METODOLOGIA:

2.1. Materiales y productos químicos:

Monosacáridos estándar (galactosa, ramnosa, glucosa, ácido galacturónico (GalA),

manosa, xilosa y arabinosa), monohidrato de ácido cítrico, hexametildisilazano, ÿfenilglucósido,

estándar de pululano (0,34–805 kDa), un polímero compuesto por ÿ(1, 6) se

adquirieron unidades de mal totriosa unidas y ácido trifluoroacético de Sigma (St.

2.2. Material vegetal

Las cascaras de las mazorcas de cacao (CPH) eran de Tapachula en Chiapas, México. Las mazorcas
de cacao enteras se enjuagaron con agua; las semillas de cacao se extrajeron

manualmente de las vainas y la cáscara se molió hasta obtener una pasta con una licuadora

semiindustrial. Luego, la pasta se secó en una cámara de secado a 60 °C hasta obtener una materia
seca con un contenido de agua menor a 8 %. Luego se molió utilizando un molino de laboratorio
con tanque de molienda y se tamizó para tener un tamaño de partícula 0,5 mm.

2.3. Caracterización físico-química de muestras

Previo a las extracciones de compuestos fenólicos y pectinas, se realizó un estudio de

la composición química. El contenido de materia seca se determinó gravimétricamente (consiste

en tomar una muestra, pesarla antes y después de su desecado y calcular su contenido de
humedad) el contenido de cenizas se analizó por calcinación a 500–550 °C en un horno durante 2
h; Se utilizó el método de Bradford para medir el contenido de proteína (el método Bradford es de
naturaleza colorimétrica, es decir, que obtiene resultados en base a los colores. Si no hay
proteínas en el medio acuoso, la mezcla permanece de un color marrón). Se aplicó el método del
ácido fenolsulfúrico para estimar el contenido total de carbohidratos (es un método colorimétrico
simple y rápido para determinar los carbohidratos totales en una muestra. El método detecta
virtualmente, todas las clases de hidratos de carbono, incluyendo los monosacáridos,
disacáridos, oligosacáridos y polisacáridos) y la cantidad de azúcares reductores se estimó por
DNS (El método DNS es una técnica colorimétrica que emplea 3,5-ácido dinitrosalicílico para la
hidrólisis de polisacáridos presentes en una muestra, seguido de la determinación
espectrofotométrica de los azúcares reductores) siendo la glucosa el estándar. utilizado para
ambas medidas. Los contenidos de fibra dietética soluble, fibra dietética insoluble y fibra dietética
total se midieron aplicando los métodos AOAC 991.43 (AOAC, 2016). La estimación del contenido
fenólico se realizó empleando ácido gálico como patrón y el reactivo de Folin-Ciocalteu (Se basa en
que los compuestos fenólicos reaccionan con el reactivo de Folin-Ciocalteu, a pH básico, dando
lugar a una coloración azul susceptible de ser determinada espectrofotométricamente a 765
nanometros
Un fluido supercrítico es cualquier sustancia que se encuentre en condiciones de presión y
temperatura superiores a su punto crítico, lo que hace que se comporte como un híbrido entre
un líquido y un gas, es decir, puede difundir como un gas, y disolver sustancias como un líquido.

2.4. extracción de pectina

Antes de la producción de pectina, una cierta cantidad de CPH se sometió a una

extracción con fluido supercrítico para recuperar los polifenoles. Las condiciones optimizadas

aplicadas en el procedimiento de extracción fueron de 5 g de CPH seco, 300 bar, caudal de 6

mL/min de CO2 y etanol al 13,7% como codisolvente durante 150 min. Los residuos se recogieron
en viales para una mayor extracción de pectina. Los rendimientos se calcularon según la fórmula:

2.4.1. Extracción convencional (CE)

El polvo resultante de los procesos anteriores se suspende en una solución de acido cítrico al 4%.
Posteriormente, la mezcla estuvo en agitación continua a 95 °C durante 95 min. Luego, la mezcla
se centrifugó a 3700 g y 4 °C durante 15 min. Se mezcló etanol con el sobrenadante (lo que queda
por encima) y se mantuvo a 4 °C durante 16 h para precipitar la pectina. Se realizó una
centrifugación a 3700 g durante 30 min a 4 °C para recuperar los residuos de pectina. Después los
residuos de pectina se lavaron tres veces con etanol anhidro y las muestras de pectina se
liofilizaron (Deshidratar una sustancia para su conservación sometiéndola a una rápida
congelación y eliminando el hielo posteriormente mediante un ligero calentamiento al vacío que
lo transforma en vapor).

2.4.2. Extracción de agua subcrítica

El agua subcrítica es agua sobrecalentada cuya temperatura está

comprendida entre el punto de ebullición 100 °C y la temperatura crítica 374 °C y que

se mantiene líquida por efecto de la presión. Las condiciones

de extracción empleadas fueron 121 °C, 103,4 bar y 30 min. La

celda de extracción se calentó durante 6 min, antes de cada experimento. Asimismo, todos

los tratamientos se realizaron en celdas de extracción de 11 mL, conteniendo 0,4 g de

muestra. Los extractos obtenidos se adicionaron con etanol (96%). La mezcla se mantuvo durante
16 h a 4 °C para precipitar la pectina. Posteriormente, la mezcla se centrifugó a 1700 g durante 30
min a 4 °C. Los precipitados se lavaron con etanol y liofilizaron
Es etanol obtenido a partir de deshidratación limpia (tamices moleculares) de alcohol
rectificado, con pureza mínima de 99,6% v/v. El Alcohol Etílico Anhidro se obtiene de la
destilación de mostos frescos de melaza de caña y posterior deshidratación.

2.5.4. Análisis morfológico de la pectina extraída del cacao

Observaciones morfológicas de la pectina extraída por los diferentes. Los procesos se realizaron
mediante microscopía electrónica de barrido (SEM) Las muestras se montaron en talones de
aluminio con adhesivo de doble cara cinta metálica conductora y metalizada al vacío con oro-
paladio.

Conclusión

En este estudio el uso de una técnica amigable con el medio ambiente como es el agua

subcrítica nos permitió obtener pectina como compuesto de alto valor agregado a partir de

subproductos de la cáscara de la mazorca de cacao. Las características más llamativas

fueron: mayor rendimiento de pectina, mayor contenido de ácido galacturónico y mayor grado

de esterificación de metilo utilizando SWE en comparación con la extracción convencional

con ácido cítrico. Además, como lo refleja la estimación de masa molecular y composición

monomérica, la pectina subcrítica del agua presentó menos compuestos de interferencia

derivados de otros polisacáridos de la pared celular. Considerando que una extracción previa

de compuestos fenólicos mediante extracción con fluido supercrítico con CO2 no dio lugar a

ningún detrimento estructural en la pectina, una combinación de proceso verde integrado

empleando SFE, como primer paso para la recuperación secuencial de fenoles, y SWE como

segundo paso para la recuperación de pectina de CPH, constituye un enfoque ambientalmente

verde y una propuesta de gestión eficiente de residuos basada en biorrefinería que puede

generalizarse a otros subproductos.