CITOMETRA DE FLUJO

PRESENTADO POR:
Torres Garcia, Maziel
Santos Medina, Mariliz

CITOMETRA DE FLUJO
INTRODUCCIN

CONCEPTO

se inici en la dcada de los 60 como un importante avance en

el proceso de contar y medir el tamao de partculas o clulas
en poblaciones no homogneas.

Aparato que es capaz de medir componentes y propiedades

de clulas y organelos celulares (partculas biolgicas) que
fluyen en una suspensin celular.

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APLICACIONES:
La CMF se puede emplear para
estudiar caractersticas estructurales y
funcionales de clulas o partculas en
suspensin.
Las aplicaciones fundamentales de
esta tcnica se dan en biologa y
medicina y son la identificacin de
antgenos celulares mediante tcnicas
de inmunofluorescencia y el estudio
del contenido de ADN y fases del ciclo
celular.

LA CMF SE HA UTILIZADO

En hematologa
En farmacologa
En inmunologa
En oncologa
En microbiologa
En gentica

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PROCESAMIENTO DE LAS
MUESTRAS:

La muestra a analizar debe

encontrarse
en
forma
de
suspensin
monodispersa.
Hay
muestras como la sangre perifrica,
mdula sea, o otros fluidos
biolgicos, que precisan de un
mnimo procesamiento; en cambio
los tumores slidos o las muestras
parafinadas necesitan de una
disgregacin ms o menos intensa
(mecnica, enzimtica, etc.).

CARACTERISTICAS GENERALES
DE LOS CITMETROS DE FLUJO:

Para la lectura por Citometra de

flujo, las clulas son teidas con
fluorocromos
que
se
unen
especficamente
a
un
constituyente celular.
Las clulas son inyectadas en un
flujo lquido laminar y pasan una a
una por un punto de medida
iluminado con luz de alta
intensidad (lser).

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La Citometra de Flujo es una tcnica de anlisis celular multiparamtrico cuyo
fundamento se basa en hacer pasar una suspensin de partculas (generalmente
clulas) alineadas y de una en una por delante de un haz de lser focalizado.

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ESTRUCTURA BSICA DE UN CITMETRO DE FLUJO

SISTEMA FLUDRICO - Inyeccin de la

muestra.

- Cmara de
flujo.
* SISTEMA OPTICO
- Fuentes de
luz.
- Detectores
* SISTEMA ELECTRICO - Amplificador
convertidor
- Sistema
informtico

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SISTEMA FLUDRICO:

Este sistema consta de dos

fluidos, uno que contiene en
suspensin a la muestra y otro
que lo envuelve a fin de darle
estabilidad). Las clulas deben
pasar una a una por delante
del haz del lser. Ambos
fluidos (Solucin fisiolgica,
PBS, aire) no se mezclan
porque circulan a diferente
presin.

SISTEMA PTICO:

Este sistema se compone de dos tipos

de pticas:
-La ptica de excitacin, compuesta
de el lser y las lentes para enfocar y
dirigir el haz de luz; y
-La ptica de lectura, compuesta por
las lentes de recoleccin de luz emitida
luego de la interaccin entre el haz del
lser y las partculas y el sistema de
espejos y filtros para direccionar
longitudes de onda especficas hacia
los detectores correspondientes.

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SISTEMA ELECTRICO: El sistema
electrnico convierte todo en seales
digitales para almacenar en la
computadora

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INFORMACION OBTENIDA POR CITOMETRIA DE FLUJO

Bsicamente podemos obtener los siguientes datos:

- Tamao de la clula
- Complejidad de la membrana celular
- Con el uso de fluorocromos se puede detectar
hasta 3 colores con un mismo laser

 Seales de dispersin: La dispersin resulta de la interaccin de la luz con

una partcula que produce un cambio de direccin (no de la longitud de
onda) en todas las direcciones del espacio.

Las caractersticas morfolgicas que determinan la dispersin de la luz son

fundamentalmente el tamao celular, la membrana, el ncleo y el material
granular del interior de la clula, llamado complejidad.

En los Clitmetros de Flujo se miden dos fracciones de dispersin:

-La luz dispersada en ngulo cnico pequeo (0-10) que casi coincide con la
direccin de la luz incidente, llamada FSC (Forward Scatter). Es una medida
proporcional al tamao de la partcula que produce la dispersin.
-La luz dispersada en ngulo recto llamada SSC (Side Scatter). Es proporcional a la
complejidad de la estructura interna de la partcula.

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Seales de Fluorescencia: Un fluorocromo es una molcula qumica que absorbe luz a una
determinada longitud de onda (energa) y emite a una longitud superior (menor energa). El
espectro de absorcin o excitacin es el rango sobre el que un fluorocromo absorbe luz, y el
espectro de emisin es el rango sobre el que un fluorocromo emite luz. Cuando un
fluorocromo interacciona con la luz de excitacin procedente del lser emite energa
radiante.
El espectro de absorcin o excitacin es el rango sobre el que un fluorocromo absorbe luz, y
el espectro de emisin es el rango sobre el que un fluorocromo emite luz. Cuando un
fluorocromos interacciona con la luz de excitacin procedente del lser emite energa
radiante.
Debido a que parte de la energa se utiliza para la absorcin, la luz emitida es de menor
energa que la luz de excitacin, es decir la longitud de onda emitida es mayor. La diferencia
entre la longitud de onda de absorcin y emisin se denomina Stokes shiff.

GRACIAS