TEMA 10.

ESTABILIDAD DE PROTEÍNAS

Todas las proteínas empiezan su existencia en un ribosoma como una secuencia lineal de
residuos de aminoácidos. Para alcanzar su conformación nativa, este polipéptido debe plegarse
durante y después de la síntesis. La conformación de una proteína es solo marginalmente
estable. Cambios modestos en el entorno de la proteína pueden acarrear cambios estructurales
capaces de afectar a la función.

• Una cadena polipeptídica recién sintetizada debe realizar el plegamiento, y a menudo

sufrir una modificación química, antes de generar la proteína final.
• Todas las moléculas de una proteína adoptan una conformación sencilla (el estado
nativo), que es la forma plegada más estable de la molécula.
• Al cambiar la temperatura, el pH, o la presión, las proteínas generalmente exhiben poco
o ningún cambio, hasta que se alcanza un punto donde hay un cambio dramático en las
propiedades físicas e, invariablemente, una pérdida de su función biológica. Este
fenómeno se conoce como desnaturalización.
• La desnaturalización no requiere ruptura de enlaces covalentes. Una proteína
desnaturalizada adopta una conformación desplegada, normalmente denominada
ovillo al azar, perdiendo así su conformación 3D biológicamente activa.

EL TÉRMINO ESTRUCTURA NATIVA

✓ La estructura de una proteína tal y como existe en la naturaleza.

✓ La estructura de una proteína cuando es aislada y retiene su actividad biológica.
✓ La forma de una proteína que no tiene actividad biológica pero posee estructura
secundaria. (No le gusta al profe).

EL TÉRMINO ESTRUCTURA DESNATURALIZADA

✓ Forma de una proteína que posee menos estructura secundaria que la nativa. Sin
actividad biológica.

La mayoría de las proteínas se pueden desnaturalizar

mediante calor, el cual afecta de una manera
compleja a las interacciones débiles de una proteína
(los enlaces de hidrógeno principalmente). Si se
aumenta lentamente la temperatura, la conformación
de la proteína suele permanecer intacta hasta que
tiene lugar una pérdida brusca de la estructura (y de
la función) dentro de un estrecho margen de
temperaturas. La brusquedad del cambio sugiere que
el desplegamiento es un proceso cooperativo: la
pérdida de estructura en una parte de la proteína
desestabiliza otras partes.
El punto medio en el intervalo de temperaturas en el que
tiene lugar la desnaturalización se denomina temperatura
de fusión o Tm, temperatura a la cual el 50% de la proteína
es nativa y el otro 50% está desnaturalizada. Es una
transición del tipo todo o nada: o todo está nativo o todo
desnaturalizado, en el punto medio hay la mitad de
proteínas nativas y la otra mitad desnaturalizada, no hay
estados semiplegados.

AGENTES DESNATURALIZANTES

MÉTODOS FÍSICOS

• Frío: disminuye las interacciones hidrofóbicas.

• Calor: afecta a las interacciones débiles de una proteína, principalmente a los puentes
de hidrógeno.
• Altas presiones.
• Radiación: puede provocar ionizaciones de las cadenas laterales de los aminoácidos.

MÉTODOS QUÍMICOS

• pH: los extremos de pH alteran la carga neta de la proteína, dando lugar a la aparición
de repulsiones electrostáticas y a la destrucción de algunos enlaces de hidrógeno.
• Iones metálicos.
• Detergentes: actúan principalmente rompiendo las interacciones hidrofóbicas que
forman el núcleo estable de las proteínas globulares.
• Disolventes orgánicos miscibles en agua, como el alcohol o la acetona. Actúan
rompiendo las interacciones hidrofóbicas.
• Fuerza iónica: sigue la llamada serie de Hofmeister.
 • Agentes caotrópicos: como la urea o el cloruro de guanidinio. Actúan rompiendo los
puentes de hidrógeno, las fuerzas de van der Waals y las interacciones hidrofóbicas.

SERIE DE HOFMEISTER
El grado de eficacia de los distintos iones para estabilizar una proteína, que es en gran medida
independiente de la identidad de la proteína, es paralelo a su capacidad de precipitar las
proteínas. Este orden se conoce como la serie de Hofmeister.

Los iones de la serie de Hofmeister que tienden a desnaturalizar las proteínas, I-, ClO4-, SCN-, Li+
y Mg2+, se consideran caotrópicos. Esta lista debería incluir al ion guanidinio (Gu+) y la urea no
iónica, que son los desnaturalizantes proteicos usados con más frecuencia. Rompen las
interacciones hidrofóbicas. Por el contrario, las sustancias que aparecen en la lista que
estabilizan las proteínas, refuerzan las fuerzas hidrófobas e incrementan así la tendencia del
agua de expeler (expulsar) las proteínas. Esto explica la correlación entre las capacidades de un
ion para estabilizar las proteínas y para precipitarlas.

Esta gráfica representa la temperatura de

fusión de la RNasa A como función de la
concentración de urea y de varias sales de
guanidinio.

El efecto de los distintos iones sobre las

proteínas es, en gran medida, acumulativo:
GuSCN es un desnaturalizante mucho más
potente que el GuCl, mientras que Gu2SO4
ESTABILIDAD TERMODINÁMICA DE LAS PROTEÍNAS
La estabilidad de la mayoría de proteínas en condiciones fisiológicas (proteínas nativas) es
marginal. Las variaciones de energía libre son todas negativas, por tanto, tenderán a plegarse en
el medio adecuado. Sin embargo, es realmente escasa, marginal. Para proteger a las proteínas
se esperaría que el estado nativo fuese mucho más estable que el estado desnaturalizado.

Random coil o espiral al azar, es un nombre que

lleva a confusión, dado que las proteínas están
altamente organizadas, pero esta región no tiene
una estructura secundaria con componentes
difíciles de categorizar.

Si se analizan los términos entálpicos y entrópicos,

en la mayoría de las proteínas hay un término
entálpico favorable a que se produzca el
plegamiento (es negativo). Por otro lado, el término
entrópico es grande pero negativo, lo que significa
que es desfavorable a que se pliegue, debido a que
el random coil desplegada es bastante más
ordenada. El término entálpico lo compensa.

Las proteínas son marginalmente estables debido a que presenta ventajas biológicas:

✓ Ayuda a conferir la flexibilidad estructural que requieren muchas proteínas para

desempeñar sus funciones biológicas. Permite flexibilidad conformacional cuando se
unen los ligandos y sustratos. Si fuera muy estable, las proteínas serían más rígidas. Ej:
la hemoglobina ligaría oxígeno de una manera peor porque no podría pasar al estado de
alta afinidad.
✓ Ayuda a evitar trampas cinéticas (estados intermedios del plegamiento que no son
todavía el nativo, pero tienen menos energía que el estado desnaturalizado y se forman
con mucha rapidez, se corresponden con mínimos locales). La diferencia de energía
entre los estados desnaturalizado y nativo no puede ser muy grande, para evitar que las
proteínas no puedan superar la barrera energética necesaria para pasar al estado nativo.
Por tanto, facilita la eliminación de conformaciones de otra manera estable no nativas.
✓ Ayuda a promover el desplegamiento de las proteínas para permitir su inserción en las
membranas o su transporte a través de ellas. Ej: es imposible que una proteína atraviese
la membrana mitocondrial externa e interna en el estado nativo.
✓ Recambio proteico (turn over): ayuda a agilizar su degradación programada. Las
proteínas se sintetizan y degradan en minutos, semanas o meses. Solo hay una
excepción, esas proteínas con las que nacemos y morimos son las del cristalino. Se
cometen muchos errores en la transcripción y la traducción ya que no hay sistemas que
reparen los errores como en la replicación del DNA (la fidelidad es más baja). Esto se
compensa con el recambio proteico. Las proteínas para ser rápidamente degradadas
necesitan ser previamente desnaturalizadas.
Las colas de renacuajo tienen mucho colágeno, esta cola tiene que ser degradada por la
colagenasa. Esta colagenasa degrada la tiple hélice de 1000 aas generando una hélice
de 75 aas y otra de 250 aas. Tiene una temperatura de fusión más baja que el fragmento
de 1000, esta Tm es similar a las temperatura corporal a la del renacuajo. La bajada de
Tm permite la desnaturalización y la degradación de la cola de colágeno.