Pruebas IMVIC

El IMVIC es una prueba utilizada en microbiología para la identificación bacterias. Se compone de

cuatro pruebas: Indol, Rojo de metilo, Voges-Proskauer y Citrato. El resultado de este test se
expresa mediante símbolos de positivo o negativo (+ o -) según el resultado de cada prueba,
siguiendo siempre el orden establecido por las iniciales del método. Para E.coli es (+,+,-,-)

 Indol (caldo triptonado)

Sustratos: Triptófano.
Enzimas: Triptofanasa.
Producto: Indol.
Revelador: p-Dimetilaminobenzaldehido (DMABA).

El indol es un compuesto que se genera mediante la desaminación reductiva del triptófano y esta

reacción es llevada a cabo por algunas bacterias que poseen las enzimas denominadas en su
conjunto triptofanasas. Para detectar la producción de indol se utiliza el medio Caldo triptófano y la
lectura de la prueba se realiza con el reactivo de Kovacs (alcohol isoamilo, p-
dimetilaminobenzaldehído y ácido clorhídrico concentrado) con el que el indol producido reacciona
generando una coloración rosa intensa.

 Rojo de metilo/ Voges Proskauer

Caldo RM/VP
Sustrato: Glucosa.
Vías: Fermentación ácida o neutra.
Producto: Acido orgánicos o acetoina.
Reveladores: Solución de Rojo de Metilo,
Alfa Naftol y KOH 40%.

Fermentación acido mixta: Los productos finales son ácidos orgánicos que provocan un descenso
brusco del pH inicial del medio (viraje del indicador de amarillo pH por encima de 5,1) y rojo (pH por
debajo de 4,4). Estos microorganismos por cada 4 moléculas de piruvato formadas, reducen dos a
ácido láctico y dos las metabolizan para formar ácido acético y fórmico; parte del acetato pasa a
etanol y parte del fórmico a CO2 y H2 en cantidades iguales.

Fermentación butilenglicólica: en esta, parte del piruvato se metaboliza produciendo cantidades

menores de ácido láctico, fórmico y acético, la mayor parte del piruvato se condensa formando
acetilmetilcarbinol, que es reducido a 2,3-butilenglicol, productos que son neutros. La acetoína es
un producto intermedio de la fermentación butilén-glicólica, que conduce a la formación de 2, 3
butanodiol.

Para determinar la presencia de los productos neutros (prueba de Voges-Proskauer): Se agrega un

poco de a-naftol al 5% en etanol (medio adquiere aspecto lechoso), luego se le añade (KOH 40%)
que desaparece el aspecto lechoso, se agita fuertemente. (Prueba positiva color rosado - violaceo
en la parte superior del tubo; Prueba negativa no tiene coloración).

 Citrato
Medio de Citrato de Simmons
Sustrato: Citrato de sodio.
Vía: Varias dependientes del pH del medio.
Producto: Acetato/formato en condiciones alcalinas y Acetato, CO 2, lactato/ Acetoína y CO2 en
condiciones acidas.
Indicador: Azul de bromotimol.

Un microorganismo que puede utilizar el citrato como única fuente de carbono también utiliza las
sales de amonio del medio como única fuente de nitrógeno. La extracción de nitrógeno de las sales
de amonio producen amoniaco y se alcaliniza el medio virando el indicador al alcalino.
Sirve para determinar si un microorganismo puede crecer utilizando citrato como única fuente de
carbono debido a la síntesis de la enzima citrato permeasa la cual permite la introducción del
citrato al interior de la célula, una vez dentro, el citrato es incorporado al ciclo de los ácidos
tricarboxilicos o ciclo de Krebs. Se hace crecer al microorganismo en estudio en caldo citrato. Un
resultado positivo es cuando se observa turbidez en el tubo, debido al crecimiento bacteriano. Un
resultado negativo es cuando no se observa crecimiento.
  Catalasa

La catalasa en una enzima que la podemos encontrar en muchos organismos vivos, y  cataliza la
reacción de descomposición del peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno.

El peróxido de hidrógeno es uno de los productos del metabolismo celular en diversos organismos,
pero dada su potencial toxicidad, es transformado enseguida por la enzima catalasa.

Bacterias que viven en ambientes aerobios requieren de catalasa para convertir el peróxido de
hidrógeno en agua y oxígeno molecular. Es positiva la prueba cuando se ponen en contacto una
bacteria con actividad catalasa con H 2O2 3% y se producen burbujas de oxígeno.
Se emplea para diferenciar el género Staphylococcus (catalasa positivo) del género Streptococcus
(catalasa negativo).

 Medio SIM (Sulfhídrico Indol

Movilidad)
Medio semisólido
Sustratos: Tiosulfato o grupos –SH de la
cisteína y triptófano.
Enzimas: Tiosulfato reductasa, cisteína
desulfurilasa y triptofanasa.
Producto: H2S e Indol.
Revelador: Sales de Fe2+ y p
Dimetilaminobenzaldehido (DMABA).

En presencia de tiosulfato en el medio o la

degradación de proteínas liberando aminoácidos azufrados, algunos microorganismos forman H 2S
gaseoso por medio de las enzimas tiosulfato reductasa y cisteína desulfurilasa. El gas incoloro H 2S
reacciona con el citrato de amonio férrico para producir un precipitado negro insoluble de sulfuro
ferroso metálico.

Las enzimas triptofanasas oxidan el

triptófano para formar tres metabolitos:
indol, metil indol y ácido indolacetico. Los
reactivos de Erhlich o Kovacs contienen
DMABA que reacciona con el indol
producido formado un compuesto
quinonico color violeta, que se observa por
la aparición de un anillo en la superficie del
medio.

El medio de cultivo tiene consistencia

semisólida por lo que la movilidad se observa
por el crecimiento del
microorganismo en todo el tubo, más allá de la zona de inoculación (picadura). Los
microorganismos inmóviles solo crecerán en la zona inoculada.