Análisis forense: identificación genética de

individuos mediante RFLP

Nombre: Andrea Paola Reyes Jaime

Fundamento:
Las pruebas de identidad genética, a menudo llamadas huella dactilar genética o identificación mediante pruebas
de ADN (DNA) se basan en la diversidad genética de los individuos, es decir, que unas personas nos
diferenciamos de otras en la secuencia de nucleótidos presente en diversas regiones del genoma, lo que se
denomina polimorfismo genético.

Una de las formas conceptualmente más simples de realizar un ensayo de este tipo (aunque no es la más usada en
la actualidad) es aprovechar un polimorfismo RFLP, es decir, que afecta a los puntos de corte por una o varias enzimas
de restricción. La restricción va seguida de un análisis de los fragmentos de DNA mediante electroforesis.
Como material de partida disponemos de muestras de DNA (virtuales) correspondientes a la prueba del delito (por
tanto, DNA del delincuente desconocido) y a varios sospechosos

Cómo comenzar:
El laboratorio virtual funciona dentro de una página web, por lo que debes comenzar abriendo el navegador de
internet en tu ordenador o tableta. Cualquier navegador moderno debería funcionar, siempre que tenga activado
JavaScript (se recomienda Firefox o Chrome).
Visita la página de Cibertorio en http://biomodel.uah.es/lab/cibertorio/

Ensayo:
identificación genética de individuos mediante RFLP

Objetivo:
Empleando una o varias enzimas de restricción, realizar la identificación del delincuente, es decir, la
comparación de los sospechosos con la prueba del delito.
Materiales virtuales:

Reactivos virtuales:

• Enzimas de restricción (deben comprarse en CygnusLabTM, como se explica más adelante)

• Muestras para análisis forense (también comprado en CygnusLabTM), que contiene las siguientes muestras de
DNA:
• DNA extraído de la prueba de un delito.
• Cinco muestras de DNA de personas sospechosas de la comisión del delito (designadas S1 a S5).
 • Marcador de masa molecular de DNA Ladder2™ (de CygnusLabTM)
• Tampón universal de restricción 10x (de CygnusLabTM)
• Agua
• Puntas de pipeta amarillas, capacidad de 1 a 100 L
• Agarosa
• Tampón de electroforesis TBE (Tris/Borato/EDTA)
• Bromuro de etidio
• Colorante de carga de muestras en el gel (contiene azul de bromofenol, xileno-cianol y glicerol)

Instrumentación virtual:

• Micropipeta variable hasta 100 L

• Incubador con regulación de temperatura CygnusLab TempeMaticTM
• Cubeta de electroforesis horizontal en agarosa CygnusLab GelMaticTMPlus
• Fuente de corriente continua CygnusLab 1000ZXTM (de 10 a 1000 V)
• Transiluminador ultravioleta (acoplado a la cubeta)
• Pantalla y gafas de seguridad protectoras contra UV

Procedimiento:
Comienza pulsando en el botón “Iniciar Cibertorio”. Tras unos segundos, aparecerá un aviso requiriendo que se
haga un pedido de muestras y enzimas; acéptalo.
1) Investiga la página del Catálogo en línea.
2) Pulsa el botón “Realizar un pedido”.
3) Selecciona las “Muestras para análisis forense” y las 4 enzimas que desees ensayar.
4) Al pie de página necesitarás proporcionar unos datos. (Esto es una simulación de una situación real, no es
importante lo que escribas en nombre y apellido pero sí es importante que la contraseña corresponda al centro).
5) Pulsa el botón “Enviar el pedido” y luego “Confirmar el pedido”. Espera a que se actualice la
pantalla y aparezca el laboratorio simulado (tubos, pipeta, etc.).
6) Prepara mezclas de reacción para ensayar la restricción de las 6 muestras de DNA (prueba del delito y 5
sospechosos) con una o varias de las cuatro enzimas elegidas. Para ello, debes poner en cada tubo 10
L de uno de los tipos de DNA, 3 L de tampón 10x, 1 L de cada una de las enzimas de restricción que
quieras ensayar y agua hasta completar 30 L de volumen total. Incluye también, como control, tubos
con cada muestra de DNA sin enzimas, diluida en las mismas condiciones (es decir, tampón y agua).
1) Nota: cada una de las enzimas podrá cortar o no el DNA y hacerlo de modo diferente o no para cada punto polmórfico.
El resultado, pues, dependerá de cuáles escojas entre las 78 enzimas disponibles en el catálogo. Conviene que
hagas previamente una tabla en la que indiques los reactivos y los volúmenes que debes pipetear en cada
t Pon en marcha la reacción de restricción pulsando en el botón “incubar” (está en la parte central inferior,
bajo el cronómetro). Transcurrido el tiempo virtual requerido, se habrá completado la reacción. Dependiendo
de la configuración del laboratorio, puede que aparezca un mensaje que te informa de lo que se ha añadido en cada
tubo; verifica que coincide con lo que pretendías.
2) En el menú principal de Cibertorio, selecciona el módulo “Laboratorio de
electroforesis”. Selecciona en la cubeta el gel de agarosa. Pulsa el botón
“autocarga”, que hará que las 12 muestras preparadas en la digestión anterior
se transfieran a los 12 primeros pocillos del gel virtual; en el pocillo nº 13 se
carga automáticamente una mezcla de patrones de tamaño (“escalera de DNA”
Ladder2™).
7) Ajusta en la fuente el voltaje a 200 voltios y el tiempo a 2 horas virtuales. Conecta la corriente para
comenzar la electroforesis. Mientras progresa, puedes encender la luz UV (asegúrate de tener puestas tus
gafas o careta virtuales de protección) y apagar las luces de la habitación virtual para ver cómo va avanzando
el DNA y separándose las bandas.
8) Una vez completada la electroforesis, dibuja un esquema de la posición de las bandas (puedes capturar una
imagen usando la cámara digital incluida en la cubeta) e interpreta los resultados obtenidos:
▪ ¿Cuál de los sospechosos es, con cierta probabilidad, el delincuente?

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 Tabla 1: Un ejemplo de diseño del experimento
tubo nº 1 2 3 4 5 6
tipo de muestra Delito S1 S2 S3 S4 S5
vol. de muestra 10 L 10 L 10 L 10 L 10 L 10 L
vol. de tampón 3 L 3 L 3 L 3 L 3 L 3 L
vol. de enzima 1L 1 L 1 L 1 L 1 L 1 L
vol. de agua 16 L 16 L 16 L 16 L 16 L 16 L

tubo nº 7 8 9 10 11 12
tipo de muestra Delito S1 S2 S3 S4 S5
vol. de muestra 10 L 10 L 10 L 10 L 10 L 10 L
vol. de tampón 3 L 3 L 3 L 3 L 3 L 3 L
vol. de enzima 0 0 0 0 0 0
vol. de agua 17 L 17 L 17 L 17 L 17 L 17 L

El experimento puede ampliarse explorando más condiciones, tales como éstas:

▪ Observar el efecto de añadir cantidades diferentes de DNA en los tubos.
R: Al usar más cantidad de ADN no afecta en sí los resultados, dado que el cambio se ve en las enzimas
▪ Ensayar las enzimas individualmente y en combinación (varias enzimas en un mismo tubo)
▪ Comparar el resultado obtenido con distintas enzimas, comprando otro grupo de 4 enzimas diferentes.
(Téngase en cuenta que en cada pedido la combinación de sospechosos cambia; el DNA de la prueba
del delito es siempre el mismo)
R: Primero se usó las enzimas Bal I, AgeI, Pvu I y XmaIII, las cuales ni combinadas ni solas cortaron el
ADN, luego se usaron Sph I, Avr II,Taq I y Bsp
LU11 I, los cuales si cortaeon el ADN estando
combinados

▪ ¿Cuál de los sospechosos es, con cierta

probabilidad, el delincuente?
Tomando en cuenta el resultado obtenido de la
electroforesis, el sospechoso número 4 es el
que tiene mayores problabilidades de ser él
asesino.

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 Tabla 1: Un ejemplo de diseño del experimento
tubo nº 1 2 3 4 5 6
tipo de muestra Delito S1 S2 S3 S4 S5
vol. de muestra 10 L 10 L 10 L 10 L 10 L 10 L
vol. de tampón 3 L 3 L 3 L 3 L 3 L 3 L
vol. de enzima 4L 4 L 4 L 4 L 4 L 4 L
vol. de agua 13 L 13 L 13 L 13 L 13 L 13 L

7 8 9 10 11 12
tubo nº
tipo de muestra Delito S1 S2 S3 S4 S5

vol. de muestra 10 L 10 L 10 L 10 L 10 L 10 L

vol. de tampón 3 L 3 L 3 L 3 L 3 L 3 L

vol. de enzima 0 0 0 0 0 0

vol. de agua 17 L 17 L 17 L 17 L 17 L 17 L