Programa: QUIMICA FARMACEUTICA

ANALISIS INSTRUMENTAL I
Rotación: ESPECTROSCOPÍA DE ABSORCIÓN UV – VIS

ACTUALIZADO EN JUNIO DE 2022

PROFESOR: Lucía Álvarez Álvarez. Químico Farmacéutico. Especialista en Química

Analítica. Diplomado en ISO 9001 y NTC GP 1000

PROYECTO DOCENTE: Debe revisarlo y tener en cuenta las fuentes de información

recomendadas. Recuerde que, para realizar las prácticas de laboratorio, el curso se divide
en tres rotaciones, UV-VIS, IR y EA

ENTRADA AL LABORATORIO: Debe usar bata blanca, pantalón largo, medias y zapatos
cerrados de material resistente a ácidos y bases.

OBJETIVO GENERAL: Utilizar métodos analíticos de Espectroscopía de Absorción UV-

VIS para obtener resultados y evaluarlos en términos de precisión y exactitud.

TENER EN CUENTA: Las prácticas de laboratorio no pueden ser una actividad mecánica,
requieren del análisis, antes de entrar al laboratorio y después de la operación técnica,
apoyan el logro de la competencia:

HABILIDAD PARA DESARROLLAR Y EJECUTAR EXPERIMENTOS, PROBAR

HIPÓTESIS, ANALIZAR E INTERPRETAR DATOS, EMITIR CONCLUSIONES Y
SUSTENTAR LA TOMA DE DECISIONES

La competencia se evalúa a través del trabajo del laboratorio, informes de laboratorio y

examen de práctica, mediante los indicadores:

1. Aplica en forma lógica la secuencia propuesta para realizar un experimento

según hipótesis y criterios a evaluar
2. Realiza los cálculos de manera adecuada y obtiene resultados coherentes con el
experimento realizado.
3. Organiza e interpreta los datos y resultados obtenidos para generar conclusiones
según hipótesis y criterios evaluados en el experimento
4. Genera conceptos de apoyo a la toma de decisiones según la hipótesis y criterios
evaluados en el experimento

De manera indirecta, el curso de Análisis Instrumental I, también apoya el logro de las

competencias relacionas con comunicación, ética y trabajo en equipo.

SESION 1. Objetivo: Definir elementos teóricos requeridos para optimizar el saber hacer
en las actividades prácticas.

Actividades a realizar:

1
 1. Mostrar el conocimiento y manejo de las actividades a realizar en las sesiones 2, 3 y
4, con el fin de aclarar todas las inquietudes, optimizar el uso del tiempo y facilitar el
logro de objetivos.
2. Listar por cada sesión el material de vidrio y en general los reactivos y elementos de
laboratorio a utilizar.
3. Prepararse para responder preguntas relacionadas con el trabajo a realizar y
fundamento del procedimiento analítico a realizar en las sesiones 2, 3 y 4.

RECUERDE LO VISTO EN CLASE

Al laboratorio de análisis se llega a realizar una actividad operativa, manual, de tipo

técnico. El pensamiento científico y ejercicio académico se realiza antes de entrar al
laboratorio y al finalizar el trabajo de laboratorio.

PORQUE REALIZAR UNA PRÁCTICA DE LABORATORIO, significa conocer el porqué

de cada paso a realizar, incluso, se debe suponer cuál será el resultado, por eso
existe el diagnóstico analítico. Y cuando se obtienen los resultados, deben ser
analizados antes de entregar a la persona interesada, no solo para garantizar la
confiabilidad del resultado, desde su precisión y exactitud, sino, además, para
orientar una adecuada toma de decisiones con base en dichos resultados.

GUÍA DE PREGUNTAS

1. ¿Cuál es el objetivo de la práctica?

2. ¿Cuál es la ecuación de la Ley de Beer-Lambert?
3. ¿Dónde se ubica la variable independiente en una tabla de datos?
4. ¿Cómo se construye la curva de calibración mediante estándar externo? Muestre
forma de la gráfica.
5. ¿Cómo se construye la curva de calibración mediante estándar añadido? Muestre la
forma de la gráfica.
6. ¿Cuál es el rango dinámico lineal según el procedimiento analítico?
7. ¿Existe un diagnóstico analítico? Justifique su respuesta.
8. ¿Cuál es la población objeto de estudio? ¿La muestra que se encuentra en el
laboratorio es representativa? Justifique su respuesta.
9. ¿Cuál es la población de la muestra que se va a analizar en el laboratorio? ¿Es
representativa? Justifique su respuesta.
10. ¿Hacia dónde va a inferir los resultados obtenidos?
11. ¿Los resultados obtenidos son precisos? Justifique su respuesta.
12. ¿Los resultados obtenidos son exactos? Justifique su respuesta.
13. ¿Mejora o no mejora la exactitud del resultado al determinar acetaminofén en
tabletas, cuando se pesan las tabletas una por una? Justifique su respuesta.
14. ¿Cuál son las reacciones químicas relacionadas con el procedimiento analítico de la
determinación de acetaminofén en jarabe? Justifique quien es el reactante límite.
15. ¿Diga en que parte del procedimiento analítico elimina interferencias?
16. ¿Diga en que parte del procedimiento analítico controla interferencias?

EN CADA PASO DEL PROCEDIMIENTO ANALÍTICO UTILIZADO, ESTABLEZCA LA

PROBABILIDAD DE COMETER ERRORES, PIENSE SI ESTOS ERRORES
2
AFECTARÁN LA PRECISIÓN DEL RESULTADO O SOLO LA EXACTITUD, O AMBOS.
EN TODO CASO, SIEMPRE DEBERÁ JUSTIFICAR LA RESPUESTA.

SESION 2. Objetivo: Determinar el valor de la constante Absortividad molar para el

fármaco acetaminofén y evaluar los resultados en términos de precisión.

Actividades a realizar:
1. Preparar 10 soluciones estándar para obtener 10 lecturas (ensayo con 10 datos).
2. Diseñar una tabla con el fin de mostrar los datos obtenidos.
3. Realizar los cálculos analíticos correspondientes.
4. Evaluar la precisión mediante el Coeficiente de variación (CV) cuyo valor no debe
ser superior a 2.0 %.
5. Utilizar dos criterios estadísticos, incluido Q de Dixon y T de Grubbs, para evaluar
datos anómalos o sospechosos.
6. Graficar los datos obtenidos mediante una curva de calibración.
7. Analizar los resultados obtenidos e identificar posible presencia de errores indicando
cómo afectarían las pesadas, las medidas, la balanza, las pipetas y el material de
vidrio utilizado, en la precisión y exactitud del resultado.
8. Proponer como podría evaluar la exactitud del resultado obtenido.
9. Finalizar la actividad mediante una conclusión (es), para ello tenga en cuenta el
objetivo de la práctica.

NOTA: Los estudiantes deberán traer las muestras que se van analizar. Un frasco de
jarabe de acetaminofén para todos los grupos, y una muestra diferente de tabletas de
acetaminofén por cada grupo.

SESION 3. Objetivo: Cuantificar acetaminofén mediante estándar externo en un

medicamento tipo jarabe, evaluar la precisión de la medida y proponer la evaluación de la
exactitud.

Actividades a realizar:
1. Preparar soluciones estándar para curva de calibración mediante estándar externo
con lectura de 3 datos.
2. Preparar un blanco de reactivos.
3. Describir e identificar la muestra, piense en el diagnóstico analítico.
4. Preparar la muestra utilizando una réplica de 2.
5. Diseñar una tabla con el fin de mostrar los datos obtenidos.
6. Realizar los cálculos analíticos correspondientes para obtener el contenido de
acetaminofén según lo indicado en la etiqueta.
7. Aplicar mediante cálculo el concepto porcentaje de lo declarado en la etiqueta, con
el fin de reconocer su importancia para evaluar la calidad de los medicamentos,
según criterios de la United States Pharmacopeia (USP).
8. Evaluar la precisión del resultado obtenido mediante el coeficiente de variación (CV)
cuyo valor no debe ser superior a 2.0 %.
9. Construya una segunda tabla con el resumen de resultados: Promedio, Desviación
estándar y Coeficiente de variación (del contenido y del porcentaje de lo declarado
en la etiqueta).

3
 10. Graficar los datos obtenidos mediante una curva de calibración y calcule el
coeficiente de correlación.
11. Analizar los resultados obtenidos e identificar posible presencia de errores indicando
cómo afectarían las pesadas, las medidas, la balanza, las pipetas y el material de
vidrio utilizado, en la precisión y exactitud del resultado.
12. Proponer como podría evaluar la exactitud del resultado obtenido.
13. Finalizar la actividad mediante una conclusión (es), para ello tenga en cuenta el
objetivo de la práctica.

SESION 4. Objetivo: Cuantificar acetaminofén mediante estándar añadido en un

medicamento tipo tableta, evaluar la precisión de la medida y proponer la evaluación de la
exactitud.

Actividades a realizar:

1. Preparar soluciones estándar para curva de calibración mediante estándar añadido

con lectura de 5 datos.
2. Describir e identificar la muestra, piense en el diagnóstico analítico.
3. Preparar la muestra utilizando una réplica de 2.
4. Diseñar una tabla con el fin de mostrar los datos obtenidos.
5. Realizar los cálculos analíticos correspondientes para obtener el contenido de
acetaminofén por tableta.
6. Aplicar mediante cálculo el concepto porcentaje de lo declarado en la etiqueta, con
el fin de reconocer su importancia para evaluar la calidad de los medicamentos,
según criterios de la United States Pharmacopeia (USP).
7. Evaluar la precisión del resultado obtenido mediante el coeficiente de variación (CV)
cuyo valor no debe ser superior a 2.0 %.
8. Construya una segunda tabla con el resumen de resultados: Promedio, Desviación
estándar y Coeficiente de variación (del contenido y del porcentaje de lo declarado
en la etiqueta).
9. Graficar los datos obtenidos mediante una curva de calibración y calcule el
coeficiente de correlación.
10. Analizar los resultados obtenidos e identificar posible presencia de errores.
11. Analizar los resultados obtenidos e identificar posible presencia de errores indicando
cómo afectarían las pesadas, las medidas, la balanza, las pipetas y el material de
vidrio utilizado, en la precisión y exactitud del resultado.
12. Proponer como podría evaluar la exactitud del resultado obtenido.
13. Finalizar la actividad mediante una conclusión (es), para ello tenga en cuenta el
objetivo de la práctica.

PREPARACIÓN DE INFORMES DE LABORATORIO

Al finalizar las sesiones 2, 3 y 4 respectivamente, los estudiantes deberán preparar un

informe de laboratorio, entregar impreso y debe incluir los siguientes aspectos:

1. Título de la práctica.

4
2. Nombre de estudiantes: Solo de los estudiantes que participaron en la preparación del
informe de laboratorio, (el control de asistencia y participación del estudiante durante la
práctica lo lleva el profesor).
3. Resumen: Sobre la práctica de máximo 200 palabras, (colocar en paréntesis el número
de palabras empleadas). Recuerde que el resumen debe indicar el objetivo, la metodología
y las conclusiones.
4. Palabras clave: Máximo 5 palabras relacionadas con el tema de la práctica realizada.
5. Presentación de la muestra: Mencione las características de identidad de la muestra
analizada.
6. Población objeto de estudio: Indique quien es la población de la muestra analizada.
7. Procedimiento analítico: Mediante un diagrama de flujo represente el procedimiento
analítico empleado.
8. Cálculos: Realizados utilizando de manera adecuada las respectivas unidades.
9. Tablas de datos: La(s) tabla(s) de datos que corresponda con su título correspondiente.
10. Gráfica: La curva de calibración con su nombre correspondiente.
11. Resultados: Los resultados finales de acuerdo con el objetivo de la práctica.
12. Probabilidad de errores: De acuerdo con el procedimiento analítico, listar los errores
que afectan la precisión y exactitud del resultado, expresando con claridad la influencia de
los posibles errores, indicando cómo afectarían la precisión, la exactitud (o ambos criterios)
en el resultado. Tenga en cuenta: Pesadas, Medidas, Balanza, Pipetas, Material de vidrio
utilizado.
13. Conclusiones: La(s) conclusión(es) a las que pudo llegar.
14. Bibliografía: El listado de la bibliografía y fuentes de información consultada.

ADICIONALMENTE… Al preparar el tercer informe correspondiente a la sesión 4, además

de los 14 puntos mencionados, los estudiantes deberán incluir un anexo en el cual
indicarán el listado de conceptos clave o términos estudiados desde lo teórico y cuyo
SABER logró afianzar y fortalecer con el apoyo pedagógico del HACER en el laboratorio,
expresando además sus mejoras personales como SER humano, logradas al finalizar la
Rotación de Espectroscopía de Absorción UV-VIS.

NORMAS PARA PRESENTAR LOS INFORMES DE LABORATORIO: Los informes se

deben colocar en una carpeta, preferiblemente reutilizada, imprimir a doble cara o reutilizar
papel, utilizar letra Arial 12, espacio sencillo y márgenes de 2.2 cm en los 4 lados de la
página. El informe de laboratorio debe ser un producto del trabajo armonizado y
organizado con participación de todos los estudiantes, es una oportunidad de aprendizaje.

PROCEDIMIENTO PARA DETERMINAR LA CONSTANTE ABSORTIVIDAD MOLAR

PARA EL FÁRMACO ACETAMINOFÉN

1. Prepare una solución estándar de acetaminofén usando agua como solvente, de

concentración exacta y conocida a partir de un estándar secundario. Use 60 mg
como máxima cantidad de estándar y para toda la experiencia use solo balones
aforados de 25 mL o menos, según disponibilidad de material. Anote el valor exacto
de la concentración según cantidad pesada y balón utilizado.
2. A partir de la solución prepara en 1, prepare 10 diluciones de concentración exacta y
conocida en el rango 5 a 25 mg de acetaminofén por litro de solución.

5
 3. Determine su Absorbancia a una longitud de onda de 243 nm, utilizando un blanco
de solvente para ajustar el cero de Absorbancia o 100% de Transmitancia en el
instrumento.

ROTACIÓN 1. Prepara 10 soluciones de 10 concentraciones diferentes para obtener 10

lecturas y calcular 10 datos.

ROTACIÓN 2. Prepara 10 soluciones de 5 concentraciones diferentes para obtener 10

lecturas y calcular 10 datos.

ROTACIÓN 3. Prepara 10 soluciones de la misma concentración, para obtener 10 lecturas

y calcular 10 datos.

NOTA. Los tres grupos de estudiantes deberán trabajar con el mismo estándar y utilizar el
mismo equipo instrumental. El material de vidrio puede variar.

PROCEDIMIENTO PARA CUANTIFICAR ACETAMINOFÉN EN UN MEDICAMENTO

TIPO JARABE

Preparación de soluciones a utilizar en el tratamiento de la muestra:

 De acuerdo con las cantidades en total a utilizar prepare solución acuosa de nitrito
de sodio al 5% (p/v), ácido clorhídrico 1 N e hidróxido de sodio 1N.
 Tenga en cuenta que las soluciones anteriores no actuarán como estándares, sino
como reactantes.
 Asegúrese que la etapa final durante la cual el acetaminofén formará un complejo
coloreado con las soluciones anteriores, se realice al mismo tiempo, es decir
trabajando en serie las soluciones estándar para la curva, las soluciones de muestra
y réplica, y la solución blanco de reactivos.

Preparación de curva de calibración:

 Inicialmente prepare una solución estándar de acetaminofén usando alrededor de 60
mg de acetaminofén estándar secundario. Recuerde usar solo balones aforados de
25 mL o menos, según disponibilidad de material). Marque la solución con el valor
exacto de la concentración según cantidad pesada y balón utilizado.
 A partir de la solución anterior, prepare tres soluciones de acetaminofén en
concentraciones dentro del rango, 4 a 12 mg de acetaminofén por litro de solución.
 Adicione en cada balón 2.5 mL de solución acuosa de nitrito de sodio al 5% (p/v) y 1
mL de ácido clorhídrico 1 N. Colocar la tapa del balón, agitar suavemente y de
manera horizontal, dejar en reposo durante 10 minutos con el fin de desarrollar la
reacción entre el acetaminofén y el ácido nitroso.
 Pasado el tiempo adicione 1.3 mL de hidróxido de sodio 1 N, dejar en reposo por 5
minutos más con el fin de estabilizar el complejo coloreado formado, finalmente
complete volumen con agua destilada.
 Determine su Absorbancia a una longitud de onda de 430 nm, utilizando un blanco
de reactivos para ajustar el cero de Absorbancia o 100% de Transmitancia en el
instrumento.

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Preparación de la solución muestra:
 El análisis se realizará por duplicado o réplica de 2; lea la etiqueta y con base en ello
realice el diagnóstico analítico sobre la muestra a analizar, y de acuerdo con sus
consideraciones prepare las soluciones y diluciones requeridas para obtener una
solución cuya concentración se encuentre dentro del rango dinámico lineal.
Recuerde marcar las soluciones como muestra y réplica, y proceda a desarrollar la
reacción.
 Desarrolle con el acetaminofén un complejo coloreado siguiendo el mismo
procedimiento descrito para los estándares.
 Determine su Absorbancia a una longitud de onda de 430 nm, utilizando un blanco
de reactivos para ajustar el cero de Absorbancia o 100% de Transmitancia en el
instrumento.

Preparación de la solución blanco de reactivos:

 Siga el mismo procedimiento descrito en la preparación del complejo coloreado, sin
adición de solución de muestra.
 Utilice la solución para ajustar el cero de Absorbancia o 100% de Transmitancia en
el instrumento.

NOTA. Todos los grupos (estudiantes) deberán analizar la misma muestra (el mismo
frasco de jarabe), además usarán el mismo estándar y el mismo equipo instrumental. El
material de vidrio puede variar.

PROCEDIMIENTO PARA CUANTIFICAR ACETAMINOFÉN EN UN MEDICAMENTO

TIPO TABLETA

Preparación de la solución muestra:

 El análisis se realizará por duplicado o réplica de 2; lea la etiqueta y con base en ello
realice el diagnóstico analítico sobre la muestra a analizar, pese en conjunto un
número no menor de 20 tabletas.
 Triture las tabletas y reduzca hasta polvo fino.
 De acuerdo con el diagnóstico pese una cantidad de polvo equivalente a 60 mg de
acetaminofén, realice las disoluciones y diluciones requeridas para obtener una
solución de concentración aparente igual a 250 mg de acetaminofén por litro de
solución. Marque esta solución como de concentración Cm.
 Las interferencias insolubles se deben eliminar mediante filtración, la cual no debe
alterar la concentración del filtrado.

Preparación de curva de calibración:

 Inicialmente prepare una solución estándar de acetaminofén usando agua como
solvente, con concentración exacta y conocida que contenga alrededor de 250 mg
de acetaminofén por litro de solución, a partir de un estándar secundario. Recuerde
usar 60 mg como máxima cantidad de estándar y para toda la experiencia use solo
balones aforados de 25 mL o menos, según disponibilidad de material. Marque la

7
 solución como Ce y anote el valor exacto de la concentración según cantidad
pesada y balón utilizado.
 Coloque en serie 5 balones de 25 mL, márquelos con el volumen de estándar a
utilizar y teniendo en cuenta que el primero no lleva solución estándar, anote
respetivamente 0.0 – 0.5 - 1.0 – 1.5 y 2.0 mL; adicione los volúmenes de la solución
marcada como Ce a los respectivos balones.
 En cada uno de los 5 balones de estándar, adicione 0.5 mL de la solución muestra
marcada como Cm. Complete volumen con agua destilada.
 Determine la Absorbancia a una longitud de onda de 243 nm, utilizando un blanco
de solvente para ajustar el cero de Absorbancia o 100% de Transmitancia en el
instrumento.

ACCIÓN DE MEJORA
ANÁLISIS SOBRE LOS RESULTADOS OBTENIDOS POR LOS ANALISTAS
IDENTIFICADOS MEDIANTE LOS CÓDIGOS G1, G2 Y G3

Implementado desde primer periodo de 2017, busca apoyar el apoyar el logro de la

competencia: Habilidad para diseñar y desarrollar experimentos; analizar e interpretar
datos.

La evaluación del logro de la competencia se hace mediante su participación en el

laboratorio, preparación de informes y examen final de práctica, y se tiene en cuenta estos
indicadores:
1. Aplica en forma lógica la secuencia propuesta para realizar un experimento según
hipótesis y criterios a evaluar
2. Realiza los cálculos de manera adecuada y obtiene resultados coherentes con el
experimento realizado.
3. Organiza e interpreta los datos y resultados obtenidos para generar conclusiones
según hipótesis y criterios evaluados en el experimento
4. Genera conceptos de apoyo a la toma de decisiones según la hipótesis y criterios
evaluados en el experimento

Actividad: Al finalizar las rotaciones se realiza un análisis y discusión, basado en la

evaluación de los resultados por grupo, donde cada grupo representa un analista (tres
analistas), teniendo en cuenta los siguientes elementos:
1. Todos los analistas usaron el mismo, Método analítico, laboratorio, equipos y
reactivos.
2. Todos los analistas realizaron el mismo ensayo de precisión, obtuvieron 10 datos,
sin embargo, hubo las siguientes diferencias: Analista 1, trabaja con 10
concentraciones y 10 datos. Analista 2, trabaja con 5 concentraciones y 10 datos.
Analista 3, trabaja con 1 concentración y 10 datos.
3. Los tres analistas analizaron (con réplica de dos), la misma muestra de jarabe de
acetaminofén.
4. Cada analista analizó una muestra diferente de tabletas de acetaminofén.

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Para el análisis y la discusión prepare las tablas 1 y 2, porque este será el material de
soporte para realizar el análisis y discusión sobre los resultados obtenidos. Tenga en
cuenta que el código de los analistas, G1, G2 y G3 es equivalente a rotación 1, 2 y 3
respectivamente. El código del estándar de acetaminofén es LAM-120. El código de las
muestras es el nombre del fabricante seguido del número de lote.

Tabla 1. Código de analistas y de las muestras objeto de estudio

Códigos de Código muestra de Código muestra de Código muestra de

analistas y de acetaminofén para Jarabe de Tabletas de
muestras determinar Absortividad acetaminofén acetaminofén
analizadas molar
G1
G2
G3

Tabla 2. Resultados obtenidos por los analistas durante la Rotación UV-VIS

correspondiente al periodo académico ------

Parámetro determinado G1 G2 G3
Absortividad molar del
acetaminofén (L/cm X mol
(valor promedio)

CV

Porcentaje de error

Cantidad de acetaminofén en el
jarabe (valor promedio)

CV

Porcentaje de error

Porcentaje según lo indicado en

la etiqueta (valor promedio)

CV

Porcentaje de error

Cantidad de acetaminofén por

9
 tableta (valor promedio)

CV

Porcentaje de error

Porcentaje según lo indicado en

la etiqueta (valor promedio)

CV

Porcentaje de error

Observe y analice los datos de las tablas, con el fin de responder preguntas, cuyas
respuestas no se reflejan en los informes de laboratorio entregados.

NOTA: Esta actividad se realiza al finalizar la entrega de informes de laboratorio por parte
de la última rotación, porque también se realizará una discusión general sobre las
diferencias del trabajo y desempeño de los grupos en el laboratorio, su precisión, exactitud
y presentación de informes de laboratorio.

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