Inducción de mutaciones por medios químicos y físicos para la

generación de variedades de cacao, café y cítricos

El fitomejoramiento por mutaciones es una técnica de la biotecnología que

consiste en alterar la carga genética del sustrato a trabajar para obtener
características distintas a los ejemplares originales, como puede ser mejorar la
productividad, proporcionar resistencias al estrés biótico y abiótico e incluso
aportar mayor valor nutritivo como alimento (Savant, 2011).

En el caso de estudio de interés, se estudiarán cultivares de cacao, café

y cítricos que serán sometidos a agentes físicos y químicos para la inducción de
mutaciones y obtener variedad genética de los mismos. Los estudios se
realizarán en el Instituto Venezolano de Investigaciones Científicas (IVIC),
precisamente en el Laboratorio de Mejoramiento Genético de Plantas (LMGP)
del Centro de Biotecnología Agrícola (CBA).

De manera general, la metodología expuesta por Anbarsan y

colaboradores en el 2014 se podría resumir en un diagrama de bloques
representado por tres tareas, tal como se observa en la figura 1

Figura 1 Diagrama de bloques del proceso.

La recepción de las semillas consiste en una selección de las mismas a

criterio del analista, seguido de un proceso de limpieza y esterilización con agua
destilada y una solución de hipoclorito de sodio al 2% durante 25 minutos (en
ocasiones se utiliza tween-20 como emulsionante), para finalmente ser secadas
antes de dar inicio a la segunda etapa del proceso. Algunos autores también
recomiendan utilizar alcohol, detergentes y fungicidas, garantizando una mejor
desinfección del medio, no obstante, los tiempos de exposición deben ser
menores. En la figura 2 se puede apreciar el proceso de manera esquemática.
 Figura 2 Esquema de recepción de muestras.

En la sección de la exposición del agente mutagénico se reporta en

diferentes literaturas la importancia de la dosis letal 50 (LD50, por sus siglas en
ingles), para esto, las semillas son transferidas a soluciones de diferentes
concentraciones que contienen el o los reactivos correspondientes, durante un
tiempo determinado con agitación constante para favorecer los fenómenos de
transporte y dar lugar a la actividad química en el embrión. Una vez culminado
el proceso, se inhibe el efecto del agente mutagénico con el empleo de otros
reactivos y/o se lavan cuidadosamente las semillas con agua destilada.

El material vegetal se esparce en un papel germinador húmedo en

petriplacas para evaluar la capacidad de germinación de las mismas, la figura 3
resume el proceso de exposición.

Figura 3 Proceso de exposición de los agentes químicos en explantes.

Por otro lado, las referencias indican que, para el caso de las naranjas,
para condiciones favorables de germinación de los mismos recomiendan 25°C
en oscuridad para 14 o 28 días con murashige y skoog (MS) como medio de
cultivo (Chand, Sharma, & Kajla', 2014). En cambio, en el café aplican
condiciones de 22°C, con fotoperiodos de 16 horas y medio de cultivo MS junto
con carbón activado, sacarosa y agar, Al- Azab (2015) reporta resultados a las
ocho (8) semanas. Mientras que, para el cacao, Jenderek (2015) utilizo medio de
cultivo MS con cisteína a 30°C con fotoperiodos de 18 horas, dio como resultado,
plántulas de 10-12 cm de largo a las 5-6 semanas iniciado el procedimiento.

Este proceso da lugar a una base de datos de diferentes barridos de

concentración para distintos tiempos, como por ejemplo indica la tabla 1.

Tabla 1 Base de datos esperada luego de la exposición del agente mutagénico y la germinación de las
semillas/embriones.

tiempos de
exposición
1 2 4 8 16
[t]
(h)
Dosis,
concentración Porcentaje de germinación
[%m/m] [%G]
(%) (%)
0,0 C
0,2 %G101 %G201 %G301 %G401 %G501
0,4 %G102 %G202 %G302 %G402 %G502
0,6 %G103 %G203 %G303 %G403 %G503
0,8 %G104 %G204 %G304 %G404 %G504
1,0 %G105 %G205 %G305 %G405 %G505
1,2 %G106 %G206 %G306 %G406 %G506
1,4 %G107 %G207 %G307 %G407 %G507
1,6 %G108 %G208 %G308 %G408 %G508
1,8 %G109 %G209 %G309 %G409 %G509
2,0 %G110 %G210 %G310 %G410 %G510

Posteriormente se recomienda analizar la data por medio de un paquete

estadístico que permita facilitar su interpretación frente al comportamiento a
esperar. Por otro lado, también se recomienda graficar los puntos en el espacio
y desarrollar una superficie que modele un comportamiento matemático del
fenómeno observado y determinar la curva de la Dosis Letal Media (LD50, por
sus siglas en ingles) y, a través herramientas matemáticas, optimizar los tiempos
de exposición en función de la dosis determinada.

De esta misma forma, se piensa aplicar irradiación a las semillas a una

longitud de onda que comprende el espectro de los rayos gamma, aplicando
diferentes dosis de iradiacion (J/Kg), por lo que el resultado obtenido seria
análogo a la tabla 1, no obstante, variando el barrido de las dosis de
concentración de agentes químicos por la cantidad de energía suministrada por
cada kilogramo de muestra, conocido también como Gray o por sus siglas Gy.
 De igual forma se aplicará el mismo tratamiento para todas las especies
a estudiar en diferentes agentes químicos. En todos los casos de estudios se
hará observación de los parámetros morfológicos de los productos obtenidos y
realizar una caracterización por medios de biología molecular en los materiales
de interés.

Una vez obtenido las plántulas aptas para los siguientes estudios, se
aplicarán estudios relacionados al estrés abiótico, tales como estrés hídrico,
ácido y térmico, con la finalidad de observar los mecanismos de respuestas de
las plantas ante tales ambientes.

En conclusión, Los resultados esperados son un conjunto de plantas o

plántulas modificadas por medios químicos o físicos, que cuenten con
características de tolerancia frente a diferentes ambientes.

Referencias

Ameen, A.-A., Sanad, M. H., Mohammed, H., & El-Sherif, F. (2015). Micropropagation of Four
Coffee Cultivars (Coffea arabica L.) from Yemen. Hortscience Journal of Suez Canal
University, 4, 25-31.

Anbarasan, Rajendran, Sivalingam, & Chidambaram. (2014). Studies on the effect of EMS and
Colchicine in M1 generation of Sesame (Sesamum indicum L.) Var. TMV3. International
Letters of Natural Sciences, 11(2), 209-214.

Chand, L., Sharma, S., & Kajla', S. (2014). In vitro Seed Germination Studies in Citrus
Rootstocks. Annalsof Agri-Bio, 2(19), 290-294.

Jenderek, M., Holman, G., Irish, B., & Souza, F. V. (2015). In Vitro Seed Germination and
Rootstock Establishing for Micrografting of Theobroma cacao L., (pág. 60). New
Orlands.

Savant, & Kothekar. (2011). Induction of variability in fatty acid profile in sesame (Sesamum
indicum L.). Journal of Phytolog, 3(12), 01-03.