrofotómetro presente un buen
funcionamiento ya que de ello depende la calidad de los resultados que se obtienen. Por
ello se realizan los controles espectrofotométricos, que permiten controlar y analizar
determinados parámetros y verificar si se encuentran dentro de los rangos de aceptabilidad
establecidos. Dichos controles son:
● Control de Luz espuria accidental: la luz espuria accidental o errática es toda luz que
llega al detector sin haber atravesado la muestra cuya absorbancia se quiere medir,
pudiendo ser de la misma o de diferente longitud de onda que la seleccionada. Commented [1]: Luz parásita.
Puede ocurrir por reflexiones internas dentro de la cubeta, luz que pase por arriba de
la muestra cuando el volumen cargado es insuficiente, entrada de luz externa, etc.
● Tubo de blanco de reactivo: este tubo se denomina así pues contiene todos los
reactivos necesarios para que se realice la reacción, pero no contiene a la muestra o
al testigo. Por lo tanto, la medida de absorbancia de éste será descontada a la del
tubo de muestra y a la del tubo de testigo para obtener por diferencia el valor de la
absorbancia debida solamente a la muestra o al testigo, según corresponda.
❏ MATERIALES Y MÉTODOS
➔ Tabla Nº1: Valores de absorbancia de una solución de rojo fenol alcalino para
volúmenes crecientes de una solución coloreada a …nm.
Vol ±? Absorbancia
(mL)
0,2 0,028
0,4 0,028
0,6 0,030
0,8 0,029
1,0 0,051
1,2 0,077
1,4 0,123
1,6 0,181
1,8 0,205
2,0 0,203
2,2 0,203
2,4 0,204
2,6 0,205
2,8 0,205
3,0 0,205
❖ Gráfico N°1: Absorbancia en función del volumen de solución en la cubeta. Commented [2]: Título idem tabla.
● Control de cubetas:
Cubeta T(%)
Cubeta de 100
referencia
A 101,4
B 97
C 103,2
D 102,2
➢ Primer par de cubetas con porcentajes de transmitancia similares.
➢ Segundo par de cubetas con porcentajes de transmitancia similares.
A con D y C con D son más parecidas entre sí que la “cubeta de referencia” con A.
● Control de centro de banda:
➔ Tabla Nº3: Valores de longitud de onda y absorbancia del barrido espectral de una
solución de rojo fenol.
Longitud Absorbancia
de onda
(nm)
528 0,740
533 0,798
538 0,850
543 0,901
548 0,934
553 0,938
558 0,905
563 0,835
568 0,714
573 0,577
578 0,408
583 0,275
588 0,183
Concentración Absorbancia
(%V/V)
0 0
12,5 0,149
25 0,290
50 0,553
75 0,764
100 0,932
Longitud de Absorbancia
onda (nm)
510 0,524
515 0,531
520 0,557
525 0,561
530 0,580
535 0,558
540 0,583
545 0,581
550 0,594
555 0,593
560 0,583
565 0,544
570 0,535
❖ Gráfico N°6: Barrido espectral entre las longitudes de onda 510 nm a 570 nm, cada
5 nm.
➢ Longitud de onda óptima de trabajo: 550 nm.
Tubo 16 2,1
2 1,90 0,299
3 2,86 0,446
4 3,81 0,530
Tal vez sería más fácil de entender toda esa información si pudieran centralizarla en
una sola tabla.
❖ Gráfico N°7: Absorbancia en función de concentración de CH de los testigos
procesados.
Siendo la ecuación que define a la recta: Abs= 0,1394(mL/mg)x Cc(mg/mL) + 0,0209 Commented [3]: Pueden editar la ecuación misma
que aparece en el gráfico. Omitieron el punto de
concentración= 0
Concentración de la MUESTRA 1: (2,57 + 0,17) mg/mL
Concentración de la MUESTRA 2: (2,35 + 0,07) mg/mL Commented [4]: Ojo, esta es la concentración en el
tubo de reacción. La que interesa es la original. Para
eso, dado que en todos los tubos usaron en mismo
❏ DISCUSIÓN factor de dilución pueden graficar directamente en
función de la concentración de los testigos originales.
❏ CONCLUSIÓN
♦ Anexo de cálculos:
Concentraciones de testigos:
TESTIGO 1:
20 mg CH --- 1 mL sc
2 mg CH =x --- 0,1 mL sc
2 mg CH --- 2,1 mL sc
0,952 mg CH =x --- 1 mL sc
TESTIGO 2:
40 mg CH --- 1 mL sc
4 mg CH =x --- 0,1 mL sc
4 mg CH --- 2,1 mL sc
1,90 mg CH =x --- 1 mL sc
TESTIGO 3:
60 mg CH --- 1 mL sc
6 mg CH =x --- 0,1 mL sc
6 mg CH --- 2,1 mL sc
2,86 mg CH =x --- 1 mL sc
80 mg CH --- 1 mL sc
8 mg CH =x --- 0,1 mL sc
8 mg CH --- 2,1 mL sc
3,81 mg CH =x --- 1 mL sc
Muestra 1:
Muestra 2: