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1996)

ELIMINAR LA CULTURA DE LA ELECTROTERAPIA Y LA

PUNTA DE DISPAROVIRUS X DE LA PATATA
EN LAS PATATAS
H. Lozoya-Saldaña, F. Abelló J., andG. García de la R.'

Abstracto
Tallos de patata infectados convirus X de la patata (PVX) estuvieron
expuestos a5, 10 ó 15 miliamperios (mA), durante 5 ó 10 minutos, seguido
de la siembra inmediata hasta la punta de las yemas axilares. cifrD. La
temperatura aumentó de 4 a 10 C en los tejidos durante la exposición a la
electricidad. Después de un período de crecimiento de 60 días, la eficacia de
la terapia (TE, TE = % de regeneración de plantas X% de plantas resultantes
libres de virus) estuvo influenciada por la severidad del tratamiento, ya que la
electricidad estimuló la organogénesis y la eliminación de virus. Los valores
más altos de TE se obtuvieron a 15 mA durante 5 minutos. En estas
condiciones, del 40% al 80% de los brotes se regeneraron y del 60% al 100%
de las plántulas regeneradas resultaron negativas para el virus.

Compendio
A tallos de papa se produjeron con el virus X de la papa (PVX) se les
expuso a 5, 10 o 15 miliamperios (mA) por 5 o 10 minutos, e inmediatamente
después se sembraron in vitro sus yemas axilares. La temperatura de los
tejidos aumentó de 4 a 10 C durante la exposición a la electricidad. Después
de 60 días de crecimiento, la Eficiencia de la Terapia (TE, TE = % de
regeneración de plantas X% de plántulas resultantes libres de virus) fue
influenciada por la severidad de los tratamientos, ya que tanto la
organogénesis como la eliminación del virus fueron estimuladas por la
electricidad. Los valores más altos de TE se adquirieron con 15 mA por 5
minutos. Bajo estas condiciones, de 40% a 80% de las yemas se regeneraron,
y de estas, 60% al 100% resultaron negativas para la presencia del virus.

Introducción
La termoterapia y el cultivo de tejidos son métodos comúnmente
utilizados para la eliminación de virus en papa (3, 9, 10, 15). Sin
embargo, la termoterapia es horaconsume, requiere de varios días a pocas
semanas para completarse, y su eficiencia en la erradicación del virus es baja,
del 25 al 40% (7, 9, 10). Los pulsos eléctricos se reportan como estimulantes
en la diferenciación de plantas en vttro (5). Además,

Departamento de Fitotecnia, Universidad Autónoma Chapingo. Chapingo, Edo. de

México,56230, México.
Aceptado para su publicación el 22 de enero de 1996.
PALABRAS CLAVE ADICIONALES: Terapia, cultivo de tejidos, libre de virus.
150 AMERICANO PATATA J° URNAL (Vol. 73

Las propiedades eléctricas del tejido vegetal se consideran en una amplia

gama de estudios fisiológicos (12). Sin embargo, el efecto de la electricidad
para eliminar virus del tejido vegetal ha recibido poca atención (1, 6, 13) .
En nuestros ensayos preliminares, tubérculos germinados, plantas
enterasen vivoyen vitro,y tallos, se conectaron directamente a los electrodos
o indirectamente, por inmersión de tejido vegetal en agua electrificada en
un amplio rango de combinaciones intensidad-tiempo. Este informe
resume el método más consistente y la combinación de parámetros de
dosificación que dan como resultado una alta frecuencia deregeneración
y eliminación de virus.

Materiales y métodos
A lo largo de este estudio se utilizaron plantas de patata cultivadas
en invernadero de dos meses de edad infectadas con el virus X de la
patata (PVX). Se seleccionaron los tallos más vigorosos y los segmentos
con las cinco yemas axilares más bajas se trataron con una de las
siguientes combinaciones de corriente intensidad-tiempo: 5, 10 o 15
miliamperios (mA) durante 5 o 10 minutos. La electricidad fue
suministrada por una fuente de alimentación de electroforesis (Buchler
Instrument Division, mod. no. 31155).Fort Lee, Nueva Jersey, EE. UU.).
Inmediatamente después del tratamiento, se eliminaron de 11 a 40 yemas
por tratamiento.
de los tallos y se esterilizaron superficialmente sumergiéndolos en lejía
comercial al 6% durante 10 min seguido de etanol al 70% durante 5 min.
Puntas de crecimiento, 0.5-
de 1,0 mm de largo, se extirparon de cada yema y se sembraron itt vitro
en un medio semisólido “B” (4), compuesto por sales MS básicas (11), y
suplementado con 0,25 partes por millón (ppm) de ácido giberélico, 2,0
ppm pantotenato de calcio, sacarosa al 3% y agar al 0,8%. Después de 30
días, las plántulas se transfirieron a un medio de diferenciación de brotes
que contenía las sales MS básicas
(11) suplementado con 0,3 ppm de ácido indolacético, 0,3 ppm de
kinetina, 4 % de sacarosa y 7 % de agar, como se informó anteriormente
(7, 8). En ambos casos, la incubación fue a 35 microEinsteins (JiE), en
un régimen de luz de 14 h/día, a 25-28 C(Figura 1) .
Después de 30 días en el medio de diferenciación de brotes, la
regeneración de plantas se registró como el porcentaje de plántulas
enteras producidas a partir del número total de puntas de yemas
plantadas originalmente por tratamiento. A continuación, las plántulas
se transfirieron al suelo. La presencia del virus X de la papa (PVX) fue
detectada porELISA antes de la transferencia al suelo, y el porcentaje
de plantas negativas para PVX se calculó a partir del número de
individuos regenerados por tratamiento. El producto de ambos
parámetros se utilizó para calcular la Eficiencia de la Terapia (TE) que
indica el porcentaje de plántulas regeneradas X porcentaje de plantas
libres de virus. Los clones utilizados en este estudio, 760055, 750615
y 750783, fueron proporcionados amablemente por M. Sc. Francisco
Flores, Jefe del Programa Nacional de la Papa, Instituto Nacional de
Investigaciones Agropecuarias (INIFAP), Toluca, México.
1996) LOZOYA—SALDAkA, ct al.: ELECTROTHERAPIA 151

40 - 50 cm
ST EM S
con 6 BU OS ELECTROTERAPIA

Tierra DISPARO
MURIÓtu
METRO

FI€i. 1. Secuencia de transferencias y procedimientos utilizados para el estudio de electroterapia

y regeneración de plántulas in iiitro.

Resultadosy Discusión
Aumento de temperatura de 4 a 10 C y mayor flacidez (evaluada
porinspección visual) se detectaron en los tallos inmediatamente después de
la electroterapia. Los efectos anteriores no tuvieron relación con la severidad
del tratamiento, ni la temperatura del tejido después del tratamiento tuvo
influencia directa en la regeneración de las plántulas o la eliminación del
virus.
&genrrotion—La electricidad estimuló la organogénesis y el crecimiento,
aunque sin una relación clara entre la intensidad de los tratamientos y el
número de plantas diferenciadas. Los testigos, no expuestos a la corriente
eléctrica, resultaron en 13 a 20% de regeneración, mientras que los brotes de
tallos expuestos a la corriente eléctrica se regeneraron a una tasa de 9 a 88%,
dependiendo del material genético (Cuadro 1). El clon 760055 dio el mayor
porcentaje de regeneración (25 a 88%) y plantas más vigorosas que el resto de
los clones,
152 PATATA AMERICANADIARIO (Vol. 73

TABLA 1.—Eefecto de la electroterapia enin vitroplántula regeneración y PVX

erradicación.

TRATAMIENTO REGENERACIÓN SIN VIRUS

CLON mA/min PLANTAS TE (3)
(l) (2)

760055 0/0 8/40 20 0/8 0 0

5/5 5/20 25 0/5 0 0
5/10 13/20 sesenta 0/1 S 0 0
y cinco
10/5 28/32 87 4/NOS 14 12
OTRO
S
J0/J 0 23/40 58 14/23 61 34
T 5/5 15/17 88 10/15 o°8
l5/t0 30/38 79 14/30 47 36

750515
0/0 8/40 20 0/8 0 0
5/5 6/20 50 2/6 33 10
5/10 8/20 40 yo/8 12
10/5 18/38 47 15/18 S3 89
10/10 5/40 13 4/5 80 10
l5/5 5/20 25 5/5 100 25
15/10 20/10 50 7/10 70 35

750783
030/ 4/30 13 0/4 0 0
5/5 2/20 10 0/2 0 0
6/10 4/20 20 0/4 0 0
10/5 5/32 diecisé 3/6 60 9
is
10/10 3/33 9 1/3 33
15/5 3/11 27 3/3 100 27
15/10 4/13 3l 4/4 100 3i

(I) Plántulas regeneradas/ número de yemas tratadas cultivadas.

(2) Plantas/plántulas libres de PVX regeneradas.
(3) Tasa de eficiencia de la terapia: TE = a (l ) x a (2) .

mientras que 750615 produjo de 13 a 50 % de regenerantes, y 750783

regeneró de 9 a 31 %. No se observaron diferencias morfológicas entre las
plantas expuestas a los diferentes tratamientos y controles actuales ni in vitro
ni en Pico. Se han reportado otros tipos de respuestas a estímulos eléctricos
en otros cultivos, como el desarrollo de resistencia al frío y la sequía, y la
inducción de organogénesis in vitro (5, 14, 16) .
Sin virusPliegues: cuando están expuestosa 5 mA, solo se generó el clon
750615
Plantas libres de PVX (33 y 12 a) . Sin embargo, a 10-15 mA los tres clones
dieron individuos negativos para PVX, en un rango del 14 al 100% (Tabla 1).
Teniendo en cuenta los efectos generales con respecto a la exposición al
amperaje, independientemente del tiempo y
1996) LOZOYA—SALDANA, ei al.:ELECTROTERAPIA 153

clon, a mayor intensidad, mayor porcentaje de plantas “sanas” (5 mA, 7,5%;

10 mA, 55,1%; 15 mA, 80,5%) . Este no fue el caso cuando la duración
actual varió: la exposición de 5 minutos dio como resultado un 50,7 % de
plantas negativas para el virus, mientras que una exposición de 10 minutos
dio como resultado 44,89c de individuos "sanos" (Tabla 1).
Eficacia de la terapia(T6)—La eficiencia de la terapia (TE) se calculó
multiplicando el porcentaje de plántulas regeneradas X el porcentaje de
sobrevivientes libres de virus. El mayor TE, 59 %, se obtuvo con el clon 760055
tras una exposición de 15 mA durante 5 min. Este es un resultado de 88% de
plántulas regeneradas, de las cuales, 67% estaban libres de virus (Tabla l). La
exposición más severa de 15 mA durante 10 min resultó en 31 a 36% TE para los
tres clones. Estos datos uniformes resultaron de:
a) Alta regeneración pero pocas plantas libres de virus (clon 760055, 79%
y 47% respectivamente).
b) Comportamiento moderado en ambas observaciones (clon 750615, 50%
de plantas desarrolladas, de las cuales 70% estaban libres de virus).
c) Bajo porcentaje de regeneración, aunque todos los individuos resultantes
fueron negativos al virus (clon 750783, 31% de diferenciación y 100%
“sano”).
De acuerdo con estas experiencias, exposiciones similares se
implementaron posteriormente para otros materiales genéticos. Los cultivares
Mexiquense y Norteña fueron sensibles a dosis altas (15 mA por 5, 10 o más
min). Sin embargo, con tratamientos moderados, 10 mA por 10 min, se
obtuvo una regeneración del 75%, con un 97% de la población resultante sin
virus (73% TE, basado en al menos 50 yemas por cultivar, datos no
incluidos) . En la mayoría de los casos, cuanto más vigoroso es el tallo,
mayor es la supervivencia y el TE.
Las exposiciones a una corriente eléctrica suave, de 5 a 10 mA durante 5
a 10 min, antes del cultivo zn vitro, pueden mejorar la regeneración.
Previamente se han informado mejoras o alteraciones del crecimiento en otras
especies, aunque no se explican los mecanismos subyacentes (5, 14, 16). En
nuestros estudios, el pH de la savia no se alteró consistentemente (promedio
de pH de 6,1 y 5,8 antes y después de los tratamientos, respectivamente) y la
temperatura del tejido, después de la exposición a la corriente eléctrica, no se
relacionó con la intensidad de los tratamientos ni con la supresión del virus.
Sin embargo, se registraron temperaturas de 38 C en algunos tallos después
del tratamiento. Esta temperatura suprimió temporalmente la actividad viral
pero no inhibió el metabolismo de la planta (2, 8).
El volumen y la geometría son importantes en la conductividad
eléctrica, ya que las cargas tienden a acumularse en las proyecciones (12),
como las puntas de las yemas axilares en nuestro estudio. Asimismo, el
vigor general de los tejidos influye en la regeneración así como en la
resistencia al calor (9), facilitando la adaptación a la intensidad de los
sistemas terapéuticos. Por lo tanto, siempre que los tallos vigorosos se
expongan a la corriente eléctrica, el tratamiento en sí toma unos minutos,
como se supone que días o semanas como termoterapia, antes de transferir
las yemas tratadas a medios de cultivo in vitro.
154 PATATA AMERICANADIARIO (Vol. 73

reconocimientos
Los autores agradecen al Programa Nacional de la Papa, Instituto
Nacional de Investigaciones Agropecuarias (INIFAP) por los clones
proporcionados; a la Universidad Autónoma Chapingo y The International
Cooperative Program on late blight (PICTIPAPA) por el apoyo financiero
continuo, y al Dr. Gary Franc y los revisores anónimos, por la revisión crítica
del manuscrito.
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