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MECANISMOS DE REACTORES BIOQUÍMICOS

Crecimiento Celular

Según el autor Barba y Clausell (2014) en la forma del logaritmo de la

concentración de células vivas (kg/m3) versus tiempo. Inicialmente se inocula un

pequeño número de células junto con los nutrientes y el proceso de crecimiento

comienza.

 Fase I o de latencia. - . Hay un pequeño aumento de la concentración

celular. Las células se adaptan a su nuevo entorno, sintetizan enzimas y

se preparan para comenzar a reproducirse. Durante este tiempo las

células realizan funciones como sintetizar proteínas de transporte para

mover el sustrato al interior de la célula, sintetizar enzimas para utilizar

el nuevo sustrato y comenzar el trabajo para replicar el material genético

celular. La duración de la fase depende del medio de crecimiento del que

se tomó el inóculo en relación al medio de reacción en que es colocado.

 Fase II o de crecimiento exponencial. - La velocidad de crecimiento

celular es proporcional a la concentración de células. En esta fase las

células se dividen a la máxima velocidad posible porque todos los

caminos de reacción enzimáticos para metabolizar el medio están activos

(como resultado de la fase de latencia) y las células son capaces de

utilizar los nutrientes con mucha eficiencia.

 Fase III o estacionaria. - Las células alcanzan un mínimo espacio

biológico en el que la falta de uno o más nutrientes limita el crecimiento

celular. Durante esta fase la velocidad de crecimiento es cero como

resultado de la disminución o agotamiento de nutrientes y metabolitos

esenciales.
 Fase IV final o de muerte. - Se produce una disminución de la

concentración de células vivas como consecuencia de los subproductos

tóxicos y/o la disminución del suministro de nutrientes.

Figura….Etapas de crecimientos celular

Fuente: Barba y Clausell (2014)

Ecuaciones de diseño de un fermentador

Según Atkinson (1986) principio el rendimiento de un fermentador puede

predecirse si se conoce lo siguiente:

1. Las características cinéticas de los componentes reaccionantes y la

influencia de las variables operacionales.

2. Las restricciones externas impuestas por la configuración del fermentador

En general un fermentador se diseña mediante el uso de ecuaciones que expresan

los balances de materia, balances de calor, velocidades de reacción y velocidades de

fluido. El punto donde se inicia es la ley de conservación de materia global, mientras

que un balance de materia aplicado a un elemento de fluido muy pequeño se define

como un balance de materia aplicado a un elemento de fluido muy pequeño se define

como un balance diferencial de materia. En general para condiciones de estado


estacionario lo primero conduce a ecuaciones algebraicas mientras que lo último lleva a

ecuaciones diferenciales.

Según Atkinson (1986) estos conceptos pueden resumirse mediante las

siguientes identidades:

 Balance global de materia

Diferencia entre la velocidad Velocidad de pérdida de


=
de flujo de reactante a la reactante como resultado de la

entrada y a la salida del reacción

fermentador

Balance diferencial de materia

Suma algebraica de las diferencias en la Velocidad de pérdida de

velocidad de flujo del reactante a través = reactante como resultado de la

de las superficies de un elemento de reacción del elemento de fluido

fluido

Fermentación enzimática

Según el autor Atkinson (1986) puede definirse como la producción de alcohol a

partir de azúcar. En otras palabras, la fermentación son reacciones donde una materia

prima orgánica se convertirá en un producto por medio de la acción de microbios o por

la acción de enzimas.

Figura …Clasificación de los procesos biológicos


Fuente: Atkinson , (1986)

La ferementación enzimática pueden representarse por

( alimentación orgánica , A ) enzima E que actua como catalizador ( producto química, R )


Las fermentación microbianas pueden representarse por

microbio C
( alimentación orgánica , A ) ( producto , R ) + ( más celulas ,C )
que actua comocatalizador

CINÉTICA DE MICHAELIS-MENTEN (M-M)

Según el autor Atkinson (1986) la enzima correcta como catalizador, el

compuesto orgánico A reaccionará para producir R. Como se muestra en la figura… se

observa el comportamiento de las curvas típicas velocidad- concentración.

Figura…. Curvas típicas velocidad-concentración para las reacciones catalizadas

por enzimas

Fuente: Atkinson , (1986)

Una expresión simple que tiene en cosideracion este comportamiento es

C EO C A
−r A =r R=k
C M +C A

r R:Ecuación Michaelis-Menten
k :Constante de velocidad de reacción

−r A :Velocidada de la reaccion A(compuesto organico)

C M :Constante de Michaelis

C A:Concentración de A

C EO :Concentración de la enzima total

La cinética de Michaelis-Menten describe la velocidad de reacción de muchas

reacciones enzimáticas siendo solo válido cuando la concentración del sustrato es

mayor que la concentración de la enzima, y para condiciones de estado estacionario, o

sea que la concentración del complejo enzima-sustrato es constante (Quimica.es, 2022)

Con la foma de la ecuación de velocidad antes mencionada, el autor Atkinson

(1986) nos menciona que Michaelis y Menten propusieron el mecanismo siguiente el

cual incluye dos pasos elementales de reacción

1
A+ E X 3 R+ E C EO =C E +C x
2 →

A:Alimentacion organica

E:Enzima

R:Producto quimico

X: Producto intermedi

C x :Concentración de enzima enlazada al reactivo

C E :Concentración de enzima libre

C EO :Concentración de la enzima total


El autor Atkinson (1986) nos menciona algunas de las características especiales

de la ecuación de Michaelis-Menten son

 Cuando C A=C M , la mitad de la enzima está en forma libre y la otra

mitad combinada.

 Cuando C A ≥C M , la mayor parte de la enzima existe como complejo X.

 Cuando C A ≤C M , la mayor parte de la enzima existe en forma libre

C M :Constante de Michaelis

C A:Concentración de A

Fermentadores de tanque Agitado (FTA)

Según Levenspiel (2004) nos dice que al insertar la ecuación M-M en la

ecuación del reactor de tanque agitado se tiene:

C A 0 −C A ( C A 0 −C A ) ( C M +C A )
τ= =
−r A k3 C E0 C A

−r A :Velocidada de la reaccion A(compuesto organico)

C M :Constante de Michaelis

C E 0 : Concentración de la enzima total

C A:Concentración de A

C A 0: Concentración inicial de A

k 3:Constante de velocidad

τ :Tiempo para la conversión completa de una partícula de reactivo en producto


O

( C A 0−C A ) ( C M +C A )
k 3 C E 0 C A τ=
CA

−r A :Velocidada de la reaccion A(compuesto organico)

C M :Constante de Michaelis

C E 0 : Concentración de la enzima total

C A:Concentración de A

C A 0: Concentración inicial de A

k 3:Constante de velocidad

τ :Tiempo para la conversión completa de una partícula de reactivo en producto

El autor Levenspiel (2004) que no se puede idearse ninguna gráfica para calcular

las constantes k 3 y C M , pero reordenando una forma de la ecuación que si permite el

cálculo directo de las constantes.

C A=−C M + k 3
( C E0C A τ
C A 0−C A )
−r A :Velocidada de la reaccion A(compuesto organico)

C M :Constante de Michaelis

C E 0 : Concentración de la enzima total

C A:Concentración de A

C A 0: Concentración inicial de A
k 3:Constante de velocidad

τ :Tiempo para la conversión completa de una partícula de reactivo en producto

Fermentador intermitente o de flujo pistón

El autor Levenspiel (2004) para este sistema, la integración de la ecuación M-M

proporciona la siguiente ecuación:

C A0
C M ln + ( C A 0−C A ) =k 3 C E 0 t
CA

−r A :Velocidada de la reaccion A(compuesto organico)

C M :Constante de Michaelis

C E 0 : Concentración de la enzima total

C A:Concentración de A

C A 0: Concentración inicial de A

k 3:Constante de velocidad

τ :Tiempo para la conversión completa de una partícula de reactivo en producto

El comportamiento de concentración-tiempo se muestra en la siguiente

Figura…

Figura… Comportamiento concentración-tiempo de la ecuación M-M


Fuente: Levenspiel (2004)

El autor Levenspiel (2004) nos menciona que desgraciadamente la ecuación no

puede ser graficada directamente para encontrar los valores k 3 y C M , pero si se

reordenan términos se puede llegar a ala siguiente expresión

C A 0−C A t
=−C M +k 3 C Eo ×
C A0 C A0
ln ln
CA CA

−r A :Velocidada de la reaccion A(compuesto organico)

C M :Constante de Michaelis

C E 0 : Concentración de la enzima total

C A:Concentración de A

C A 0: Concentración inicial de A

k 3:Constante de velocidad

τ :Tiempo para la conversión completa de una partícula de reactivo en producto

Otros métodos para evaluar K y C M

Se han desarrollado una tradición de ajustar y calcular las constantes de la ecuación

M-M con un procedimiento de etapas múltiples:

 Medir primero C Aout contra τ para datos tomados en cualquiera de los tres

reactores ideales, intermitente, de tanque agitado o de flujo de pistón.


 Evaluar después, −r A para varias C A ya sea directamente a partir de los

C A 0−C A
datos obtenidos en el reactor de tanque agitado −r A = o bien
τ

calculando las pendientes de los datos del reactor intermitente o de flujo

pistón.

 Graficar C A contra −r A de una de las dos formas siguientes:

−r A
−r A contra …… la gráfica de Eadie
CA

1
1/−r A contra …… la gráfica de Lineweaver
CA

 Deducir C M y k a partir de las gráficas mencionadas

Según el autor Levenspiel (1985) nos menciona que reagrupando la ecuación

M-M se obtienes en el gráfico de Eadie.

−r A
C E0
=k 3−C M
(−r A
CE0 C A )
−r A :Velocidada de la reaccion A(compuesto organico)

C M :Constante de Michaelis

C E 0 : Concentración de la enzima total

C A:Concentración de A

C A 0: Concentración inicial de A

k 3:Constante de velocidad

τ :Tiempo para la conversión completa de una partícula de reactivo en producto


Figura…. Grafica de eadie

Fuente: Levenspiel (1985)

Mientras en el grafico de Lineweavez según el autor Levenspiel (1985) mediante

otra transformación de la ecuación M-M nos da:

−1 CM 1 1
= × +
−r A k 3 C E 0 C A k 3 C E 0

−r A :Velocidada de la reaccion A(compuesto organico)

C M :Constante de Michaelis

C E 0 : Concentración de la enzima total

C A:Concentración de A

C A 0: Concentración inicial de A

k 3:Constante de velocidad

τ :Tiempo para la conversión completa de una partícula de reactivo en producto


Figura….Grafico de Linewavez

Fuente: Levenspiel (1985)

Fermentación Microbiana

Para el autor Atkinson (1986) nos menciona que si el alimento es adecuado, los

bichos lo comen, se multiplican y en el proceso producen un material de desecho o

residual,R. En simbolos

A C C+ R

En algunos ocasiones, hay presencia del producto R inhiba la acción de las

células, sin importar cuánto alimento está todavia disponible. Se tiene así lo que se

denomina envenenamiento por el producto. Por ejemplo la fabricación de vino

( uvas , frutas , cereales , patatas prensadas ) bichos ( másbichos ) + alcohol


Conforme aumenta la concentración de alcohol, las células se multiplican más

lentamente, y cuando hay cerca de 12% de alcohol los bichos paran (Atkinson , 1986).

El alcohol es aquí el veneno o inhibidor.


Un ejemplo fermentación no inhibida por el producto es en el tratamiento de

aguas residuales con lodos activos

( material orgánico de desecho ) bichos ( másbichos )+ ( productos de ladescomposición )


Según Atkinson (1986) en ocasiones el interes se encuentran en la

descomposición de A (como en el tratamiento de agusa residuales) y en otras ocasiones

estará en producir celulas C (como en los procesos de crecimiento de levaduras) o en

otros donde se desa el material de desecho de las células R (como en la producción de

penicilina u otro antibiotico).

CINETICA MICROBIANA

Ecuación de velocidad para el crecimiento celular

Ecuación de Monod

Según el autor Barba y Clausell (2014) la expresión más utilizada es la ecuación de

Monod para la fase II de crecimiento exponencial:

r c =µ ×C c

r c :Velocidad de crecimiento celular

C c:Concentración de células

µ:Velocidad especifica de crecimiento

A su vez, la velocidad específica de crecimiento específico se puede expresar como:

Cc
µ=µmax ×
K s +C s

µ:Velocidad especifica de crecimiento


µmax: velocidad específica de crecimiento máxima

Ks : parámetro análogo a la constante de Michaelis-Menten

C s: concentración de sustrato

C c:Concentración de células

Si combianmos ambas ecuaciones:

Cc
r c =µ ×C c =µmax × × Cc
K s +C s

r c :Velocidad de crecimiento celular

µ:Velocidad especifica de crecimiento

µmax: velocidad específica de crecimiento máxima

Ks : parámetro análogo a la constante de Michaelis-Menten

C s: concentración de sustrato

C c:Concentración de células

En muchos sistemas el producto inhibe la velocidad de crecimiento. Un ejemplo

clásico de esta inhibición se da en la fabricación de vino, donde la fermentación de la

glucosa para producir etanol es inhibida por el producto etanol. Según el autor Barba y

Clausell (2014) hay diferentes ecuaciones para tener en cuenta la inhibición; una de

estas leyes de velocidad toma la forma:

r c =k obs × µmax ×
Cc
K s +C s ( )
cp n
×C c = 1− ¿ × µmax ×
Cp
Cc
K s+C s
× Cc

r c :Velocidad de crecimiento celular


µ:Velocidad especifica de crecimiento

µmax: velocidad específica de crecimiento máxima

Ks : parámetro análogo a la constante de Michaelis-Menten

C s: concentración de sustrato

C c:Concentración de células

c p:Concentración de producto

¿
C p:Concentración de producto a la que todo metabolismo cesa

n: Constante empírica

Además de la ecuación de Monod, otras dos ecuaciones se utilizan

habitualmente para describir la velocidad de crecimiento celular:

Ecuación de Tessier

[ ( )]
r c =µmax × 1−exp
Cs
k
× cc

r c :Velocidad de crecimiento celular

µmax: velocidad específica de crecimiento máxima

C s: concentración de sustrato

C c:Concentración de células

Ecuación de Moser

µmax
rc= ×c c
[ 1+k × c s × exp (−λ ) ]
r c :Velocidad de crecimiento celular

µmax: velocidad específica de crecimiento máxima

C s: concentración de sustrato

C c:Concentración de células

Fermentador de tanque agitado

Según el autor Levenspiel, (2004) nos dice que en este caso las celulas se

encuentran en un medio ambiente uniforme. No hay necesidad de alguna adaptación y la

multiplicación de las células tiene lugar a una velocidad constante, determinada por la

composición del fluido en el reactor. Esto se represneta frecuentemente por una

ecuación tipo Monod.

k C A Cc
−r c =
C A +C M

−r C :Velocidada del crecimiento de celulas

C M :Constante de Monod

C A:Concentración de A

k 3:Constante de velocidad

En este caso el valor de k depende de todo tipo de parametros como la

temperatura, presencia de elementos en baja concentración, vitaminas, sustancias

tóxicas, intensidad de la luz, etc.

Fermentadores intermententes o de flujo pistón


Según el autor Levenspiel, (2004) nos dice que aplicando la ecuacion del diseño

se encuentra que :

Cc Cc
d C c 1 C A +C M
t b=τ p=∫ = ∫ d Cc
C c0
rc k C CA Cc
c0

τ p:

t b:

Cc

∫ ❑: Integral de la dereivada concentración de células con respecto Velocidad del


Cc 0

crecimiento de celulas desde Concentración inicial de células hasta Concentración de

células

C M :Constante de Monod

C A:Concentración de A

r C :Velocidada del crecimiento de celulas

C c:Concentración de células

C c0 :Concentración inicial de células

Que integrando proporciona

( ) ( )
CM Cc CM CA
kt b=k τ p= + 1 ln −¿ ln ¿
A Cc0 A CA 0
C A 0+ C c 0 C A 0 + C c0
C C

A
:Rendimientos fracionales
C

C c:Concentración de células
C c0 :Concentración inicial de células

C M :Constante de Monod

C A:Concentración de A

Según el autor Levenspiel, (2004) nos dice que si existe un periodo de inducción

o retardo, simplemente se puede escribir la ecuación de diseño en función de C R en lugar

de C A y C c, solamente se debe de recordar que

R R
C R =C R 0 + ( C −C c 0 )=C R 0+ A ( C A 0−C A )
C c

A
:Rendimientos fracionales
C

C c:Concentración de células

C c0 :Concentración inicial de células

C M :Constante de Monod

C A:Concentración de A

C R 0 :Concentración inicial de retardo

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