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Validar Métodos
y los tópicos relacionados
Ricardo Weisser W
interpretación de
documento del Centro Analítica Ltda.
weisser@analítica.cl
www.analitica.cl
(09)2243707
1
para promover buenas practicas en las mediciones analíticas se han identificado seis principios,
que utilizados en conjunto, constituyen la mejor práctica!
•interpretamos validar, como elegir un proceso analítico y demostrar experimentalmente que este
método considerado tiene las capacidades consistentes con los requerimientos de la aplicación.
Las consideraciones para determinar la adecuación del método son importantes
•esta implícito en un proceso de validación que los equipos estén en buen funcionamiento y
adecuadamente calibrados; así como el estudio debe ser llevado por operadores competentes en
la especialidad con suficientes conocimientos para tomar decisiones en la materia para llevar
adelante el estudio
validación de método esta íntimamente relacionado con el desarrollo de los mismos,
efectivamente no se puede definir cuando comienza la validación
•virtualmente cada aspecto social y/o comercial esta soportado por mediciones analíticas
•el costo de las mediciones pero los costos adicionales por la toma de decisiones en base a los
resultados es inmensa, por lo que la capacidad de demostrar que los resultados son correctos es
fundamental
•para que un resultado analítico se ajuste a su objetivo debe ser seguro y confiable para la
decisión, condición que requiere de la performance del método sea validada y su incertidumbre
estimada a un nivel de confianza determinado
la responsabilidad del muestreo debe quedar claramente establecida y estipulada en el informe
•un método debe ser validado para confirmar que sus parámetros son adecuados para el uso del
objetivo analítico; como:
método nuevo para un objetivo particular
método establecido para incorporar nuevos alcances
cuando control de calidad indica que el método ha cambiado con el tiempo
métodos establecidos usados en distintos laboratorios, analistas o instrumentos
para demostrar la equivalencia de dos métodos
c)requerimientos analíticos!
6.9-enfrentando el laboratorio un problema analítico particular, idealmente debe acordar con el
cliente los requerimientos analíticos para definir los requerimientos de performance del método
que debe resolver el problema analítico. Para esto el laboratorio puede buscar métodos existentes
o desarrollar uno nuevo. Este proceso de desarrollo y evaluación continúa hasta que cumpla con
los requerimientos, más desarrollo ya no es requerido y los análisis pueden comenzar.
este proceso de evaluación de criterio de performance y confirmación de cumplimiento puede
gráfica de acuerdo al esquema #1 siguiente y la tabla #1 muestra las preguntas y requerimientos
de performance que debe cumplir:
método proceda
validación de con
no cumple:
a etapa
consiste en est análisis
subcontrate?
de evaluación
ar al
Se debe ajust
importar
propósito sin re establecer
fin
es
las condicion
condiciones
Deben ser comparados los análisis con Rugosidad/Robustez; Precisión de reproducibilidad 6.45;6.37-
otros laboratorios? 6.38;6.40
Deben ser los resultados comparados Exactitud Precisión de reproducibilidad 6.30;6.36
con especificaciones externas? 6.37;6.38
6.40
6.11-desarrollo de métodos puede tomar diferentes formas: adaptando métodos con pequeños
cambios para casos de matriz similar y comportamiento parecido del analito. Es así que el mismo
principio de aislar o extraer, identificar y cuantificar; en cambio si cambia la matriz de acuosa a
orgánica es preferible elegir otro método!
6.12-como otro extremo es comenzar con ideas y pruebas nuevas, condición que es mas difícil
larga y costosa.
confirmación de identidad y
selectividad -
Que hacer cuantas calcule y determine comentarios
veces
analice muestras y material 1 use los resultados de las decida que
de referencia por métodos técnicas confirmatorias para evidencia es
independientes asegurar la identidad del razonable para dar
analito y que se mide libre suficiente confianza
de interferencias
analice muestras con 1 examine el efecto de los si la cuantificación
sospecha de interferencia interferentes; aumenta o es inhibida, mas
con la presencia del analito inhibe la detección o desarrollo del
de interés cuantificación del analito? método es
requerido
limite de detección
Que analizar Que calcular con los datos
a)lea 10 blancos de muestra la desviación estándar de las lecturas a) y b)
independientes ó b)lea 10 blancos de Exprese el LdD como la concentración del
muestra fortificadas a la mínima analito correspondiente a a)la media del
concentración aceptable blanco de muestra +3s ó b) 0+3s
Esto supone que una señal 3s sobre el blanco puede solo existir menos que el 1% de
las veces, por lo que se supone que proviene de algo distinto, el mesurando.
Caso a) es solo útil cuando el blanco da una DS distinta de cero
c)10 blancos de muestras independientes la desviación estándar "s" de los blancos
fortificados con la mínima concentración fortificados expresan LdD como la
aceptable concentración del analito correspondiente al
valor del blanco +4,65s (de la hipótesis de
test)
La mínima concentración aceptable es la concentración mínima para la cual se puede
definir un grado de incertidumbre aceptable
Consideramos evaluar blancos y muestras separadamente donde corregimos los
blancos restando la concentración del analito de la concentración de la muestra
correspondiente al blanco.
Si estas mediciones se hacen en condiciones de repetibilidad, es medición de precisión
de repetibilidad.
6.22- Se advierte que tanto la media y la desviación estándar de muestras blanco son
dependientes de la matriz. LdD será dependiente por lo tanto de la matriz
6.23- para análisis cualitativos también existe un umbral de concentración por debajo del cual la
especificidad se hace no confiable.
limite de cuantificación:
6.24- el límite de cuantificación es estrictamente la menor concentración del analito que puede
ser determinada con aceptable precisión de repetibilidad y veracidad. Es definida por varios
acuerdos como la concentración del analito de la muestra blanco mas 5, 6 ó 10 desviaciones
estándar de la media del blanco. Se conoce también como límite de determinación. LdQ es una
concentración indicativa con la que no se debe tomar decisiones.
6.25- recuerde que tanto LdD como LdQ representan valores donde la cuantificaron es imposible.
Es simplemente que el tamaño de la incertidumbre asociada se aproxima a la del valor del
resultado en la región de LdD
6.33- validación debe ajustarse al propósito, por lo que la elección del material de referencia
depende del objetivo. El material de referencia debe ser apropiado para el uso:
• para trabajo reglamentario el MR debe ser MRC y de igual a la matriz
• para métodos rutinarios propios, material de referencia estable interno o MRC son apropiados.
• para análisis no rutinarios estándares preparados o fortificaciones son suficientes
6.34- para chequear con un método alternativo: compara los resultados de dos métodos con la
misma muestra(s), que pueden ser material de referencia interno del laboratorio, muestras típicas
o MRC. Hay ventajas al utilizar MRC dado que cuentan con información de estabilidad,
homogeneidad y entregan el sesgo respecto a un estándar reconocido.
sesgo
media
inter
laborato
Repetibilidad y
Reproducibilidad
analice N° de calculo comentarios
replicas
todo efecto significativo adicional a lo anterior; como T° o rangos permitidos por el método. Efectos
que pueden ser medidos por robustez o rugosidad.
6.42- cuando la contribución de efectos es importante estos se deben considerar separadamente.
6.43- en consideración de estar fuera de un sistema colaborativo, la desviación estándar de la
reproducibilidad genera una incertidumbre de trabajo siempre que el sesgo del laboratorio sea
pequeño respecto a la reproducibilidad. La repetibilidad intermedia se compara con la del método
estándar siempre que esta sea menor a la publicada.
Sensibilidad:
6.44- es la pendiente de la curva de respuesta, es útil para ser introducido en el la formula de
calculo. Sensibilidad se utiliza incorrectamente para referirse a límite de detección.
Rugosidad:
6.45- es la medida de cómo la performance de un método resiste la implementación imperfecta;
hay pasos en un método que si no son realizados con cuidado suficiente pueden tener efectos
severos o no funcionar; estos pasos deben identificares y su influencia evaluarse con test de
robustez o rugosidad; estos test se realizan introduciendo deliberadamente variaciones
controladas en el método. Estudios de rugosidad normalmente investiga el efecto sobre la
precisión y exactitud.
Robustez o
rugosidad
Recuperación
analice N° de calculo comentarios
replicas
Ricardo Weisser