UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLAREAL

FACULTAD DE OCEANOGRAFÍA, PESQUERÍA Y CIENCIAS ALIMENTARIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA ALIMENTARIA

ASIGNATURA:

MICROBIOLOGÍA

TEMA:

BIOQUÍMICA DE LOS MICROORGANISMOS

ALUMNOS:

Alarcón Abad, Jorge Rolando. Panez Robles, Roxana Isabel Ramos Rodas, Eva. Yon Yong, Alicia Sugen. Nilda Quispe.

DOCENTE:

AÑO DE ESTUDIO:

3ro Año

Miraflores, 03 de Agosto del 2009

Bioquímica de los Microorganismos - Microbiología

I. Objetivos: y Aprender a identificar a las bacterias de acuerdo a las reacciones metabólicas que tienen frente a los diferentes reactivos y medios de cultivo (uso de las pruebas bioquímicas para la identificación de microorganismos). y Entender los principios bioquímicos de las pruebas. II. Fundamento: y Metabolismo de los hidratos de carbono: Producción de ácido y/o gas durante el crecimiento fermentativo con azúcares o alcoholes azucarados. La utilización de determinados azúcares son la base para la diferenciación bioquímica de los microorganismos quienes utilizan en mayor facilidad los carbohidratos de menor peso molecular siendo los más utilizados los monosacáridos. y Reacción en el Agar Triple Azúcar Hierro (Producción de Sulfuro de Hidrógeno H2S): El H2S por rotura de los aminoácidos azufrados o reducción del Tiosulfato. El H2S se detecta en un medio rico en hierro a partir de la formación del sulfito ferroso negro. Es utilizado en Enterobacterias y ayuda a la identificación de la Salmonella, Arizona, Edwarsiella y Proteus. y Prueba de la Oxidasa: Hay bacterias que contiene las enzimas Citocromo C Oxidasas que reaccionan con el reactivo tetrametil-pfenilendiamina oxidándolo (aceptor de electrones artificial). y Prueba de la Catalasa : Las ensimas de muchas bacterias son capaces de descomponer el peróxido de hidrógeno (H 2O2 - agente tóxico) desdoblándolo en H 2O y O2. y Reducción de Nitratos: El nitrato como aceptor de electrones alternativo, reducido a NO 2- o N2. y Hidrólisis de la Urea: Determinar si la bacteria degrada la Urea a partir de las enzimas hidrolíticas ureasas. La urea (H2N CO NH2) se escinde en 2 NH3 + CO2. Las sustancia producto de la hidrólisis va alcalinizar el medio haciendo virar el reactivo indicador Rojo de Fenol a un Rojo Grosella. y Prueba del Indol: Mediante esta prueba se detecta la liberación de indol (molécula heterocíclica) en un cultivo bacteriano. Dicha liberación se debe a la degradación del aminoácido triptófano. y Prueba del Rojo de Metilo : Las bacterias fermentadoras mixtas de ácidos producen suficiente ácido para disminuir el pH por debajo de 4.3

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Prueba de la Catalasa: La base de esta prueba es demostrar la presencia de la enzima catalasa. Prueba química para acetoína utilizando -naftol. y Descarboxilación de la Lisina : La descarboxilación de la libera una amina y CO2. Medio enriquecido de aminoácidos. siendo su forma normal conocida como triplete de oxígeno. III. y Prueba del Citrato de Simmons: Utilizada para determinar que microorganismos son capaces de utilizar el citrato como única fuente de carbono produciendo una alcalinización del medio. es un proceso de oxidación por el cual el nitrato proporciona oxígeno para ser usado como aceptor de electrones. sin embargo una forma habitual del oxígeno tóxico se denomina singlete de oxígeno. la que impide el proceso de respiración. y Hidrólisis del Almidón: El almidón es un carbohidrato complejo que es degradado por microorganismos que contienen amilasas. esta es una forma de mayor energía en el que la capa más externa de electrones que rodean al núcleo se hacen altamente reactivos y son capaces de 3 . éstas son de gas nitrógeno. La fuente de nitrógeno la constituye el fosfato de amonio. Esta prueba ayuda en la determinación de Enterobacterias gran positivas. El nitrito presente en el medio puede detectarse con el reactivo de Griess A y Griess B Britania. dando un compuesto diazoico coloreado. Si se observan burbujas en el medio. Marco teórico: Prueba de reducción de nitratos a nitritos: La prueba se basa en basa en la reducción del nitrato a nitrito o gas nitrógeno por medio de la en zima nitrato reductasa. ya que el nitrito intermediario inhibe las decarboxilaciones. El púrpura de bromocresol como indicador de pH vira a púrpura (si actúa una enzima).Microbiología y Prueba de Voges-Proskauer: Determinar la capacidad de algunos microorganismos de producir acetoína a partir de la fermentación de azúcares. y Prueba del ácido Fenil Pirúvico -APP (Prueba de la Fenilalaníndesaminasa) : La desaminación producida por la actividad metabólica de ciertos microorganismos produce ácido fenílpirúvico que se detecta en una prueba colorimétrica. Esta enzima es similar a la estructura de la hemoglobina. y Prueba de la Tolerancia al Cianu ro de Potasio: Determinar la capacidad que tiene algunos microorganismos de desarrollarse en un medio que se ha agregado un veneno enzimático KCN. La catalasa es una enzima que descompone al peróxido de hidrógeno (forma tóxica del oxigeno) en oxígeno y agua. y Hidrólisis de la Gelatina: Muchas enzimas hidrolasas hidrolizan la gelatina y destruyen el gel . Debido a que el oxígeno es un oxidante poderoso y un excelente aceptor de electrones para la respiración.Bioquímica de los Microorganismos .

Para la detección del indol se usa el reactivo de Kovacs que se puede preparar con los siguientes ingredientes: Ingredientes Alcohol amílico o isoamílico (puede sustituirse por ácido butílic o). Los productos finales de la r eacción son el indol. Dicha liberación se debe a la degradación del aminoácido triptófano mediante el enzima triptofanasa (desaminación reductiva). durante el cual se remueve el grupo amino (NH2) de la molécula de triptófano. Con tantas formas tóxicas del oxígeno no es de extrañar que los microorganismos hayan desarrollado formas enzimáticas capaces de destruirlos. esta última forma es por la reacción de las peroxidasas. Como coenzima de la reacción se requiere al fosfato de piridoxal . 1998) Resultados positivos y negativos de la prueba del Indol (fuente: www. peróxido de hidrógeno (H 2O2) y el radical hidroxilo (HO2). 50 ml. amoníaco (NH3) y energía.microbology. Constitución del Reactivo de Kovacs (fuente: Brock ³Biología de los Microorganismos. Prueba del Indol: Mediante esta prueba se detecta la liberación de indol (molécula heterocíclica. Otras formas altamente tóxicas de oxígeno incluyen el anión superóxido (O2-). con estructura bicíclica que consiste en un anillo de seis miembros benceno unido a otro de cinco miembros -pirrol) en un cultivo bacteriano. Entre estas formas enzimáticas está la catalasa. Excluyendo al género Streptococcus y algunos otros la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas tienen catalasa.Microbiología llevar a cabo una serie de oxidaciones indeseables. la peroxidasa y la superóxido dismutasa . p-dimetilamino-benzaldehído HCl (concentrado) Cantidad 150 ml.Bioquímica de los Microorganismos . El singlete de oxígeno se produce tanto fotoquímicamente como bioquímicam ente. 10 g. dentro de la célula. Las triptofanasas catalizan la reacción de desaminación.com) 4 . ácido pirúvico.

coli y los productos finales son ácidos orgánicos (ácidos fórmico. Ésta puede ser de dos tipos: Fermentación ácido mixta: La realizan las bacterias del grupo de E. y y Para la realización de estas dos pruebas se cultiva el microorganismo en caldo RMVP (Red Metil Voges-Proskauer) conocido también como medio de Clark y Lubs. láctico y succínico) que provocan un fuerte descenso del pH inicial del medio. pero cuando se oxida vira a púrpura. se encuentran en células aeróbicas. con la consiguiente alcalinización. algunos en la membrana interna mitocondrial donde secuencialmente transportan electrones a partir de diferentes deshidrogenasas hasta el O2.4. Otros se ubican en el retículo endoplásmico. En estado reducido es incolora.Bioquímica de los Microorganismos . Los citocromos contienen ferroporfirina (grupo hemo). Hidrólisis de la Urea: Para esta prueba es necesario el Caldo Urea. acético. El Caldo de urea es un medio muy pobre y bastante tamponado que permite determinar la presencia de la actividad de la enzima hidrolítica ureasa. Este cambio de pH es detectado por cambio de color de l indicador azul de bromotimol desde el verde original al azul intenso. en segundo lugar. Fermentación butilén glicólica: La realizan las bacterias del grupo KlebsiellaEnterobacter (antiguo aerógenes). Puede detectarse por el viraje del indicador de rojo de metilo que permanece amarillo por encima de pH 5. produciéndose acetoína como intermediario que podrá ser detectada añadiendo al medio KOH (reactivo A de Voges-Proskauer) y alfa-naftol (reactivo B de Voges-Proskauer) que reaccionarán con este compuesto produciendo un color rojo característico. continuar metabolizándola por vía anaerobia (fermentación).Microbiología Prueba de la Oxidasa: El objetivo de la prueba Oxidasa es buscar la presencia de la enzima Citocromo C oxidasa. Los productos finales son compuestos neutros como el butanodiol y el etanol. El Citocromo C oxidasa se detecta utilizando el tetra-p-fenilendiamina: el reactivo de oxidasa contiene este compuesto que va a ser oxidado por la citocromo C oxidasa. Rojo de Metilo/Voges-Proskauer: Estas dos pruebas permiten la diferenciación dentro de las enterobacterias del grupo coli y aerógenes.1 y rojo por debajo de 4. para. También es válido usar el reactivo indicador Rojo de Fenol el cual vira por la alcalinización del medio a un rojo grosella. Se trata de un enzima que oxida el citocromo C de la cadena transportadora de e . Las enterobacterias son anaerobios facultativos que utilizarán la glucosa en dos fases: primero la metabolizarán aerobiamente (respiración oxibióntica-oxidativa) consumiendo rápidamente el oxígeno del medio. cuya actividad provoca la degradación de la urea presente en el medio (un 2% p/v) a CO2 y Amonio. 5 .

La prueba para detectar a los menos productores de ácido está basada en el procedimiento que describieron Voges y Proskauer en 1898 donde se presenta una reacción colorida cuando los cultivos se incuban en un medio conteniendo dextrosa y peptona y se les adiciona hidróxido de potasio exponiéndolos al aire.6.0 6.9 ± 0.Proskauer. Este aumento del pH se visualiza con el indicador azul de bromotimol que vira al alcalino a pH 7. Esta reacción pone de manifiesto la formación de acetilmetilcarbinol y es conocida como la prueba de Voges-Proskauer (VP).Bioquímica de los Microorganismos .0 5. En 1915 Clark y Lubs demostraron que las bacterias del colon de la familia aerogenes podían dividirse en dos grupos en base a su acción en un medio con dextrosa y peptona.Microbiología Medio MR-VP: El Medio MR-VP es utilizado para la diferenciación de organismos coliformes en base a las pruebas de Rojo de metilo y Voges-.org) 6 .0 5. 1998) Prueba del Agar Citrato de Simmons : La utilización de citrato como única fuente de carbono es una prueba útil en la identificación de enterobacterias. Cuando se probaron con el Rojo de Metilo como indicador de pH. En este medio las peptonas proporcionan la fuente de carbono y nitrógeno. La prueba para detectar a los altos productores de ácido es conocida como Rojo de Metilo (MR). Mezcla de Peptonas Dextrosa Fosfato de potasio pH 7. el grupo de coliformes producía una gran cantidad de ácido mientras que el grupo de los aerógenos producía una reacción menos ácida. La dextrosa es el carbohidrato fermentable y el fosfato actúa como buffer .microbiology. Resultados positivos y negativos de la Prueba Agar Citrato de Simmons (fuente:www.2 Constitución del Caldo MRVP ± Metil Red Voges Proskauer (fuente: Brock ³Biología de los Microorganismos. La utilización de citrato como única fuente de carbono se detecta en un medio de cultivo con citrato como única fuente de carbono mediante el crecimiento y la alcalinización del medio.

Esta prueba permite diferenciar los microorganimos que producen descarboxilación o desaminación de la lisina. Es muy utilizado para descartar Salmonella de aislamientos primaros.microbiology. La desaminación produce ácido fenilpirúvico que se detcta a través de una prueba colorimétrica. Prueba de la Descarboxilación de la Lisina (Prueba LIA -Lysine Iron Agar ó Agar Lisina Hierro): Esta prueba se da cuando la descarboxilación de la lisina (aminoácido) da la formación de la cadaverina que hace virar o cambiar el pH del medio hacia el lado alcalino. el cual con una reacción de cloruro férrico produce una coloración verde. 7 . La descarboxilación de los aminoácidos libera CO2 y una amina.Microbiología Prueba del Ácido Fenil Pirúvico. La fenilalanina es un aminoácido que en detrminados microorganismos puede transformarse por desaminación oxidativa en APP (ácido fenil pirúvico). los microorganismos que degradan la gelatina es porque segregan enzimas hidrolíticas transformando esta proteína en peptonas haciendo perder la capacidad de precipitar los metales pesados.Bioquímica de los Microorganismos . Se pude detectar además la producción de SH2 y es más sensible que el TSI (Triple Sugar Iron) para la detección de SH 2.org) Prueba de la Gelatina: La gelatina tiene la propiedad de precipitar cuando se añaden metales pesados. en donde genera CO2. Resultado positivo de la Prueba de la Descarboxilación de la Lisina ± Prueba LiaLysine Iron Agar (fuente:www.

añadir indicador rojo de metilo a la muestra. Ayuda a la determinación del grupo bacteriano entre las enterobacterias. Utilización más frecuente Diferenciación de enterobacterias (también para la separación de otros géneros o especies distintos con algunos azúcares determinados). tubo invertido para el gas Añadir una gota de H2O 2. Identificación de algunas especies de Shigellla y Pseudomonas. El púrpura de bromocresol como indicador de pH vira a púrpura (pH alcalino) si actúa la enzima. Prueba del Indol Conversión del triptófano de las proteínas en indol (molécula cíclica). Utilización del citrato. El ortonitrofenil. se forma el nitrofenol (amarillo) Muchas hidrolasas hidrolizan la gelatina y destruyen el gel. Detección de indol en medio de cultivo con dimetilaminobenzaldehido (color rojo). Coagulasa La enzima provoca la aglutinación del plasma sanguíneo. Pseudomonas. Bacillus (+) de Clostridium ( ). Buscar un color azul intenso (pH alcalino). Klebsiella-Enterobacter (+) de Escherichia (-).3 Prueba del rojo de metilo Distinguir Escherichia (+) de Klebsiella (-) y Enterobacter (). Después de la incubación. el tubo permanece líquido cuando se refrigera. Medio enriquecido con aminoácidos. Si se hidroliza la gelatina. epidermis (-) Descarboxilasas (lisina. Un medio de citrato con azul de bromotimol como indicador de pH. 1998) Prueba Fermentación de hidratos de carbono Principio Producción de ácido y/o gas durante el crecimiento fermentativo con azúcares o alcoholes azucarados Método Un caldo de cultivo con hidratos de carbono y rojo de fenol como indicador de pH. cultivo rojo) de Enterobacter y Klebsiella (generalmente-. Los fermentadores mixtos de ácidos producen suficiente ácido para disminuir el pH por debajo de 4. Streptococcus (-) de Micrococcus-Staphylococcus (+). Edwarsiella () de Salmonella (+) Catalasa La enzima descompone el peróxido de hidrógeno.Bioquímica de los Microorganismos . Buscar un color amarillo.-galactósido (ONPG) es un sustrato artificial para la enzima. Prueba de la Galactosidasa (ONPG) Licuefacción de la gelatina La descarboxilación de los aminoácidos libera CO2 y amina. incubar y buscar un coágulo de fibrina. Flavobacterium. Edwarsiella y Proteus. Staphylococcus aureus (+) de S. La utilización del citrato como fuente única de carbono produce la alcalinización del medio. ornitina. El H2S se detecta en un medio rico en hierro a partir de la formación del sulfit ferrosos negro (muchas variantes: agar hierro de Kligler y agar hierro triple azúcar. H2O2. Incubar una suspensión pesada de un cultivo lisado con ONPG. Ayudar a la identificación de Serratia. En enterobacterias.a un cultivo denso y buscar burbujas (O2). Caldo de glucosa. Incubar un caldo con 12% de gelatina. Enfriar para comprobar la formación del gel.Microbiología Pruebas importantes para el diagnóstico clínico de bacterias y su utilización más frecuente (fuente: Brock Biología de los Microorganismos. ayudar a la identificación de Salmonella. arginina). también detectan la fermentación de los hidratos de carbono). Edwarsiella (+) de Salmonella (-) Diferenciar Escherichia (+. Cuando se hidroliza. Citrobacter y Arizona (+) de Salmonella (-). 8 . Clostridium. Producción de sulfuro de hidrógeno (H2S) La producción de H2S por rotura de los aminoácidos azufrados o reducción del tiosulfato. cultivo amarillo). Arizona. Mezclar una suspensión líquida densa de bacterias con plasma.

Medio con un 2% de urea y rojo de fenol como indicador. Las colonias oxidasa positivas en agar pueden detectarse sumergiendo la placa en un reactivo y buscando colonias azuladas o marrones. Identificar los hidrolizadores típicos de almidón como Bacillus spp. Ayudar a la identificación de Aeromonas (+).. Prueba de la oxidaciónfermentación (O/F). añadir cloruro férrico y buscar el color verde Crecimiento de un organismo en una placa que contiene almidón. Caldo o agar. reducido a NO2. Caracterizar el género Proteus y el grupo Providencia. Pruebas importantes para el diagnóstico clínico de bacterias y su utilización más frecuente (fuente: Brock ³Biología de los Microorganismos. Separar enterobacterias (todas). Prueba de la fenilalaníndesaminasa La desaminación produce ácido fenilpirúvico que se detecta en una prueba colorimétrica. Dsitinguir Klebsiella (+) de Escherichia (-). entonces NO3NO2. intenso de color rojo rosado Prueba química para acetoína utilizando -naftol. Diferenciar Micrococcus (producción de ácido solamente en aerobiosis) de Staphylococcus (producción anaeróbica de ácido). Algunos organismos producen ácido solamente cuando crecen en aerobiosis. Después del crecimiento. Separar Neisseria y Moraxella (+) de Acinetobacter (-). De pseudomonas (+). Caldo con nitrato. Si tras la adición del zinc no hay color. 1998) 9 . La liberación de amonio eleva el pH. Distinguir Proteus (+) de Providencia (-) Separar Klebsiella y Enterobacter (+) de Escherichia (-).Bioquímica de los Microorganismos . el agar blando se utiliza para disminuir la mezcla durante la incubación Ayudar a la identificación de enterobacterias (generalmente +).Microbiología Reducción del nitrato El nitrato como aceptor de electrones alternativo. Tras la incubación. Caracterizar Pseudomonas (producción aeróbica de ácido) de enterobacterias (producción anaeróbica de ácido).o N2.a NO2.está aún presente añadiendo polvo de zinc para reducir el NO3. Producción de ácido en la parte alta del tubo de cultivo que contiene azúcar. detectar nitrito con ácido -naftilamina sulfanílico (color rojo). Sumergir la placa en ioduro de Gram y buscar las zonas claras alrededor de las colonias. Hidrólisis del almidón El yodo-ioduro da un color azul con el almidón. Si es negativo. Prueba de la oxidasa El citocromo C oxida al aceptor de electrones artificial: tetrametail (o dimetil)-pfenilendiamina. Caracterizar los miembros del género Bacillus. confirmar que el NO3. Medio enriquecido en fenilalanina. Prueba de la ureasa La urea (H2N ± CO ± NH2) se escinde en 2 NH3 + CO2 Prueba del VogesProskauer La acetoína es producida a partir de la fermentación de azúcares.

3 10.0 5.8 5.0 Cambio de color rojo amarillo rojo a amarillo rojo a anaranjado amarillento amarillo a violado rojizo violeta azulado a naranja rojizo rojo a anaranjado amarillento amarillo a azul violado rojizo a verde rojo a anaranjado amarillento rojo a azul amarillo a púrpura amarillo anaranjado a púrpura amarillo a azul amarillo a rojo rojo azulado a amarillo anaranjado amarillo a púrpura amarillo a púrpura amarillo a azul incoloro a violado rojizo incoloro a azul amarillo claro a amarillo pardusco anaranjado a violeta Indicadores de ácidos y bases más utilizados en las pruebas de Diagnóstico Clínco (fuente: Brock ³Biología de los Microorganismos.4 8.6.8 5.1 11.2 5.0 12.4 5.4 4.Dimetilaminoazobenzol Azul de bromofenol Rojo de Congo Naranja de metilo Verde de bromocresol Indicador mixto Rojo de metilo Tornasol Púrpura de bromocresol Rojo de bromofenol Azul de bromotimol Rojo de fenol Rojo neutro Rojo de cresol Púrpura de m-cresol Azul de timol Fenolftaleína Timolftaleína Amarillo de alizarina GG Azul de épsilón Zona de viraje pH 1.4 6.8 4.0 5.2 3.2 .2 2.9 4.8 2.0 7.0 3.4 3.Microbiología Azul de timol Púrpura de m-cresol 4.8 7.6 13.8 6.0 7.8 8.5 10.6 8.2 6.8 9. 1998) 10 .0 9.4 9.0 8.6 3.0 8.6 6.0 8.1 4.2 2.0 4.8 1.2 6.Bioquímica de los Microorganismos .2 9.

PARTE EXPERIMENTAL: Materiales. Equipos y Reactivos: y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y y Tubos de prueba Placa petri Mechero Papel de filtro whatman Caldo nutritivo Ácido sulfanílico Caldo úrea Caldo rojo de metilo Cloruro férrico Agar LIA Caldo lactosa Agar gelatina Solución clorhídrica Col. De dihidrocloruro de tetrametil parafenilendiamina Aguja y asa de kolle Gradilla Algodón Estufa a 35ºC Solución de peróxido de hidrógeno Agar nutritivo Ácido tartárico Reactivo de Kovac`s Agar citrato de Simmons Agar TSI Caldo glucosado Agar almidón Lugol 11 .Bioquímica de los Microorganismos .Microbiología IV.

luego se incuba a 37ºC por 24h 12 . se adiciona el reactivo de Griebs al cultivo. luego de la incubación a 37ºC por un tiempo de 24 a 48h. luego de la incubación a 37ºC por 24h se adiciona el reactivo de KOVAC´S de 2 a 3 gotas. Reactivo de Griebs Caldo de nitrato Prueba de Indol: Se realiza la siembra en caldo de triptona. Reactivo de Kovac`s Caldo de triptona Asimilación de Citrato: Se realiza la siembra en Agar de Citrato de Simmons.Bioquímica de los Microorganismos .Microbiología Procedimiento: Reducción de Nitratos a Nitrititos: Se realiza la siembra en caldo de nitrato.

Descarboxilación de la lisina: Se realiza la siembra por picadura profunda en Agar Lía. se procede a la incubación a 37ºC por 24h Formación de ácido fenil pirúvico: Se realiza la siembra en agar nutritivo. para realizar la lectura se agrega Cl3Fe de 2 a 3 gotas Cl3Fe 13 .Microbiología Tolerancia al Cianuro de Potasio: Se realiza la siembra en un caldo nutritivo de 2ml que contiene 0.1ml de KCN. luego se procede a incubar a 37ºC por 24-48h.Bioquímica de los Microorganismos . luego se realiza la siembra y se procede ala incubación a 37ºC por 24h.

incubación de 37ºC por 24h. 14 .Microbiología Oxidación fermentativa de la glucosa: Se realiza la siembra por picadura profunda en dos tubos.Bioquímica de los Microorganismos . luego uno de ellos se agrega cera líquida. Hidrólisis de la Urea: Se realiza la siembra en el caldo de la urea. incubación de 37ºC por 24-48h.

se realiza una estria sobre el papel y se observa la reacción. Prueba de la catalasa: En un porta objeto se coloca la cepa. Hidrólisis de la gelatina: Se realiza la siembra por estrías del microorganismo en la placa petri que contiene agar. incubar a 37ºC por 24horas luego de esto se agrega gotas de solución clorhídrica y se expone por un minuto. luego enjuagar con agua corriente.Bioquímica de los Microorganismos . luego se agrega 2 a 3 gotas de peroxido de hidrogeno y se observa el desprendimiento de oxigeno. Cl3Mg 15 .Microbiología Prueba de la Oxidasa: Se obtiene papel de filtro watman impregnado con solución de Dihidrocloruro de tetrametil parafenilendiamina. luego con una asa de koller.

incubar a 37ºC por 24horas. lugol 16 .Microbiología Hidrólisis del almidón: Se realiza la siembra por estrías por un agar de almidón al 1% en placa petri. se adiciona gotas de lugol sobre la placa.Bioquímica de los Microorganismos .

Microbiología V. de asimilación de citrato) Descarboxilación de la lisina RESULTADO Positivo con formación de nitritos Negativo Positivo. no concuerda con el coloración verde propia de las desaminación oxidativa Formación de APP (acido fenil piruvico) Negativo.Bioquímica de los Microorganismos .no hay cambios y Reducción de nitritos a nitratos (Rojo ladrillo) y Prueba de Indol (Amarillo) 17 . se produce una alcalinización en el pH COLORACIÓN Rojo ladrillo Amarillo Azul Amarillo en la superficie y morado en la parte de abajo siendo este más intenso Coloración amarilla. se produce una alcalinización por el amoniaco Positivo . RESULTADOS: Salmonella typhi PRUEBA Reducción de nitritos a nitratos Prueba de Indol Prueba de citrato de Simmons (P.

Microbiología Prueba de citrato de Simmons (P.Bioquímica de los Microorganismos . de asimilación de citrato) (Azul) y y Formación de APP (acido fenil piruvico) 18 .

(caldo glucosado-sal peptona) por 5 días (a 35ºC) para luego adicionar las gotas del indicador para observar la reacción del medio.UNIVERSIDAD DEL ZULIA (2003) . MARTINKS & JACK PARKER (1998) los microorganismos que al reducir los nitratos a través de la enzima nitrato reductasa. en la práctica el periodo de incubación del agar citrato de Simons fue 48 horas 19 y y y y .P. En la Prueba de asimilación del citrato se debe sembrar en el agar citrato de simmons con una aguja de Kohl poco cargada e incubar a 35ºC durante 72-96 horas y luego observar si ha habido desarrollo del cultivo o cambio del color verde al azul .-V. Esto permitirá dar el resultado definitivo de la prueba de reducción de los nitratos. agregar unas granallas de Zinc y observar el color desarrollado. Después del periodo de incubación. liberan gas nitrógeno. producen un resultado falso negativo con la metodología detallada previamente. con el reactivo de Barrit. constituido por alfa-naftol y KOH . Según LA UNIVERSIDAD DEL ZULIA (2003) en la prueba de Voges-Proskauser el periodo de incubación es de 24-48 horas utilizando el medio M.Microbiología VI.carbinol o acetoína. en la práctica al realizar esta prueba con la salmonella tiphy nos dio una coloración roja al adicionar el reactivo de Kovacs lo que nos indica que la salmonella puede degradar al triptófano. esta reacción consiste en establecer la formación de acetilmetil. JOHN M. DISCUSIONES: y Según BROCK MICHAEL T. con el cual forma un estrato superficial de color rojo en el tubo de reacción .R. no obstante en la guía de práctica se nos indica que el periodo de incub ación debe ser 24 horas. alcohol amílico y HCl concentrado.R. producida por ciertos microorganismos a partir de la glucosa.-V. Por eso. Según LA UNIVERSIDAD DEL ZULIA (2003) en la prueba del indol ciertos microorganismos forman Indol por descomposición del aminoácido triptófano (indol-alanina) presente en la triptona. integrado por pdimetil-amino-benzaldehido. ante un resultado negativo.Bioquímica de los Microorganismos . MADIGAN. (caldo glucosado-sal peptona). Este enunciado fue comprobado en la experiencia de laboratorio. la presencia del Indol se reconoce con el reactivo de Kovacs. La UNIVERSIDAD DEL ZULIA (2003) nos menciona que para la prueba del rojo de metilo se debe incubar el medio M. sin embargo en la guía de práctica se especifica que el periodo de incubación es de 3 días y los reactivos a usar son la creatina y el KOH .P.

y La salmonella tiphy nos dio negativo en la prueba del indol debido a que no puede degradar el triptófano del caldo triptona. y La reducción total del nitrato es nitrógeno o nitrógeno celular. Conclusiones y Los microorganismos mueren con la presencia de los nitratos al ser esta una sustancia toxica.debido a esto se producen las burbujas formadas. PDF: S.BIBLIOGRAFÍA: y y y y BROCK MICHAEL T.. PERRAUD-GAIME (1986) Fisiologia y Bioquimica de microorganismos utilizados en procesos de fermentación en medio sólido Laboratorie de Biotechnologie PMC. VII. JOHN M. MARTINKS & JACK PARKER (1998). LA UNIVERSIDAD DEL ZULIA (2003) Microbiología De La Leche II MaracaiboVenezuela QUEVEDO. F (1967) Microbiología General: Prácticas De Laboratorio UNFV LimaPerú 20 . y La salmonella typhi descompone al nitrato en nitrito aprovechando el oxigeno que es liberado para su proceso de respiración y Las granallas de zinc sirven para confirmar que la reacción es negativa y que hay presencia de nitratos en la muestra además de descartar la posibilidad que el microorganismo haiga degradado o reducido el nitrato a nitrógeno y Si en la prueba de reducción de nitrato a nitrito al confirmar con las granallas de zinc no hay cambio de color es porque el microorganismo ha degradado hasta el final el nitrato y es muy ávido de oxigeno por lo que se podría decir que el microorganismo es un aerobio estricto. MADIGAN. y El reactivo de griess reacciona con los nitritos y debido a esto para saber si el nitrato fue degradado por el microorganismo se le debe agregar este reactivo dándonos un color rojo ladrillo como prueba positiva. Biología de los Microorganismos 8va Edición.Bioquímica de los Microorganismos .Microbiología VII. Centre ORSTOM. y La alfanaftilamina es la que detecta el nitrito pero en las condiciones que le da el acido sulfanílico y el acido tartárico. Editorial Grafilles (Group Fuproin) Impreso en España. y En la prueba de la catalasa la enzima descompone el peróxido de hidrogeno en agua y O2 . ROUSSOS & I.