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PROCESO DE TEJIDOS Y CITOPREPARACIN

UNIDAD DIDCTICA 10
PRINCIPALES FIJADORES.

1.- INTRODUCCIN.
2.- FIJADORES PUROS Y MUESTRAS FIJADORAS.
3.- PROPIEDADES DE LOS FIJADORES.
3.1.- Formol.
3.2.- Alcohol.
3.3.- Acetonas.
3.4.- cido Pcrico.
3.5.- cido Actico.
3.6.- cido Tricloractico.
3.7.- Glutaraldehido.
3.8.- cido Osmico.
4.- MEZCLAS FIJADORAS.
4.1.- Composicin de algunas mezclas fijadoras con formol:
4.1.1.- Mezcla de Orth.
4.1.2.- Mezcla Bouin acuosa.
4.2.- Composicin de algunas mezclas fijadoras sin formol:
4.2.1.- Lquido de Carnoy.
4.2.2.- Lquido de Zenker.

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1.- INTRODUCCIN.
El principal fijador es el Formol, es sin duda el ms usado de los fijadores, ya que rene a la
vez las propiedades del lquido fijador y conservador.
El Formol o Formalina, es una solucin concentrada de Aldehido Frmico al 35-40%.
La concentracin en Aldehido Frmico es variable de una muestra a otra, ya que el formol
es voltil.

2.- FIJADORES PUROS Y MUESTRAS FIJADORAS.


Si se excepta la Formalina o Formol, el Alcohol y el cido smico, los fijadores sencillos o
puros no se utilizan nunca aislados, pues las ventajas que estos suponen, se ven
contrarestadas por una serie de inconvenientes considerables.
Con la fijacin no se busca el poner de manifiesto exclusivamente y de manera especial un
determinado elemento tisular, sino que a menudo causas que parecan secundarias,
adquieren de pronto una mayor importancia. Por ello las mezclas fijadoras revisten una
serie de ventajas por su carcter fijador en general.
A partir de la solucin madre del 35-40% de Formol, se harn distintas soluciones al
10% - 15% - 20% - 30%.

3.- PROPIEDADES DE LOS FIJADORES.


3.1.- Formol.
Esta dotado de un gran poder de penetracin, fija y endurece rpidamente los tejidos sin
deshidratarlos, deja en los tejidos su contenido en agua y por tanto no los deforma.
En cambio un mal fijador citolgico. En los tejidos que encierran una gran cantidad de
sangre, da origen bien puro o en mezcla fijadora con BOUIN, a un pigmento artificial negro
o pardo oscuro que precipita irregularmente. Este pigmento se llama pigmento formlico y a
veces es motivo de confusiones; se elimina bien tamponndolo o sumergiendo los cortes en
alcohol amoniacal o en alcohol absoluto (100%) con cido Pcrico a saturacin.
SATURACION, es cuando en un lquido ya no se diluye la parte slida que vamos aadiendo.
Las piezas pueden estar en el formol durante mucho tiempo sin alterarse mucho.

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3.2.- Alcohol. Propiedades generales. Inconvenientes.


En general se utiliza el Alcohol Etlico, la accin ms potente corresponde como es natural a
la solucin ms concentrada como es el de 100.
Para fijar trozos pequeos de unos 5 mm de espesor lo dejaremos de 2-4 horas, habiendo
renovado ste unas 3 veces por lo menos.
El alcohol que se diluye en agua se vuelve ms pesado y se acumula en el fondo del
recipiente quedando el alcohol ms concentrado y ligero en la superficie. Por ello ser
conveniente que las piezas a fijar permanezcan en las capas superiores, para lo cual el
mejor sistema seria colgarlas.
En la fijacin de piezas de gran tamao con el Alcohol Absoluto, se corre el peligro de que
la capa ms externa de la pieza se endurezca de tal manera que el alcohol ya no pueda
penetrar ms all y no alcance el centro de la misma.
Para garantizar una buena fijacin de las partes centrales, es decir obtener una
penetracin ptima al mismo tiempo que una deshidratacin suficiente se deber utilizar
una solucin al 70%. Para los cortes por congelacin es preferible utilizar una solucin del
70-80%. Las soluciones alcohlicas poco concentradas, tienen un efecto macerador. El
alcohol precipita con rapidez las protenas, los lpidos son disueltos rpidamente y la
hemoglobina con lentitud.
Los resultados, podramos aceptarlos como buenos en general a pesar del endurecimiento
de los tejidos que es considerable.
3.3.- Acetonas. Propiedades generales.
La fijacin de los tejidos con Acetona, da lugar a concentraciones considerables de los
tejidos, debido a la extraordinaria rapidez con que deshidrata los mismos. La Acetona es
muy voltil, incolora, e inflamable. Estos efectos indeseados y molestos hacen, que la
Acetona, solo se utilice en determinados trabajos.
La fijacin durar el minuto indispensable y los tejidos han de ser inmediatamente
retirados de la misma e incluidos (duracin mxima 2 horas, para piezas delgadas 20
minutos son suficientes).
3.4.- cido Pcrico. Propiedades generales.
Se presenta en forma de agujas cristalizadas de color amarillo dorado, muy toxicas y
venenosas, explosivas y solo un 2% soluble en agua. En la fijacin produce contracciones en
el tejido, pero no endurecimiento.
El cido Pcrico a de ser eliminado despus de la fijacin, lavando las piezas en el alcohol de
70-80%. Eliminacin que facilitaremos, aadiendo unas gotas de amonaco. La utilizacin del

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cido Pcrico, no se recomienda para las inclusiones en Celoidina.


3.5.- cido Actico. Propiedades generales.
Su propiedad fundamental consiste en la precipitacin de los ncleos proteicos, de forma
que el ncleo y los cromosomas quedan perfectamente fijados.
El citoplasma y las mitocondrias no quedan bien fijadas, a lo sumo alcanzan un estado de
prefijacin. El cido Actico en solucin al 1-4% en numerosas mezclas fijadoras, pues el
hinchazn que produce, compensa la contraccin que originan otras sustancias y los tejidos
permanecen blandos.
Los vapores de cido Actico Glacial son inflamables.
3.6.- cido Tricloractico. Propiedades generales.
Los cristales del cido Tricloractico son incoloros, custicos (queman) y fcilmente
solubles en agua, la solucin al 5% sobre todo se utiliza para descalcificar. Debido al
hinchazn de los tejidos conjuntivos, deben ser lavados con agua, los tejidos fijados en
estas soluciones contienen cido Tricloractico.
3.7.- Glutaraldehido. Propiedades generales.
Es un lquido oleoso, que se encuentra en el mercado en forma de solucin al 25%. El
proceso de fijacin es muy parecido al de Formol, tiene muchas ventajas y en parte supera
la fijacin con cido smico.
Las piezas pequeas sobretodo en microscopa electrnica, en la cual los tejidos pueden ser
tratados luego con cido smico. Las piezas pequeas quedan fijadas al cabo de 6 horas.
Los tejidos pueden ser permanecer ms tiempo en Glutaraldehido, lavndolos luego con una
solucin tampn de fosfato.
3.8.- cido Osmico. Propiedades generales.
El cido smico Tetrxido de Osmio, se presenta en cristales de color amarillo dorado,
son voltiles y solubles en agua. En el comercio se encuentran en tubitos de vidrio cerrado,
que contiene 0.1 mg a 1 g.
Debido a su escaso poder de penetracin 0.5 mm/h el cido smico se utiliza solamente en
las tcnicas de cortes ultrafinos (microscopa electrnica) que se usan proporciones
reducidsimas de tejidos, a pesar de lo cual todos reconocen que es el fijador ptimo.
Los vapores de cido smico, alteran las mucosas: bucal y nasal produciendo ronquera.
Tambin daa la crnea, por ello se ha de trabajar con gafas protectoras o mejor todava
bajo una campana de gases.

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La incorporacin del smio en los tejidos proporciona el contraste necesario para los
mrgenes de microscopa electrnica. En la prctica se utiliza exclusivamente el cido
smico diluido en una solucin tampn.
La ampolla de vidrio resultante, se limpia cuidadosamente por fuera, despus de abrirla se
introduce con su contenido en el lquido preparado de antemano. El cido smico tarda
varias horas en disolverse y ha de colocarse en la oscuridad, ya que es descompuesto por la
accin de la luz.

4.- MEZCLAS FIJADORAS.


Tienen por finalidad el compensar las desventajas que pueda presentar una sustancia
fijadora con las ventajas de otra, algunas de ellas se utilizan para fijar de manera especial
un componente celular y otras sirven para un problema determinado.
4.1.- Composicin de algunas mezclas fijadoras con formol:
4.1.1.- Mezcla de Orth.
Se compone de:
1 parte de Formol, 9 partes de lquido de Muller, obtenindose buenos resultados al cabo
de 24 48 horas.
4.1.2.- Mezcla Bouin acuosa.
Se compone de:
15 partes de cido Pcrico en solucin saturada, 5 partes de Formol y 1 parte de cido
Actico puro, fija al cabo de 2 a 24 horas. Terminada la fijacin de las piezas, se lavan con
alcohol de 70-80 hasta la desaparicin de su coloracin amarillenta.
Es una de las mejores mezclas fijadoras.
4.2.- Composicin de algunas mezclas fijadoras sin formol:
4.2.1.- Lquido de Carnoy.
Se compone de:
6 volmenes de alcohol de 100, 3 volmenes de cloroformo y 1 volumen de cido Actico.
Penetra en los tejidos con gran rpidez l mm/h y da buenos resultados en conjunto. Su
fijacin no debe sobrepasar en ningn caso las 24 horas, pasando luego las piezas al alcohol
absoluto.

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4.2.2.- Lquido de Zenker.

Se compone de:
2.5 g de Dicromato Potsico, 5 g de Cloruro de Mercurio sublimado, 1 g de Sulfato Sdico
y 100 cc de agua destilada. En el momento de su uso se agregan 5 cc de cido Actico.
Las piezas pueden ser conservadas durante aos, si se tiene la precaucin de aadir unos
trozos de CRETA CRISTALIZADA.

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