PRACTICA N° 01

FIJACIÓN DE MUESTRAS HISTOLOGICAS

A. REALIZA INVESTIGACIÓN DE LOS FIJADORES QUÍMICOS SIMPLES

Los reactivos fijadores más comúnmente usados son los ácidos minerales, sales metálicas,
ácidos orgánicos. y reductores orgánicos

Ácidos Minerales

- Ácido crómico. Solo tiene acción fijadora en soluciones muy diluidas, 0.1 a 1%, ya que
en soluciones concentradas es un disociador muy poderoso. Fija bien los núcleos.
Es rara vez usado.
- Ácido Osmico. Debe ser llamado tetroxido de osmio, ya que el ácido osmico
(H 2 o504) no se usa en fijaci6n. Se usa en solucion acuosa al 1%. Mata rápidamente
las células y fija bien el citoplasma y el condrioma, pero no el núcleo. Impide una
buena diferenciaci6n óptica. En estado de vapor es un fijador excelente solo para piezas
muy delgadas y pequeñas, como protozoarios y frotis.

Sales Metálicas:

- Bicromato de Potasio. Las soluciones al 3 o 4% endurecen perfectamente los centros

nerviosos. Fija bien el citoplasma, pero altera el núcleo.
- Bicloruro de Mercurio. Se usa disuelto a saturación en agua destilada o en una
solución de cloruro de sodio al 0.5% es un fijador de primer orden, pero es necesario
eliminarlo por completo de los tejidos, cuando la fijación termine, para evitar la
formación de cristales.
- Cloruro de Platino. Se utiliza al 1.300 en solución alcohólica o acuosa. Conserva bien
el núcleo, pero altera el citoplasma.

Ácidos Orgánicos:
- Los ácidos orgánicos tales como el picrico, acético, tricloracetico, entran en gran
número de mezclas fijadoras, pero aisladamente se utilizan cada vez menos.

Reductores Orgánicos:

- Alcohol Etílico. La concentración mínima para fijación es de 80%, en otras

concentraciones la acción deshidratante impide 1a acción fijadora. Es poco penetrante,
endurece mucho los tejidos, disuelve las grasas, fija mal el núcleo; por lo tanto, es un
pobre fijador que se usa sobre todo para la demostración de carbohidratos.
- Alcohol Metílico. Se usa puro, es muy importante en la técnica de frotis desecados.
- Acetona. Se usa pura, no se considera un buen fijador pues causa en los tejidos
contracciones considerables. Su principal ventaja consiste en que no disuelve el ácido
úrico ni el glicógeno y conserva algunas grasas a condición de que su acción no sea
prolongada.
- Formol. Proviene del formaldehido que es un gas, cuya solución acuosa es la que
recibe el nombre de formol; se considera formol puro la solución comercial al 40%. Es
 universalmente usado porque fija bien, endurece suficiente y conserva las grasas y
lipoides; se usa en soluciones acuosas que varían de 3 al 25%, al 10% es la solución
más empleada pues dar excelentes resultados. Con el tiempo se polimeriza
empobreciéndose y haciéndose nocivo para la fijaci6n por la formación de ácido
fórmico que siempre está presente en cantidades más o menos considerables en el
formol comercial y a menudo conviene neutralizarlo.

B. REALIZA INVESTIGACIÓN DE LOS FIJADORES QUÍMICOS COMPUESTOS/

MEZCLAS FIJADORAS:

Las mezclas fijadoras se utilizan para técnicas de rutina o para técnicas especiales.
Las mezclas fijadoras son combinaciones de agentes fijadores, cada uno de los cuales es por
si solo insuficiente para dar una fijación que responda a todas las exigencias.

Mezclas Fijadoras a base de Cromo en forma de Ácido Cr6mico o Bicromato:

- Mezcla de Orth o Muller/formol. Buen fijador general, útil para glic6geno y grasa.
- Mezcla de Zenker (1894). Buen fijador general.
- Meicla de Helly (1904) o Zenker/formol. Excelente para tejido hematopoyético y discos
intercalares.
- Mezcla de Regand (bicromato-formol-acitico). Bueno para mitocondrias y gránulos
citoplasmáticos.

Mezclas Fijadoras a base de Ácido Osmico:

- Mezcla de Flemming (cromo-aceto-6smico). Bueno para figuras mit6ticas.

- Mezcla de Chumpy (1909). Bueno para detalles citologicos.
- Mezcla de Altman. Buen fijador general.

Mezclas Fijadoras a base de Sublimados Corrosivos:

- Sublimado alcohólico de Shaudim (1889). Bueno para protozoarios.

- Mezcla de Gilson (1897). Bueno para invertebrados.

Mezclas Fijadoras a base de Ácido Pícrico:

- Picroformol de Bovin (1897). Recomendado para uso común y cotidiano, excelente

para conservar glucógeno.
- Mezcla de Duboscq-Brasil. Buen fijador general.

Mezclas Fijadoras a base de Formol:

- Formol bromuro de Cajal. Excelente para tejido conectivo y neuroglia

Mezclas fijadoras a base de Alcohol:

- Fijador de Carnoy. Bueno para ácidos nucleicos, glicógeno y gránulos d~ Nissl.

 - Alcohol-Formol. Bueno para Tejido Nervioso.
C. REALIZA INVESTIGACIÓN DE LOS FIJADORES FÍSICOS

FIJADORES FÍSICOS. - Son varios los fijadores físicos que usualmente se utilizan en
histología, sobre todo por su simplicidad, pero la mayoría de ellos debemos desecharlos,
porque alteran gravemente la estructura de los vegetales.

El calor:
Es el más antiguo y más utilizado de estos fijadores. Tanto en microbiología, como en el
frotis de células animales, la fijación se hace a la llama, con lo que se obtiene una
coagulación rápida de las proteínas y por tanto su estabilización. Esta técnica no es
recomendable cuando se trata de tejidos vegetales, puesto que produce alteraciones
importantes y muy desiguales en las paredes celulares.
El frío:
Como anteriormente hemos mencionado, el frío (congelación), se ha tenido y se tiene como
agente de fijación, pero es realmente un agente conservador y por tanto no debe utilizarse
como tal.
La criodesecación (liofilización):
Se trata de congelar a una temperatura inferior a -50ºC y eliminar el agua a una presión
baja. este método puede ser muy efectivo, si después la pieza se incluye en parafina o en
plástico, pero es bastante complejo y excesivamente caro; no produce deformaciones ni
retracciones, ni tampoco endurecimiento de las muestras. Su inconveniente es el precio y lo
engorroso que puede resultar el que, al manipular la muestra, no se rehidrate
posteriormente.

D. CONCLUSIONES

QUE APRENDÍ

Aprendí diferentes formas de fijación y cuál es la más utilizada

QUE ME FALTO APRENDER

Falta la práctica y observación