VALIDACIÓN DE MÉTODO

12 septiembre de 2022
 2. VALIDACIÓN DE MÉTODO

➢ La validación de un método analítico es un paso

fundamental para asegurar que los resultados
entregados por dicho método son confiables.
Cuando se realiza la validación de un método por
parte del laboratorio, lo que se busca es poder
determinar con fundamento estadístico que el
método es adecuado para los fines previstos.

➢ En este sentido, es importante que para el

proceso de validación se asigne a un responsable
de realizar dicha tarea, de manera que, la
validación se efectúe en forma metódica,
ordenada, trazable y confiable.
➢Es importante que el laboratorio
tenga claridad antes de iniciar la
validación de cuáles son los
requerimientos del método para
establecer el alcance de la
validación.

➢Es esencial, entonces conocer el

método a validar y su aplicabilidad,
es decir, el analito, la concentración
a cuantificar.
 ¿Qué es validar un método?

Confirmación, a través de la aportación de evidencia

objetiva, de que se han cumplido los requisitos para un uso
o aplicación específico previsto (ISO 9000).
 ¿Qué es validar un método?

Confirmación, a través del examen y aportación de evidencias

objetivas, de que se cumplen los requisitos particulares para un
uso específico previsto (ISO/IEC 17025).
 ¿Qué es validar un método?

Verificación, donde los requisitos especificados son

adecuados para un uso previsto.
La validación de un método busca cuantificar la
exactitud probable de los resultados evaluando tanto
efectos sistemáticos como los aleatorios sobre
resultados. Normalmente la exactitud se estudia en
componentes: la veracidad y la precisión.
 VALIDACIÓN

La validación debe ser tan

amplia como sea necesario para
satisfacer las necesidades del
tipo de aplicación o del campo
de aplicación dados.
VALIDACIÓN DE MÉTODOS NORMALIZADOS

Son métodos analíticos emitidos por organismos de

normalización internacionales (ej. ISO), regionales
(normas europeas o Mercosur, o nacionales como
Sociedad Americana para Pruebas y Materiales,
Instituto Mexicano de Normalización y Certificación
, A. C., Sociedad Mexicana de Normalización y
Certificación S.C., etc. También se consideran
métodos “normalizados” los emitidos por
organizaciones internacionalmente reconocidas
como EPA, Standard Methods for Water and
Wastewater, etc.
VALIDACIÓN DE MÉTODOS NORMALIZADOS

IRAC
VALIDACIÓN DE MÉTODOS NO NORMALIZADOS

Corresponden a métodos propios o

desarrollados por el laboratorio así
como métodos nuevos (ejemplo:
publicado en revista científica), o bien, a
métodos que tradicionalmente se han
utilizado en el laboratorio pero que no
están normalizados. Es decir, no se
encuentran en normas u otras
colecciones de métodos, ni en
publicaciones de terceros.
 ¿Cómo seleccionar e implementar un método
analítico nuevo?

➢ De preferencia, que sea un método

normalizad de versión reciente.
➢ Que el método sea apropiado para el tipo
de muestra a analizar.
➢ Determinar si el Laboratorio cuenta con
personal capacitado para el análisis a
realizar.
➢ Determinar si el Laboratorio cuenta con las
instalaciones y condiciones ambientales
requeridas para el análisis.
 ¿Cómo seleccionar e implementar un método
analítico nuevo?

➢ Descripción del procedimiento

incluyendo el alcance del método
analítico nuevo, incluyendo el alcance
del método (aplicabilidad, tipo), tipo de
compuestos.
➢ Detalle de reactivos, estándares de
referencia que se utiliza.
 ¿Cómo seleccionar e implementar un método
analítico nuevo?

➢ Lista de equipos y requisitos de

funcionamiento y rendimiento.

➢ Detalle de condiciones e
implementación del método,
incluyendo la preparación de la
muestra.
 ¿Cómo seleccionar e implementar un método
analítico nuevo?
➢ Definir los procedimientos estadísticos
y cálculos representativos.
➢ Definir los procedimientos para el
control de calidad en la rutina.
➢ Definir los gráficos representativos,
cromatogramas, espectros y curvas de
calibración.
➢ Definir los criterios de aceptación/
rechazo de los datos.
➢ Consideraciones de seguridad.
 Principios de la validación

1. Las medidas analíticas deberían realizarse para satisfacer un

requisito acordado (ej. con un objetivo definido).
2. Las medidas analíticas deberían realizarse con métodos y
equipos que previamente han sido probados para asegurar
su adecuación al uso.
 Principios de la validación

3. Las medidas analíticas realizadas en un lugar deberían ser

consistentes con las realizadas en otros lugares.
4. Las organizaciones que realizan medidas analíticas deberían
definir procedimientos adecuados de control y de
aseguramiento de calidad.
En el proceso de validación del
método los estudios para
determinar los parámetros de
desempeño se realizan usando
equipos dentro especificaciones,
que están trabajando
correctamente y que están
calibrados adecuadamente.

El operador que realiza los estudios debe ser

técnicamente competente con el fin de que sea capaz de
tomar decisiones apropiadas.
EJEMPLO: un procedimiento de
medición, habitualmente utilizado
para la medición de la concentración
en masa de nitrógeno en agua, puede
también validarse para la medición de
la concentración en masa de
nitrógeno en suero humano.

Guía ISO/IEC 99:2007, 2.45

NMX-EC-17025-IMNC-2018
EJEMPLO: un procedimiento de
medición, habitualmente utilizado
para la medición de la concentración
en masa de nitrógeno en agua, puede
también validarse para la medición de
la concentración en masa de
nitrógeno en suero humano.

Guía ISO/IEC 99:2007, 2.45

NMX-EC-17025-IMNC-2018
¿POR QUÉ ES NECESARIA LA VALIDACIÓN DE UN MÉTODO?

*Importancia de las mediciones analíticas

*Todos los aspectos de la

sociedad se apoyan en el
trabajo analítico.
El costo de llevar a cabo mediciones erróneas puede derivar en
costos adicionales.

Ensayos que demuestren que los alimentos no son aptos para el

consumo pueden derivar en indemnizaciones; los ensayos que
confirman la presencia de sustancias prohibidas pueden
generar sanciones económicas, encarcelamiento o incluso, la
ejecución. Clostridium botulinum

Es importante hacer una

correcta medición y ser capaz
de demostrar que el
resultado es correcto.
 El deber profesional del químico analítico

“Brindar confianza al cliente”

La validación del método permite demostrar que un método es

'adecuado para el uso previsto’
 Cuando un
Antes de método ya
introducirlo validado
como cambia
método de alguna de
rutina Cuando se
¿Quién debe sus
desarrolla un
hacer la condiciones
método
validación del nuevo para
Cuando se
método y con modifica un un problema
método particular Cuando se
qué establecido para
incorporar usan
frecuencia? mejoras o métodos no
ampliarlo hacia normalizados
un Cuando se
nuevo problema debe
demostrar la
equivalencia
entre dos
métodos
 ¿Quién debe hacer la validación del método y con qué
frecuencia?

➢Debe ser asignada a personal calificado, provisto de

los recursos adecuados y debe ser una actividad
planificada.

➢La validación del método se deberá realizar en forma

inicial y/o cuando existan cambios críticos en la
metodología, equipos, instalaciones, etc.
¿PARA QUÉ SE USA LA VALIDACIÓN DE LOS
MÉTODOS?

1. Para controlar el método

2. Para aprender las características y capacidades del método
3. Para conocer las limitaciones del método
4. Para contar con una base para la estimulación de la
incertidumbre de la medición
5. Para diseñar el control de calidad
Incertidumbre

La incertidumbre en lo que respecta a medición y calibración es el “tamaño de

la duda” que existe en una medición. Conociendo la incertidumbre podemos
saber la calidad de una medición y decidir si es adecuada o no para un uso
concreto.

“Incertidumbre no significa error”

El error es la diferencia entre la medición realizada por nuestro instrumento y
la realizada por el instrumento estándar de referencia.
La incertidumbre está asociada a la calidad de la calibración o de la medición
realizada e implica la repetibilidad y la previsibilidad.
Incertidumbre
 Ejemplo
Supongamos que solicita a tres personas que midan un pedazo
de cuerda. Pueden utilizar el instrumento que deseen para medir
y de la manera que lo deseen. Tres posibles respuestas serían:

1. La persona “A” dice que la cuerda mide 90 cm. Para llegar a

esta conclusión, utilizó una regla de plástico de 30 cm;
2. La persona “B” concluye que la cuerda mide 100 cm. Utilizó
una cinta métrica de 3 metros para llevar a cabo la medición;

3. La persona “C” utilizó una cinta métrica de precisión e

informó que la cuerda mide 97,5 cm, con una incertidumbre de
más o menos 0,5 cm. Realizó el procedimiento varias veces para
calcular la media y encontrar la desviación estándar. Como
resultado, además de la medición, obtuvo los parámetros que
indican su calidad.
 ¿Cómo debe validarse un método?

¿Quién debe validar un método?

Estrategias para validar un método

Desarrollar el método y documentar en detalle el

procedimiento de medición.

Existen dos estrategias fundamentales; el uso de

resultados interlaboratorios y la validación del
laboratorio individual.
 ALGUNAS DEFINICIONES

Exactitud

Proximidad entre el resultado de una medición y el valor verdadero del

mesurando. Es la combinación de la precisión y la veracidad.

Mensurado: magnitud particular sometida a medición

 Formas de determinar la exactitud

Prueba de un material de referencia

Material, suficientemente homogéneo y estable con respecto a una o

más propiedades especificadas, para el cual ha sido establecida su
aptitud para un uso determinado en un proceso de medición.

Deduccción a apartir de los datos de especificidad y linealidad

Comparación con un método reconocido como exacto (método de

referencia).
La veracidad (de un método) es una expresión de que
tan cercana se encuentra la media de un conjunto de
resultados (producidos por el método) respecto del
valor real.
La precisión

Es una medida de que tan cercanos están los resultados unos

con respecto a los otros y por lo general se expresa mediante
medidas tal como la desviación estándar la cual describe la
dispersión de los resultados. Se establece en términos de
repetibilidad y reproducibilidad.

“De modo que, una aparato será preciso cuando la diferencia entre diferentes
mediciones de una misma magnitud sean muy pequeñas”.
Baja exactitud, mala Baja exactitud, buena
precisión y buena precisión y mala
veracidad veracidad
 Repetibilidad
Proximidad de la concordancia entre
los resultados de las mediciones
sucesivas del mismo mensurando, con
las mediciones realizadas con la
aplicación de la totalidad de las
siguientes condiciones:

✓ El mismo procedimiento de
medición,
✓ El mismo observador
✓ El mismo instrumento de medición
utilizado en las mismas
condiciones,
✓ El mismo lugar
✓ La repetición dentro de un periodo
corto de tiempo.
(VIM 3.7.NMX-Z-055-IMNC-1996)
 Reproducibilidad

Proximidad de la concordancia entre los resultados

de las mediciones del mismo mensurando, con las
mediciones realizadas haciendo variar las
condiciones de medición.

Para que una expresión de la reproducibilidad sea

válida, es necesario especificar las condiciones que
se hacen variar. Las condiciones que se pueden
hacer variar son:
✓ El principio de medición
✓ El método de medición
✓ El observador
✓ El instrumento de medición
✓ El patrón de referencia
✓ El lugar
✓ Las condiciones de uso
✓ El tiempo (varios días)
(VIM 3.7.NMX-Z-055-IMNC-1996)
 ANALITO. Componente
específico de una muestra a
medir.

CALIBRACIÓN. Conjunto de
operaciones que determinan la
relación entre los valores
indicados por un instrumento
de medición, los valores
conocidos correspondientes a
un patrón de referencia.
 Límite de detección

La menor concentración del analito en una muestra,

que puede detectarse, pero no necesariamente
cuantificarse bajo las condiciones establecidas de la
prueba.

Cuando las mediciones se realizan para niveles bajos

del analito o sus propiedades, por ejemplo en análisis
de trazas, es importante conocer cual es la
concentración más pequeña del analito o el valor de
propiedad que puede ser confiablemente detectada
por el método.

ISO utiliza como término general “valor mínimo

detectable del estado variable neto”, el cual puede
traducirse como: “concentración” mínima neta
detectable.
(NATA Tech Note # 13, Eurachem “The fitness for purpose of Analytical Methods” 1998)
 Límite de cuantificación

Es la concentración más baja del analito que puede

determinarse con un nivel de incertidumbre
aceptable.
(Eurachem “Guide to quality in Analytical Chemestry”)

“La menor concentración de un analito que puede

ser determinada con una precisión aceptable
(repetibilidad) y exactitud bajo las condiciones
establecidas de la prueba.”
NATA Tech Note #13

Debe establecerse empleando materiales de referencia o muestras

apropiadas.
 Intervalo lineal

La linealidad es la capacidad de un método de análisis, dentro de un

determinado intervalo, de dar una respuesta o resultados
instrumentales que sean proporcionales a la cantidad del analito que se
habrá de determinar en la muestra de laboratorio.
 Intervalo de trabajo

Es el intervalo entre el
nivel más bajo y más alto
de concentración que ha
sido demostrado que
puede ser determinado
con la precisión y
exactitud requeridas para
una determinada matriz.
 Selectividad o especificidad

✓ La selectividad es el grado en que un método puede cuantificar o

calificar al analito en presencia de interferentes. Estos interferentes
normal o frecuentemente se encuentran en la matriz de interés.

✓ La capacidad de un método para determinar exactamente y

específicamente el analito de interés en la presencia de otros
componentes en la matriz bajo condiciones de prueba establecidas.
LINEALIDAD. Capacidad de un método analítico de
producir resultados que sean directamente, o por
medio de una transformación matemática definida,
proporcionales a la concentración de analito en la
muestra.

Veracidad. Proximidad entre el promedio de una

serie grande de resultados y el valor verdadero
del medido.
 VALIDACIÓN DE MÉTODO

➢ La linealidad del sistema se evalúa utilizando al menos 5

preparaciones de concentración conocida (estándar de
referencia) y evaluando cada una de ellas al menos por
triplicado.
➢ Una vez evaluadas las preparaciones, se determina la
medida de la respuesta y su coeficiente de varianza.
➢ La curva de calibración se construye por medio de una
regresión lineal donde la abscisa siempre es la
concentración y la ordenada siempre es la propiedad
medida.
 ESPECIFICIDAD

La especificidad, es la capacidad de un
método analítico para obtener una respuesta
debida únicamente al analito de interés y no
a otros componentes de la muestra.
 ESPECIFICIDAD

LA METODOLOGIA DEL ENSAYO

VARIA SEGÚN EL TIPO DE MÉTODO ASÍ:
1. PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN.
2.PRUEBAS DE PUREZA.
3. VALORACIONES
 ESPECIFICIDAD

Pruebas de Identificación
Garantizan la identidad del analito.
• En análisis cualitativo debe demostrarse la
capacidad de distinguir compuestos de
estructura estrechamente relacionada cuya
presencia resulta probable.
 ESPECIFICIDAD

Pruebas de Pureza. Garantizan que todos los

procedimientos analíticos efectuados permiten
declarar con exactitud el contenido de impurezas de
un analito (por ejemplo, prueba de sustancias
relacionadas, límites de metales pesados,
impurezas orgánicas volátiles).
 ESPECIFICIDAD

Valoraciones.
Proporciona un resultado exacto, que permita una
declaración exacta del contenido o potencia del
analito en una muestra.
 TIPOS DE MÉTODOS
1. MÉTODOS NORMALIZADOS

Método analítico desarrollado por un

organismo de normalización u otro
organismo reconocido cuyos métodos
son generalmente aceptados por el
sector técnico correspondiente.
MÉTODOS NO NORMALIZADOS

Método analítico desarrollado por tercero o

que ha sido adaptado por el laboratorio a
partir de un método normalizado.

Nota. El desarrollo del método, así como su

adaptación, incluye la validación.
 MÉTODOS DESARROLLADOS POR EL LABORATORIO

Método analítico que no se encuentra en normas

u otras colecciones de métodos, ni en
publicaciones de terceros, habiendo sido
desarrollado por el propio laboratorio.

Nota. El desarrollo del método incluye la etapa de

su validación.
 ¿Cuándo debe validarse o verificarse un método?

Validación de un método Verificación de un método

Debe ser validado cuando es necesario Para los métodos normalizados, no es

demostrar que sus características de necesario validar el método utilizado por el
desempeño son adecuadas para el uso laboratorio. Sin embargo, el laboratorio
previsto. necesita verificar el desempeño del método
como se detalla en algunas normas.
 ¿Qué métodos se validan?

Los métodos normalizados no se validan, pero es necesario

llevar a cabo la verificación o aplicabilidad del método
analítico.

Se deben validar los métodos analíticos desarrollados

internamente o desarrollados por otros laboratorios.
Los métodos normalizados que hayan sido modificados de
forma significativa.
 Validación de métodos analíticos

La validación de métodos analíticos requiere:

➢Instrumentos calificados y calibrados

➢Métodos documentados

➢Patrones de referencia confiables

➢Analistas calificados

➢Integridad de la muestra
 VARIACIÓN

¿Por qué se origina la

variación?

Existen diversos
factores:
La variación siempre estará
presente en cualquier
proceso de análisis. Mano de obra
Materia prima
Medio ambiente
Método
Equipos
Su variación está originada
por una causa bien
definida. Es decir si se
conoce su causa… se puede
eliminar.
Qué herramientas estadísticas podría utilizar?

❑Pruebas de hipótesis T y F; intervalos de confianza.

❑Análisis de varianza de uno o dos factores y/o análisis
multivariado.
❑Regresión lineal con gráficos de residuales e intervalos de
confianza.
❑Diseño factorial completo y fraccionado.
❑Entre otras herramientas.
¿Cómo inicio con la validación?

1. Clasificar tus métodos de análisis

Etapas para desarrollar un método
analítico
VALIDACIÓN DEL SISTEMA
 Precisión del sistema

METODOLOGÍA

1. Preparar por lo menos un sextuplicado de soluciones a las

concentraciones del analito que represente la concentración de
la solución de referencia utilizada en ciertos casos, la
concentración de la solución que represente el 100% de la
muestra procesada para su medición.
2. Preparadas por dilución o por pesadas independientes.
3. Mediar la respuesta analítica.
 CÁLCULOS

Se requiere calcular la medida (o

promedio), la desviación estándar y

el coeficiente de variación.
 Criterios de aceptación

1. Métodos físicos químicos CV ≤ 1.5%

1. Métodos biológicos CV ≤ 3%

2. Valores superiores u otro criterio de aceptación debe

ser justificado.
 FÓRMULAS

FROMEDIO DESVIACIÓN ESTANDAR

VARIANZA COEFICIENTE DE VARIACIÓN

Linealidad del sistema

Se debe comprobar, a partir de la

tendencia lineal, que el valor de la
pendiente es diferente a cero (b≠0).
REGRESIÓN LINEAL SIMPLE Y CORRELACIÓN

Método matemático que modela la relación entre una variable

dependiente Y, las variables independientes Xi y un término
aleatorio ε.

La regresión nos permite además, determinar el grado de

dependencia de las series de valores X e Y, prediciendo el
valor y estimado que se obtendría para un valor x que no
esté en la distribución.
REGRESIÓN LINEAL SIMPLE Y CORRELACIÓN

La correlación es la forma numérica en la que la

estadística ha podido evaluar la relación de dos o
más variables, es decir, mide la dependencia de
una variable con respecto de otra variable
independiente.
 REGRESIÓN LINEAL SIMPLE Y CORRELACIÓN

Toda función de la forma Y=a+bX determina, al

representarla en el plano una línea recta, donde X e Y
son variables y a y b son constantes. Por ejemplo:
Y=3+2X.
 REGRESIÓN LINEAL SIMPLE Y CORRELACIÓN

SIGNIFICADO DE a y b
a es la ordenada en el origen, es decir, es la altura a la
que la recta corta al eje Y. Se denomina también
término independiente.

b, también denominada pendiente es la inclinación de

la recta, es decir, es el incremento que se produce en
la variable Y cuando la variable X aumenta una unidad.
 REGRESIÓN LINEAL SIMPLE Y CORRELACIÓN

En la recta de regresión b recibe el nombre de

Coeficiente de regresión.

Si b>0, entonces cuando X aumenta Y también lo hace

(relación directa).
Si b<0, entonces, cuando X aumenta Y disminuye
(relación inversa).
 EJERCICIO

Encontrar si la demanda de un arítulo depende del precio del mismo.

x y
5 100
7 90
9 86
12 72
17 60
23 55
30 43
 ŷ = a + bX

a= y−bx n
nxy − (x)(y)
b= (nx2 − ((x)2

n( xy) − ( x)( y)

R2= (( n( x2) − ( x)2) * ((n( y 2) − ( y)2)
No. Datos x y xy x2 y2
5 100 500 25 10000
7 90 630 49 8100
9 86 774 81 7396
12 72 864 144 5184
17 60 1020 289 3600
23 55 1265 529 3025
30 43 1290 900 1849
Total 103 506 6343 2017 39154
120
Precio vs demanda
100

80

60

40
y = -2.1986x + 104.64
20
R² = 0.9404
0
0 5 10 15 20 25 30 35
Cinco niños de 2, 3, 5, 7 y 8 años de edad pesan,
respectivamente, 14, 20, 32, 42 y 44 kilogramos.

1. Hallar la ecuación de la recta de regresión de la

edad sobre el peso.

2. ¿Cuál sería el peso aproximado de un niño de 6

años?
Edad Peso

x y xy x2 y2
2 14 28 4 196
3 20 60 9 400
5 32 160 25 1024
7 42 294 49 1764
8 44 352 64 1936
Suma:
25 152 894 151 5320
n=5
 ŷ = a + bX

a= y−bx n
nxy−(x)(y)
b=
(nx2−(x)2)

n(xy)−(x)(y)
R2= ( nx2−x2)*((n(y2)−(y)2)
a = 4.65

b= 5.15

y = 4.65 +5.15x

Respondiendo a la pregunta

y= 4.65 + 5.15 (6)

y = 4.65 + 30.9

y = 35.55 kg es lo que pesará un niño de 6 años.

 Peso vs edad
50
R² = 0.9877
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9