Tema 21 Mme Practica 7 Extraccion y Reconocimiento Colesterol

IES.
“ JOSÉ CARLOS MARIÁTEGUI”

SISTEMA DE GEST IÓN DE CALIDAD ISO-9001
MANUAL DE PRACTICAS DE Versión : 01
PROGRAMA DE ESTUDIO BIOQUIMICA CLINICA
LABORATORIO CLINICO Hoja:
4.1.-EXPERIMENTO 1:
4.-PARTE EXPERIMENTAL
EXTRACCION DE COLESTEROL DE LA YEMA DE HUEVO
a. Romper un huevo con precaucion y separ la clara de la yema

,teniendo cuidado de no romper esta.
b. Decantar la clara y tomar 1 gramo de la yema, en un vaso de 50 ml .
c. Añadir sobre la yema 5 ml de acetona fria y agitar con la varilla
de vidrio, hasta obteenr una suspension homogena.
d. Verter el contenido en un tubo de centrifuga y centrifugar a 2000
rpm durante 10 minutos.Concluida la centrifugacion
e. Retirar el sobrenadante con pipeta .Guardar el sobrenadante ,al que
llamaremos extracto acetonico A,
f. Reextraer el sedimento con otros 5 ml de acetona ,agitando con
varilla repitiendo la centrifugacion.El nuevo extracto obtenido
se llama axtracto acetonico B
RESULTADOS : graficar (dibujar) el procedimiento.
Mg. Químico Farmacéutico: Mariela Maldonado Escobedo

IES. “ JOSÉ CARLOS MARIÁTEGUI”
4.1.-EXPERIMENTO 1:
4.2.-EXPERIMENTO 2:( no se realizara de manera practica por no
contar con reactivos ) Buscar informacion y complete los resultados
DETERMINACION CUALITATIVA DE COLESTEROL (Reacción
de Lieberman - Buchard)
a. Tomar 2 tubos de prueba y rotular como tubo 1 y tubo 2
b. Colocar en el tubo 1 extracto acetonico A 2 ml y en el tubo ( nro 2 )
2ml de extracto acetonico B
c. Anadir 10 gotas de anhidrido acetico y dos gotas de acido sulfurico
d. Mezclar y observar los cambios de color que se dan.
e. Que tubo presenta una coloracion mas intensa
f. Buscar informacion y complete los resultados

4.3.-EXPERIMENTO 3:
DETERMIANCION CUANTITATIVA COLESTEROL TOTAL
MÉTODO ENZIMÁTICO (GOD-PAD)
Fundamento Del Método
El colesterol esterasa hidroliza los ésteres de colesterol presentes en la
muestra dando colesterol libre y ácidos grasos, en una posterior oxidación
enzimática mediante la colesterol oxidasa se forma H2O2 y colesterona. El
H2O2 se valora por la reacción Trinder, mediante un cromógeno, fenol y 4-
Aminoantipirina, en presencia de Peroxidasa, formando una quinonimina
cuya coloración, encarnada,
es proporcional a la concentración de colesterol presente en la muestra.
Procedimiento:
a. Recolctar La muestra en tubo recolector al vacío de tapón rojo el
cual no contiene anticoagulante.
b. La muestra debe centrifugarse a 3500 rpm durante 10 minutos
para separar el suero.
c. obtener el suero y realizar lo que nos indica en el siguiente cuadro
d. En tres tubos o cubetas espectrofotométricas marcadas

B (Blanco), E (Estándar) y M (Muestra), colocar:
BLANCO ESTANDAR Muestra
ESTANDAR DE 10UL
TRABAJO
SUERO 10 UL
REACTIVO 1ML 1ML 1ML
e.-Mezclar cuidadosamente e Incubar 5 minutos en baño de agua a 37oC o

10 minutos a temperatura ambiente
f.-Ajustar el espectofometro a cero con el blanco de los reactivos
g.-Leer a 500 nn en el espectofotometro el estándar y de la muestra antes de
60 minutos. La coloración será estable durante 60min
Calcula la concentración de Colesterol total de cada una de las muestras de
suero del siguiente modo.
FORMULA:
Concentracion del estándar de colesetrol es un valor constante viene en el

kit de reactivos en este caso es 200 mg/dl

Calculo de el factor de calibracion :

Factor de calibracion fc%:

Calcular la concentarcion de colesterol de la muestar problema:
5.-CUESTIONARIO:
1.-En el experimento 4.1 donde ha encontrado ud. Mas colesterol en la
fraccion A1 o en la fraccion A2.¿ Porque ?
2.-¿cuál es el órgano que fabrica el 80% del colesterol existente en la

sangre?
El hígado fabrica el 80% del colesterol que hay en el organismo, mientras que
el 20%-25% restante se obtiene a través de la ingesta de alimentos de origen
animal, ricos en grasas saturadas.
3.-¿Por qué es importante hacerse un examen del colesterol en la sangre?
La prueba de colesterol es un sencillo análisis de sangre que puede prevenir

muchas enfermedades cardiovasculares. Por eso es importante hacérsela con

regularidad y si sale el colesterol alto tomar medidas rápidamente. Una
alimentación sana, basada en la dieta mediterránea, y un poco de ejercicio
ayudarán a controlarlo.
4.-¿Cuáles son los valores de referencia del colesterol total?
El colesterol total es la suma del HDL, LDL y del VLDL. Tener el colesterol total alto
representa un riesgo elevado de enfermedades cardiovasculares y, por esto, sus
valores no deben estar por encima de los 190 mg/dl.
5.-¿Cuáles son las funciones del colesterol en el organismo?

El colesterol es una sustancia cerosa y parecida a la grasa que se encuentra en
todas las células de su cuerpo. Su cuerpo necesita algo de colesterol para producir
hormonas, vitamina D y sustancias que le ayuden a digerir los alimentos. Su
cuerpo produce todo el colesterol que necesita.
6.-¿Por qué la muestra debe tomar en ayunas y en que colores de

tubo? Explica
El ayuno de ocho horas es importante para medir los niveles de ciertas
sustancias sin las interferencias que provoca la ingesta de alimentos. La
glucosa o los lípidos (colesterol o triglicéridos) son algunos de los
parámetros que pueden variar después de comer. Algunos parámetros de la
analítica (como el colesterol o la glucosa, las transaminasas, cambian
después de ingerir alimentos
6.-CONCLUSIONES


7.-BIBLIOGRAFIA

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EXTRACCION DE COLESTEROL DE LA YEMA DE HUEVO

a. Romper un huevo con precaucion y separ la clara de la yema

Mg. Químico Farmacéutico: Mariela Maldonado Escobedo

RESULTADOS : graficar (dibujar) el procedimiento.

Mg. Químico Farmacéutico: Mariela Maldonado Escobedo

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e.-Mezclar cuidadosamente e Incubar 5 minutos en baño de agua a 37oC o

Concentracion del estándar de colesetrol es un valor constante viene en el

RESULTADOS : graficar (dibujar) el procedimiento.

Mg. Químico Farmacéutico: Mariela Maldonado Escobedo

Mg. Químico Farmacéutico: Mariela Maldonado Escobedo

Factor de calibracion fc%:

2.-¿cuál es el órgano que fabrica el 80% del colesterol existente en la

La prueba de colesterol es un sencillo análisis de sangre que puede prevenir

Mg. Químico Farmacéutico: Mariela Maldonado Escobedo

4.-¿Cuáles son los valores de referencia del colesterol total?

5.-¿Cuáles son las funciones del colesterol en el organismo?

6.-¿Por qué la muestra debe tomar en ayunas y en que colores de

Mg. Químico Farmacéutico: Mariela Maldonado Escobedo

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