UNIVERSIDAD NACIONAL SIGLO “XX”

BIOQUIMICA- FARMACIA
HEMATOLOGIA

TRABAJO DE EXTENSION
ALTERACIONES DE LA HORMONA ESTIMULANTE
DEL TIROIDES

DOCENTE: DRA. ALINA GUELIA VASQUEZ

CURSO: 5TO AÑO FECHA: 9 DE AGOSTO DE 2022

LISTA DE INTEGRANTES:
1. Balderrama Balderrama Sheyla Daniela
2. Beltrán Lima Viviana Valentina
3. Baptista Siles Bertha
4. Daza Mora Jhoselin
5. Hidalgo Lafuente Dionicia Alexis
6. Huaylla llusco Danny
7. Montes Oporto Lesly Jhasmyn
8. Quispe Nina Banny Ingebord
9. Ramírez Aguilar Nisbert Carlos
10. Yucra Escobar Sayda

LLALLAGUA- POTOSI- BOLIVIA

CASO CLÍNICO
NIÑA DE DIEZ AÑOS CON ALTERACIONES DE LA HORMONA ESTIMULANTE
DEL TIROIDES
Se presenta el caso de una niña de diez años remitida a la consulta especializada para valoración
por sospecha de hipertiroidismo.
Sus padres habían notado nerviosismo, poca tolerancia al calor y ánimo más decaido. No
presentaba deposiciones diarreicas, ni había padecido taquicardias, disminución de peso o caída
del cabello. Mantenía un ritmo de sueño'normal y el rendimiento escolar era adecuado. Aparición
de menarquia a los diez años con menstruaciones regulares.Tomaba en la dieta sal yodada, con
alimentación variada.
Como antecedentes personales, nació sin alteraciones en el periodo neonatal. Ha tenido un buen
desarrollo psicomotor y una curva ponderoestatural adecuada sin estancamiento.
El padre está en seguimiento por hipotiroidismo subclinico sin requerimientos de medicación en
el momento de la consulta.
Somatometría
▬ Peso 55,5 kg (percentil 97 [P7] +1,93 desviaciones estándar [DE]);
▬ Talla 157,6 cm (P98 +2,1 DE);
▬ Indice de masa corporal (IMC) 22,34 kg/m² (P85 +1,08 DE).
▬ Superficie corporal 1,56 m².
Exploración física
En la consulta presenta tensión arterial sistólica de 166 mmHg (>Pg) y diastólica de 75 mmHg
(P90). Frecuencia cardiaca de 75 lpm.
Bien nutrida e hidratada. Eupneica. No se objetivan exantemas ni petequias. En la región cervical
se evidencia un tiroides aumentado de tamaño de consistencia elástica y sin nódulos, sin
exoftalmos asociado. No se aprecian alteraciones en la auscultación cardiopulmonar ni en la
exploración abdominal.
Pruebas complementarias
Se solicita una analitica de sangre y una ecografia tiroidea.
La ecografia: presenta tiroides ligeramente aumentado de tamaño, con las siguientes mediciones:
istmo 5 mm, lóbulo derecho 14x16x44 mm, Lóbulo izquierdo 15x16x41 mm, Con ecogenicidad
muy heterogénea y pseudonodular.
Diagnóstico inicial
Fue diagnosticada de tiroiditis linfocitaria crónica o tiroiditis de Hashimoto, con fase
hipertiroidea inicial y posterior estado hipotiroideo.

ALTERACIONES DE LA HORMONA ESTIMULANTE DEL TIROIDES

FISIOLOGIA
La glándula tiroides tiene forma de mariposa y está localizada justo debajo de la laringe. Está
compuesta por los lóbulos laterales derecho e izquierdo, uno a cada lado de la tráquea,
conectados por un istmo (pasaje angosto) anterior a la tráquea. La tiroides tiene sacos esféricos
microscópicos llamados folículos tiroideos forman la mayor parte de la glándula tiroidea. La
pared de cada folículo consiste principalmente en células llamadas células foli culares, la mayoría
de las cuales se extienden hacia la luz (espacio interno) del folículo. Una membrana basal recubre
cada folículo. Cuando las células foliculares están inactivas, su forma es achatada a escamosa,
pero bajo la influencia de la TSH comienzan a secretar y adoptan una forma entre cuboide y
cilíndrica achatada. Las células foliculares producen 2 hormonas:
 La tiroxina, que también se llama tetrayodotironina o T4 porque contiene 4 átomos de
yodo.
 La tri yodotironina o T3, que contiene 3 átomos de yodo. La T, y la T4 tam bién se
conocen como hormonas tiroideas.
Unas pocas células llamadas células parafoliculares o células C yacen entre los folículos.
Producen la hormona calcitonina, que ayuda a regular la homeostasis del calcio.
Formación, almacenamiento y liberación de hormonas tiroideas
La tiroides es la única glándula endocrina que almacena su producto secretorio en grandes
cantidades, normalmente un abastecimiento para unos 100 días. La síntesis y secreción de T3 y
T4 ocurre de la siguiente manera:
Atrapamiento de yoduro. Las células foliculares tiroideas iones yoduro (1) por transporte activo
desde la sangre hacia el citosol. Como resultado, la glándula tiroides normalmente contiene la
mayor parte del yodo del cuerpo.
Sintesis de tiroglobulina. Mientras las células foliculares están atrapando I, también están
sintetizando tiroglobulina (TGB), una glucoproteína grande producida en el retículo
endoplasmático rugoso, modificada en el complejo de Golgi y almacenada en vesículas
secretoras. Las vesículas luego sufren exocitosis, que libera TGB en la luz del folículo.
Oxidación del yoduro. Algunos de los aminoácidos en la TGB son tirosinas que van a ser
yodadas. Sin embargo, los iones de yoduro cargados negativamente no pueden unirse a la tirosina
hasta que sufran una oxidación (pérdida de electrones) a yodo molecular. 2 12. A medida que los
iones yoduro se oxidan, pasan a través de la membrana hacia la luz del folículo.
Yodación de tirosina. Cuando se forman las moléculas de yodo () reaccionan con las tirosinas
que son parte de la molécula de tirogle bulina. La unión de un átomo de yodo produce
monoyodotirosin (T₁) y la segunda yodación produce diyodotirosina (T2). La TGB con átomos
de yodo incorporados, un material pegajoso que se acu mula y se almacena en la luz del folículo
tiroideo, se llama coloide.
Unión de T₁y T2. Durante el último paso en la síntesis de la hormo na tiroidea, 2 moléculas de
T₂ se unen para formar T4 o una T₁ y una T₂ se unen para formar T3.
Pinocitosis y digestión del coloide. Gotitas de coloide vuelven a entrar en las células foliculares
por pinocitosis y se unen a los liso somas. Enzimas digestivas en los lisosomas degradan la TGB,
libe rando moléculas de T3 y T4.
Secreción de hormonas tiroideas. Como la T3 y la T4 son liposolu bles, difunden a través de la
membrana plasmática hacia el líquido intersticial y luego hacia la sangre. La T4 por lo general se
secreta mayor cantidad que la T3, pero la T3 es varias veces más poten te. Además, luego de que
la T4 entra en una célula del cuerpo, la mayoría de las veces se convierte en T3 por remoción de
un átomo de yodo.
Transporte en la sangre. Más del 99% de la T3 y la T4 se combina con proteínas de transporte
en la sangre, principalmente con la glo bulina de unión a la tiroxina.
FISIOPATOLOGIA
HIPOTIROIDISMO
El hipotiroidismo es una situación clínica condicionada por una disminución de la función de las
hormonas tiroideas. En esta situación los niveles sanguíneos de T4 y T3 libres siempre están
disminuidos.
CLASIFICACIÓN DEL HIPOTIROIDISMO
Según donde radique la lesión (tiroides, hipófisis o hipotálam o) el hipotiroidism o se clasifica en
primario, secundario o terciario.
o Primario. La disminución de T4 y T, libres está provocada por enfermedad del tiroides. La
síntesis hormonal está disminuida, bien por destrucción de la glándula (procesos
autoinmunes, en los que el propio sistema inmune destruye la glándula o tras la
extirpación quirúrgica como tratamiento de procesos tumorales), bien por defectos
congénitos o adquiridos que afectan al desarrollo glandular o a la síntesis de T4 y T3. En
el hipotiroidismo primario, la TSH está siempre aumentada para tratar de compensar la
mala función glandular.
o Secundario. La disminución de T4 y T, libres se debe a un problema hipofisario que
impide la secreción de TSH. Esto sucede, por ejemplo, en procesos tumorales o
infiltrativos de la hipófisis. En este caso, ¡a TSH está disminuida.
o Terciario. La disminución de T4 y T , libres se asocia a un problema en el hipotálamo y se
produce una disminución de la síntesis de TRH. En este caso, también la TSH estará
disminuida.
MANIFESTACIONES CLINICAS DEL HIPOTIROIDISMO
Sus consecuencias más relevantes son:
 Intolerancia al frio . Debido a que baja la capacidad de producción de calor por la
disminución del metabolismo celular.
 Bradicardia (disminución de la frecuenda cardíaca).
 Estreñimiento. Por hipomotilidad intestinal.
 Trastorno de las funciones cognitivas. Baja la capacidad de concentración, atención y
memoria.
  Si el hipertiroidismo se establece durante la infancia, se produce un retraso en el
crecimiento (las hormonas tiroideas estimulan la mineralización del cartílago y son
necesarias para que actúe la hormona de crecimiento). Además, el hipotiroidismo infantil
se asocia con retraso mental dado que las hormonas tiroideas intervienen en el desarrollo
del sistema nervioso central. El hipotiroidismo infantil se denomina cretinismo (talla baja,
retraso mental y síntomas asociados a hipotiroidismo). En la actualidad, a todos los niños
recién nacidos se les realiza un cribado de hipotiroidismo (determinación de TSH) para
prevenir el cretinismo.
HIPERTIROIDISMO
Definimos hipertiroidismo como un exceso de hormona tiroidea circulante debido a un aumento
de la síntesis glandular caracterizado por niveles de T3 y T4 libres aumentados en sangre.
CLASIFICACIÓN DEL HIPERTIROIDISMO.- Hay dos tipos de hipertiroidismo:
o Hipertiroidismo primario. La causa asienta en el tiroides, que sintetiza en exceso
hormoñas tiroideas sin respetar los mecanismos de retrocontrol. Las causas más
frecuentes son: nodulos autónomos, enfermedad de Graves- Basedow o intoxicación por
yodo, como ocurre, por ejemplo, tras la administración de contrastes yodados. La enferm
edad d e Graves- Basedow es el ejem plo clásico. Se trata de un proceso autoinm une en el
que se producen anticuerpos con afinidad para el receptor de la TSH, que inducen
hiperfunción tiroidea. La enfermedad de Graves-Basedow asocia bocio (v. más adelante);
un signo característico es el exoftalmos (propulsión de los globos oculares al exterior) que
se debe a un aumento del tejido conjuntivo de la órbita.
o Hipertiroidismo secundario. Es mucho menos frecuente que el primario. En estos casos el
hipertiroidismo está asociado a un aumento de la síntesis de TSH de origen hipofisario.

MANIFESTACIONES CLÍNICAS DEL HIPERTIROIDISMO

El exceso de hormonas tiroideas se traduce en un aumento del metabolismo energético, con el
consiguiente inaem ento del consimio de oxígeno y de la termogénesis. Las consecuencias son las
siguientes:
 Intolerancia al calor y aumento de la temperatura corporal (hipertermia).
 Pérdida de peso a pesar de un aumento del apetito y la ingesta.
 Debilidad muscular, asociada a hipercatabolismo de las proteínas contráctiles del
músculo.
 Diarrea, por aumento de la actividad peristáltica intestinal.
 Osteoporosis, por aumento del catabolismo óseo.
 Mirada brillante y fija, facies de asombro o pánico (es típica la apertura exagerada de los
párpados).
 Taquicardia y taquiarritmias cardíacas
PRUEBAS DIAGNOSTICAS
ANALITICA DE SANGRE: BIOQUIMICAS:
1. TSH (hormona estimulante de la tiroides) Glucosa
2. T3 Total (triyodotironina) Proteínas totales, Albumina
3. T4 Total (tiroxina) Calcio
4. T4 Libre Colesterol total
5. Anti-TPO (anticuerpos antiperoxisasa)
6. Anti-TG (tiroglobulina)

Las cuales se pueden medir por diferentes metodos:

 RIA (radioinmunoensayo)
 IRMA
 Ensayos inmunometricos
 Quimioluminiscencia

1. TSH (hormona estimulante de la tiroides)

Ensayo por quimioluminiscencia para la medición cuantitativa de la hormona estimulante
de la tiroides (TSH) en suero humano.
Fundamento químico
La determinación de niveles de suero y plasma de TSH es reconocida como un método
sensible en el diagnóstico de hipotiroidismo primario y secundario.
La prueba TSH es un inmunoensayo solido de dos posiciones. Un anticuerpo
monocoideal cubre las superficies de los pocillos micro titulado y otro anticuerpo
monocoideal es etiquetado con peroxidasa caballo-rábado el cual es usado como
rastreador. Las moléculas de TSH presentes en el estándar o en el suero son emparedaras
entre los dos anticuerpos. Siguiendo la formación del complejo anticuerpo recubierto-
antígeno-anticuerpo-enzima. Las etiquetas des adheridas anticuerpo-enzima son
removidas mediante el lavado. La peroxidasa caballo-rábado adherido en los pocillos es
analizado por reacciones quimioluminiscentes. La unidad de luz relacionada (RLU) es
proporcional a la concentración de TSH presente en la muestra.
Procedimiento
1. Asegure el número deseado de micropozos en la placa.
2. Dispensar 100 μl de estándares, muestras y controles a cada pocillo.
3. Dispensar 50 μl de enzima conjugada en cada pocillo.
4. Mezclar suavemente durante 30 segundos. Es muy importante el mezclado completo en
este paso.
5. Incubar a 37°C por 60 minutos.
6. Deseche el contenido de la placa en un contenedor de residuos por aspiración o
decantación, si decanta, golpee la placa contra un papel absorbente.
7. Agregue 350 μl de solución PBS-T a cada pocillo y deseche el contenido. Golpear la
placa sobre un papel absorbente para eliminar todas las gotas de agua residual. Repetir el
procedimiento por 4 veces más hasta completar un total de 5 lavados.
 8. Dispensar 100 μl de solución de substrato A y B. Mezclar suavemente durante 10
segundos.
9. Incubar a temperatura ambiente en la oscuridad durante 5 minutos sin agitar y leer los
valores de RLU de cada pocillo con un Luminómetro.
2. T3 total (triyodotironina)
Ensayo inmunoenzimático por quimioluminiscencia para la medición cuantitativa de
triiodotironina total (T3) en suero humano.
Fundamento químico
A pesar de estar presente en menor concentración, la T3 total tiene una mayor actividad
metabólica, es más rápida y tiene mayor volumen de distribución que la T4 total
circulante. La determinación de T3 total es una herramienta importante para la
monitorización de pacientes hipotiroideos que reciben terapia.
Se utiliza el reactivo T3 CLIA una cierta cantidad de T3 analogo es recubierta en los
pocillos, una cantidad media de suero del paciente y una cantidad consisitente de
anticuerpo anti-T3 conjugada con peroxidasa equina son añadidas a los pocillos. El ANS
es utilado para desplazar el T3 de las proteínas para permitir la medición del total de T3
circulante. Los reactivos son incubados a 37°C durante la incubación el T3 analogo en los
pocillos y el T3 presente en la muestra compiten por adherirse al anticuerpo anti-T3
monoclonal conjugado de peroxidasa equina. Después de 60 minutos a 37°C los pocillos
son lavados 5 veces por el buffer limpiador para remover el anticuerpo anti-T3 conjugado.
La unidad de luz relacionada (RLU) es proporcional a la cantidad de enzima presente e
inversa a la cantidad de T3.
Procedimiento
1. Asegure el número deseado de pozos a utilizar.
2. Agregar 50 μl de los calibradores, muestras y controles en los pocillos apropiados.
3. Agregar 100 μl de enzima conjugada diluida a cada pocillo. Mezclar suavemente
durante 30 segundos.
4. Cubrir la placa con papel adherente e incubar a 37ºC por 60 minutos.
5. Deseche la mezcla vaciando o aspirando el contenido de la placa en un contenedor de
residuos. Enjuagar y vaciar la placa 5 veces con 350 μl de solución de lavado. Secar la
placa golpeándola sobre un papel absorbente para eliminar todas las gotas de solución de
lavado residual.
6. Agregar 100 μl de la mezcla de sustrato previamente preparado. Mezcle Suavemente
durante 10 segundos.
7.- Incubar a temperatura ambiente en completa obscuridad durante 5 minutos sin agitar y
leer los valores de RLU con un Luminómetro.
3. T4 total (tiroxina)
Se aplica el método quimioluminiscencia para la determinación cuantitativa de la tiroxina
total (T4 total) en suero y plasma
Fundamento químico
Inicialmente la T4 presente en la muestra se desplaza de sus proteinas de unión por la
acción del ácido 8- anilino naftaleno sulfónico y compite con un análogo (T4 biotinilado)
por un número limitado de anticuerpos de conejo anti-T4. Los complejos anticuerpo-T4 y
anticuerpo-T4 biotinilado son capturados por anticuerpos ant-IgG de conejo que están
inmovilizados en la superficie de los Inmunotubos IT Después del lavado se suma al
 medio el conjugado de estreptavidina-peroxidase que forma un complejo cuaternario.
Después de la eliminación de los reactivos en exceso, la reacción quimioluminiscente se
desencadena mediante la adición de peróxido y luminol. La cantidad de luz emitida,
medida en unidades relativas de luz (RLU), es inversamente proporcional a la
concentración de T4 Total presente en la muestra, cuyo valor se obtiene a través de una
curva de calibración.
Procedimiento
1. Separar el número de inmunotubos IT necesarios a las pruebas, calibradores y
controles, identificarlos y posicionarlos en la estantería para inmunotubos.
2. Sumar 0,02 mL de muestra, calibradores y controles en la parte inferior de cada tubo.
3. Sumar 0,10 mL de T4 Biotinilado (T4- BIOT)en la parte inferior de cada tubo.
4. Sumar 0,10 mL de Anti-T4 en la parte inferior de cada tubo. Homogeneizar.
5. Incubar 30 minutos en baño María a 37 °C.
6. Retirar los tubos del baño Maria.
7. Sumar 1.0 mL de Solución de Lavado Concentrada (Ref. 908) lista para uso.
8. Descartar el contenido de los tubos por inversión y, con la estantería todavía invertida,
retirar el exceso de líquido, apoyando el borde superior de los tubos sobre una superficie
absorbente (2-3 capas de toallas de papel).
9. Sumar 0,10 mL de Diluyente de Reacción en la parte inferior de cada tubo.
10. Sumar 0,10 mL de Conjugado de Uso directamente al contenido de cada tubo.
Homogeneizar.
11. Incubar 30 minutos en baño Maria a 87°C.
12. Retirar los tubos del baño María.
13. Repetir por seis veces consecutivas los pasos 7 e 8
14. Para obtener los resultados, proceder de la siguiente manera:
o Realizar el prime del luminómetro (consultar las instrucciones de uso del
producto Soluciones de Reveladoras)
o Seleccionar el protocolo de la prueba que tiene los datos de la Master Curve
o Realizar la medición de los calibradores de ajuste, muestras y controles.
4. T4 libre
Ensayo enzimático por quimioluminiscencia El kit de prueba de FT4 CLIA, está
destinado a la determinación cuantitativa para la concentración de suero humano de
tiroxina libre.
Fundamento químico
La T4 Libre presente en la muestra compite con un análogo (T4 biotinilado) por un
número limitado de anticuerpos de conejo anti-74. Los complejos anticuerpo-T4 y
anticuerpo-T4 biotinilado son capturados por anticuerpos anti-IgG de conejo que están
inmovilizados en la superficie de los Inmunotubos Despues del lavado se suma al IT
medio el conjugado de estreptavidina-peroxidase que forma un complejo cuaternario.
Despues de la eliminación de los reactivos en exceso, la reacción quimioluminiscente se
desencadena mediante la adición de peroxido y luminal. La cantidad de luz emitida,
medida en unidades relativas de luz (RLU), es inversamente proporcional a la
concentración de T4 Libre presente en la muestra, cuyo valor se obtiene a través de una
curva de calibración
Procedimiento
 1. Separar el número de inmunotubos (IT) necesarios a las pruebas, calibradores y
controles, identificarlos y posicionarlos en la estanteria para inmunotubos.
2. Sumar 0.02 mL de Muestra, calibradores y controles en la parte
inferior de cada tubo.
3. Sumar 0,10 mL de T4 Biotinilado (T4 BIOT) cada tubo. en la parte inferior de
4. Sumar 0.10 mL de Anti-T4 (ANTI- T4) tubo. Homogeneizar
5. Incubar 30 minutos en baño María a 37 °C.
6. Retirar los tubos del baño Maria.
7. Sumar 10 mL de Solucion de Lavado Concentrada lista para uso
8. Descartar el contenido de los tubos por inversión y con la estantería todavía invertida,
retirar el exceso de líquido, apoyando el borde superior de los tubos sobre una superficie
absorbente (2-3 capas de toallas de papel)
9. Sumar 0,10 ml de Diluyente de Reacción (DIL- REA) en la parte inferior de cada tubo,
5. Anti-TPO (anticuerpos antiperoxisasa)
La determinación Cuantitativa de Anticuerpos de Tiroidina Peroxidasa (TPO) En suero
humano o plasma por Inmunoensayo de Quimioluminiscencia (CLIA). LA medición de
anticuerpos de TPO puede ayudar en el diagnóstico de ciertas enfermedades de la tiroides
tales como la de Hashimoto
Fundamento químico
Los reactivos requeridos para un ensayo CLIA secuencial incluyen, antígeno
inmovilizado, auto – anticuerpo circulante y anticuerpo especifico de enzimas
relacionadas. En este procedimiento la inmovilización ocurre durante el ensayo en la
superficie del pocillo del micro placa a través de la interacción de streptavidin que recubre
los pocillos y el antígeno biotinilatado de TPO añadido. Después de mezclar el antígeno
biotinilatado y el suero conteniendo el auto anticuerpo, la reacción resulta entre el
antígeno y el anticuerpo para formar un complejo inmune.
Simultáneamente, el complejo es depositado en el pocillo debido a la gran afinidad
reactiva del streptavidin y el antígeno biotinilatado. Después del tiempo de incubación, el
pocillo es lavado para separar los componentes no adheridos por aspiración o por
decantación. La enzima de anticuerpo especifica es entonces añadida (anti-h-IgG) a los
micro posos. El conjugado se une al complejo inmune que se ha formado.
La enzima conjugada que se une al complejo inmune en una segunda incubación es
separada del material sin reacción mediante un proceso de lavado. La actividad de la
enzima, determinada por la reacción con el sustrato que genera luz, en esta fracción es
directamente proporcional a la concentración de anticuerpo en el espécimen. Utilizando
varios sueros referenciales diferentes de actividades conocidas de anticuerpo, una curva
de referencia puede ser generada, con la cual la actividad de los anticuerpos de un
desconocido puede ser asumida.
Procedimiento
1. Use sólo el número de pocillos requeridos para cada calibrador y muestra a ensayar.
2. Añadir 100 μl de calibradores, controles o muestras diluidas a cada pocillo.
3. Agitar durante 30 segundos para mezclar completamente el líquido dentro de los pozos.
4. Cubrir la placa e incubar a 37 ° C durante 30 minutos.
5. Deseche el contenido de la microplaca por decantación o aspiración y secar la placa
con papel absorbente.
 6. Añadir 350 μl de solución de lavado a cada pocillo, decantar o aspirar. Repita 4 veces
adicionales para un total de 5 lavados. Al final del lavado, invertir la placa y extraer
cualquier solución de lavado residual con papel absorbente.
7. Añadir 100 μl de Conjugado Enzimático a cada pocillo.
8. Repita el paso 5.
9. Repita el paso 6.
10. Añadir 100 μl de la solución de sustrato mixto a cada pocillo. Coloque la microplaca
en la cámara de detección de un luminómetro durante 5 minutos, luego lea el valor de
RLU de cada pozo.
6. Anti-TG (tiroglobulina)
Fundamento químico
Los reactivos requeridos para un ensayo CLIA secuencial incluyen, antígeno
inmovilizado, auto–anticuerpo circulante y anticuerpo especifico de enzimas relacionadas.
En este procedimiento la inmovilización ocurre durante el ensayo en la superficie del
pocillo del micro placa a través de la interacción de streptavidin que recubre los pocillos y
el antígeno biotinilatado de Tiroglobulina añadido. Después de mezclar el antígeno
biotinilatado y el suero conteniendo el auto–anticuerpo, la reacción resulta entre el
antígeno y el anticuerpo para formar un complejo inmune. Un conservador ha sido
añadido a la solución. Almacenar de 2- 30ºC (ver sección de preparación del Reactivo)
Simultáneamente, el complejo es depositado en el pocillo debido a la gran afinidad
reactiva del streptavidin y el antígeno biotinilatado. Después del tiempo de incubación, el
pocillo es lavado para separar los componentes no adheridos por aspiración o por
decantación. La enzima de anticuerpo especifica es entonces añadida (anti-h-IgG) a los
micro posos. El conjugado se une al complejo inmune que se ha formado. La enzima
conjugada que se une al complejo inmune en una segunda incubación es separada del
material sin reacción mediante un proceso de lavado. La actividad de la enzima,
determinada por la reacción con el sustrato que genera luz, en esta fracción es
directamente proporcional a la concentración de anticuerpo en el espécimen. Utilizando
varios sueros referenciales diferentes de actividades conocidas de anticuerpo, una curva
de referencia puede ser generada, con la cual la actividad de los anticuerpos de un
desconocido puede ser asumida.
Procedimiento
1. Desprenda las tiras de micropozos para cada suero de referencia, control y muestra que
vaya a ser procesada. Regrese las tiras de micropozos sin usar a su bolsa de aluminio y
séllela. Almacénela a 2-8ºC.
2. Pipetee 100 µl del suero de referencia, control o muestra diluido en el micro poso
asignado.
3. Agite la microplaca suavemente por 20-30 segundos para mezclar y cúbrala.
4. Incube por 30 minutos a temperatura 37ºC
5. Deseche los contenidos de la microplaca por decantación o aspiración. Si se decanta
seque la placa con papel absorbente.
6. Agregue 350 µl de Solución Buffer de Lavado (Vea preparación del reactivos) decante,
o aspire. Repita el procedimiento 4 veces más (Total 5 veces). Una lavadora automática
puede ser usada. Siga las instrucciones del fabricante para el uso apropiado.
 7. Agregue 0.100 ml (100 µl) reactivo enzima conjugada anti–Tg rastreador a todos los
pocillos. Siempre añada los reactivos en el mismo orden para minimizar las diferencias de
tiempo en la reacción entre los pocillos.
8. Incube por 30 minutos a temperatura 37ºC.
9. Repita paso 5.
10. Repita paso 6.
11. Agregue 0.100 ml (100 µl) reactivo mixto sustrato A - B anti–Tg
rastreador a todos los pocillos. Siempre añada los reactivos en el
mismo orden para minimizar las diferencias de tiempo en la reacción
entre los pocillos.
12. Incube a temperatura ambiente por 5 minutos en la oscuridad.
13. Lea los RLU`s en cada pocillo con un Luminómetro por lo menos por 0.2 segundos
por micropocillo. Los resultados pueden leerse dentro de 30 minutos después de añadir la
solución sustrato.

GLUCOSA:
También dentro de una patología tiroidea es importante conocer el metabolismo de los
carbohidratos, conocer si los pacientes se encuentran con alguna alteración en el nivel de la
Glucosa de los mismos. Ya que se puede suponer: aumento de la absorción de la glucosa,
aumento de la neoglucogénesis, disminución de la captación hepática de glucosa y disminución
de la captación de glucosa por los tejidos periféricos; y por ende alteración metabólica de la
Glucosa, como también sensibilidad o resistencia a la insulina.
La enzima glucosa oxidasa cataliza la oxidación de glucosa a gluconato y peróxido de hidrogeno.
La concentración de glucosa es proporcional al peróxido de hidrogeno, este puede medirse
reaccionando con otra enzima especifica como la peroxidasa quien genera una reacción
coloreada,
La determinación de glucosa se efectúa mediante el método de Trinder según las siguientes
reacciones:

Donde:
GOD = Glucosa oxidasa
POD = Peroxidasa
MATERIALES:
 Tubos de Statfax 13 x100 mm.
  Micropipeta de 10 uL
 Micropipetas de 1000 uL
 Puntas para micropipetas amarillas y azules
 Gradilla
MUESTRA CLINICA:
Suero o plasma venoso; la muestra debe recolectarse en ayuno, durante ocho horas menos antes
de la prueba.
La muestra debe recolectarse en tubo colector tapón rojo para suero el cual no contiene
anticoagulante, o de color lila el cual contiene EDTA anticoagulante para obtener plasma.
La muestra debe centrifugarse a 3500 rpm durante 5 minutos para separar el suero y plasma.
La glucosa en suero o plasma es estable al menos 3 días a 2-8 ºC.
REACTIVOS
 Tampón fosfato pH 7.5
 Fenol 0,75 mmol/L
 Glucosa oxidasa 15000 U/L
 Peroxidasa 1500 U/L
ESTANDAR
 Sol. Glucosa 100 mg/dl o 5,5 mmol/L
DESARROLLO DEL METODO
1. Pipetear en tubos de ensayo
2. Mezclar en el Vortex e incubar 5 minutos a 37ºC o 10 minutos a temperatura ambiente.
3. Leer la absorbancia (A) a 505 nm.
4. Coloración estable 30 minutos a temperatura ambiente.

PROTEINAS TOTALES
Fundamento quimico
Determinación de Proteínas Totales:
Los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con el ión cúprico, en medio alcalino, para dar
un complejo color violeta con máximo de absorción a 540 nm, cuya intensidad es proporcional a
la concentración de proteínas totales en la muestra.
Determinación de Albúmina:
La albúmina reacciona específicamente -sin separación previa- con la forma aniónica de la
3,3',5,5'-tetrabromo cresolsulfon ftaleína (BCF), en presencia de un exceso de colorante, en
medio tamponado a pH 3,8. El aumento de absorbancia a 625 nm respecto del Blanco de reactivo,
es proporcional a la cantidad de albúmina presente en la muestra.
Procedimiento Proteinas totales

El color de la reacción es estable durante 12 horas por lo que la absorbancia debe ser leída dentro
de ese lapso.
CALCIO
Una prueba de calcio en la sangre se utiliza para verificar su salud general. También se usa para
ayudar a diagnosticar o vigilar muchos tipos de problemas médicos, incluyendo problemas que
afectan los huesos, los riñones, el sistema digestivo, la tiroides y glándulas paratiroides.
El calcio con la cresolftaliena en un medio alcalino forma un complejo violeta, cuya intensidad
de color es directamente proporcional a la cantidad de calcio existente en la muestra.

PROCEDIMIENTO
MUESTRA CLINICA:
 Suero
La muestra debe recolectarse en ayuno.
La muestra debe recolectarse en tubo colector de tapon rojo.
La muestra debe centrifugarse a 3500 rpm durante 5 minutos para separar el suero
El calcio en suero permanece estable durante: 10 dias a 2 – 8 ºC o durante 8 meses a -20ºC.
REACTIVOS
REACTIVO 1: Tampón LISINA 11.1 mmol/L
 Azida de sodio 0,095 %
REACTIVO 2:
Cromógeno 8-hidroxiquinoleina 14 mmol/L
o-cresolftaleina complexona 0,1 mmol
ESTÁNDAR
Solución Calcio 8 mg/dL
EQUIPO
 Stat fax con filtro de 340 nm. Cronometro
 Centrifuga
 Gradilla
PROCEDIMIENTO
1. Pipetear en tubos de ensayo
2. Mezclar y esperar 5 minutos a temperatura ambiente
3. Leer frete a blanco de reactivos
4. Coloración estable 40 minutos.
COLESTEROL TOTAL

FUNDAMENO QUIMICO
La colesterol esterasa hidroliza los esteres de colesterol presentes en la muestra dando
colesterol libre y ácidos grasos, en una posterior oxidación enzimática mediante la
colesterol oxidasa se forma H2O2 y colesterona. El H2O2 se valora por la reacción
Trinder, mediante un cromógeno, fenol y 4 – Aminoantipirina, en presencia de
Peroxidasa, formando una quinonimina cuya coloración, encarnada, es proporcional a
la concentración de colesterol presente en la muestra.

El paciente debe encontrarse en un estado fisiológico regular (sin ejercicio vigoroso) y

bajo su dieta ordinaria del día anterior a la prueba.
Suero es la muestra que se usara, debe recolectarse en ayuno total excepto agua,
lapso de 12 a 14 horas antes de la prueba, debe recolectarse en tubos tapón rojo el
cual no contiene ningún anticoagulante, centrifugar a 3500 rpm para separar el suero.
 REACTIVOS
 Tampon fosfato pH 6,9 90 mmol/L
 Fenol 26 mmol/L
 Peroxidasa SKU/L
 Colesterol esterasa 150 KU/L
 Colesterol oxidasa 100 KU/L
 4-aminoantipirina 0,4 mmol/L
MATERIAL
 Tubos Stat fax
 Micropipetas de 1000 uL y de 10 uL
 Puntas para micropipetas azules y amarillas
 Gradilla
PROCEDIMIENTO
1. Pipetear en tubos de ensayo; REACTIVO: 1 ml en tubo blanco, 1 ml en tubo
estándar, 1 ml en tubo de muestra, REACTIVO ESTANDAR 10 uL en tubo
estándar y MUESTRA 10 uL en tubo de muestra.
2. Mezclar e incubar 5 minutos a 37ªC o 10 minutos a temperatura ambiente
3. Ajustar el aparato a cero con el blanco de reactivos
4. Leer a 505 nm (500-550) la densidad óptica del estándar y de la muestra
5. La coloración será estable durante 60 min.

RESULTADOS
Resultados Valores Normales Interpretacion
Un nivel de TSH elevado indica que la glándula
tiroides está fallando debido a un problema que
afecta directamente a la glándula (hipotiroidismo
primario). Cuando el TSH está bajo,
TSH 0,03 uU/ml 0,35 – 4,47uU/ml generalmente indica que la persona tiene una
glándula hiperactiva que está produciendo
demasiada hormona tiroidea (hipertiroidismo).
Las pruebas de T3 suelen ser útiles para
diagnosticar hipertiroidismo o para determinar la
severidad del hipertiroidismo. Los pacientes
T3 Total 4,99 Pg/mg 0,79 – 1, 49 ng/dl hipertiroideos tendrán niveles elevados de T3.
En algunos individuos con TSH baja, sólo la T3
está elevada, y la T4 libre o FTI estarán
normales.
T4 Total 1,16 ng/dl 0,97 – 1,67 ng/dl T4 unida a proteínas, lo que previene que la T4
entre en los tejidos que necesitan hormona
 tiroidea
T4 libre, la cual entra los tejidos apropiados para
ejercer sus funciones. La fracción de T4 libre es
la más importante para determinar cómo está
funcionando la tiroides, y las pruebas que miden
T4 Libre 0,98 y 1,63 ng/dL esta fracción se llaman T4 libre (FT4).
Las personas con hipertiroidismo tendrán FT4
elevados, mientras que los pacientes con
hipotiroidismo tendrán un nivel bajo de FT4.
GLUCOSA 98 mg/dl SUERO O
PLASMA: 75 –
115 mg/dL
PROTEINAS 7.6 mg/dl 6-8 mg/dl ng/dl
TOTALES
ALBUMINA 3,5 a 4,8 g/dl
En el hiperparatiroidismo primario, el
agrandamiento de una o más de las glándulas
CALCIO 10,1 mg/dl 8,7 – 10,7 mg/dl paratiroides provoca una superproducción de la
hormona paratiroidea. Esto eleva los niveles de
calcio en la sangre
COLESTERO 147 mg/dl 170 mg/dl
L TOTAL

o Un nivel de TSH alto con T4L baja o normal significa, en general, que la glándula
tiroidea no funciona bien, dando lugar a un hipotiroidismo primario.
o Un nivel de TSH bajo con una T4L normal o alta significa en general que se produce
demasiada hormona tiroidea, hipertiroidismo.
o Para valorar si se trata de una enfermedad autoinmune, debida a una reacción exagerada
del propio sistema inmune contra el tiroides, se determinan anticuerpos “antitiroideos”,
que el cuerpo fabrica porque no reconoce el tiroides como una parte propia del organismo
debido a una infección vírica o de forma espontánea. Estos anticuerpos se llaman
anticuerpos antiperoxidasa (antiTPO), antitiroglobulina (antiTG)
Bibliografia
Alavez E, Rodríguez J y Marrero M. Actulidades en endocrinologìa Instituto Nacional de
Endocrinología-La Habana, Cuba. V Congreso CENTIS (centro de isótopos); 2000.
Ecobar I, Kattah W. Trastornos de la función tiroidea. En: Chalem F, Escandón J, Campos J y
Esguerra R. Medicina Interna 1997. Ediciones Bogotá: Fundación Instituto de Reumatología e
Inmunología 1997; 1665 - 97.
Juan Pastrana Delgado, y Gonzalo Garcia De Casasola Sanchez Fisiopatología y patología
general básicas para ciencias de la salud
Tortora, Derrickson Principios de anatomia y fisiologia
https://share.wiener-lab.com/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/proti2_sp.pdf
https://www.thyroid.org/wp-content/uploads/patients/brochures/espanol/
pruebas_funcion_tiroidea.pdf
https://www.medigraphic.com/pdfs/medlab/myl-2020/myl202b.pdf
https://www.zeusscientific.com/content/resources/%2528SM%25292Z5051G%2520ELISA
%2520TPO%2520IgG%2520Spanish%2520Package%2520Insert.pdf