CONCENTRACIÓN INHIBITORIA

MÍNIMA
CONCENTRACIÓN BACTERICIDA
MÍNIMA
CONCENTRACIÓN
INHIBITORIA MÍNIMA

En algunas circunstancias los

métodos de difusión con
discos NO son lo
suficientemente exactos
para determinar el grado de
sensibilidad de un
microorganismo frente a los
antimicrobianos.
DEFINICIÓN

 Concentración Inhibitoria Mínima

(CIM)

Es la concentración mínima del

antimicrobiano con la cual se
logra inhibir el crecimiento
bacteriano.
 ¿EN QUÉ CONSISTE LA CIM?

 Medición cuantitativa in vitro de la actividad de un

agente antimicrobiano.
 Exposición del microorganismo a determinadas
concentraciones de antimicrobiano.
 Interpretación basada en tablas de CLSI.
 ¿MÉTODOS PARA REALIZAR CIM?

 Método por difusión

 Epsilon Test:
 Tiras
plásticas impregnadas de ATB en diferentes
concentraciones
 El gradiente de concentración del ATB va disminuyendo.
 Seutiliza el mismo procedimiento que para el
antibiograma.
 El medio de cultivo es generalmente AM-H.
 En bacterias de crecimiento fastidioso se utilizan medios
específicos (HTM, GC, M-HCSC al 5%)
 ¿CÓMO REALIZAR CIM?

 Método por difusión

 Epsilon Test:
 Halo de inhibición en forma de elipse.
 Lectura donde los dos brazos de la elipse
coinciden.
 Interpretación con tablas de CLSI.
¿CÓMO REALIZAR CIM?

 Método de dilución:
 Macrodilución
 Usartubos de hemólisis (13x100 mm).
 Preparar las diluciones de 1:2, el
volumen final en cada tubo es de 1 mL.
 NO olvidar que las concentraciones
deben ser preparadas al doble de las
requeridas finalmente.
 ¿CÓMO REALIZAR CIM?

 Método de dilución:
 El medio utilizado es
caldo Mueller-Hinton
ajustado con cationes
 Las concentraciones correctas de
cationes divalentes son: Ca++ 20-25
mg/L y Mg++ 10 -12,5 mg/L
 En bacterias de crecimiento fastidioso
se utilizan los suplementos
recomendados por la CLSI .
 Streptococcus pneumoniae: SLC
al 3%
 Haemophilus influenzae: NAD +
Hemina
 Neisseria gonorrhoeae: Isovitalex
¿CÓMO REALIZAR CIM?

 Microdilución
 Involucra
pequeños Las policubetas se pueden
volúmenes de caldo. preparar en el laboratorio y
ser guardadas a -20 o -70ºC
 Se realiza en microplacas de
plástico estériles.
 Cada pocillo contiene 50 μL
del ATB (“sensibilización” de
placas).
 Seañade 50 μL del inóculo
de la bacteria.
 El
medio utilizado es el
mismo caldo que para
macrodilución.
¿CÓMO REALIZAR CIM?

 Método de Dilución
 Medio sólido (agar):
 1 volumen de antimicrobiano en solución + 9
volúmenes de agar enfriado a 48 – 50ºC
 El principio es similar a Kirby-Bauer (108 UFC/mL) que
debe diluirse 1/10 (107 UFC/mL).
 Los replicadores (Steers) depositan 2L sobre el agar.
 El inóculo final es de 104 UFC (en área de 5-8 mm de
diámetro).
 ¿CÓMO REALIZAR CIM?

 Método de dilución
 Medio sólido (agar):
 Colocar una alícuota de
cada inóculo ajustado y
diluido.
 NO olvidar marcar la
orientación de los inóculos.
 Los “dientes” del
Replicador tienen 3 mm de
diámetro.
 Evitar el efecto “carry
over”.
 Siempre inocular una
placa MÁS.
 ¿CÓMO REALIZAR CIM?

 Método de dilución
 Medio sólido (agar):
 Lectura sobre fondo
negro.
 La CIM se define como
la menor dilución que
inhibe completamente el
desarrollo bacteriano,
despreciándose una
colonia o una tenue
película causada por el
inóculo.
¿CÓMO REALIZAR CIM?
CONSIDERACIONES IMPORTANTES
PARA REALIZAR CIM

 Antimicrobianos P.A. (USP o SIGMA)

 Potencia valorada (%, μg/mg o UI/mg).
 NO se debe utilizar antibióticos para
tratamiento clínico.
CONSIDERACIONES GENERALES PARA
REALIZAR CIM

 Preparación de solución
madre:
CONSIDERACIONES GENERALES PARA
REALIZAR CIM
CONSIDERACIONES GENERALES PARA
REALIZAR CIM
CONSIDERACIONES GENERALES PARA
REALIZAR CIM

 Preparación de las
diluciones para
“sensibilización” de
placas.
CONSIDERACIONES GENERALES PARA
REALIZAR CIM

 Inóculo
A partir de una suspensión ajustada a 0,5 Mc
Farland, realizar una dilución 1/100 en caldo
ajustando el inóculo de tal manera que al
inocular cada pocillo o tubo tenga
aproximadamente 5 x 105 UFC/mL
CONSIDERACIONES GENERALES PARA
REALIZAR CIM

 Inoculación en caldo:
 Macrodilución
 Colocar 1 mL de la suspensión bacteriana por
debajo del menisco, para no producir
salpicaduras en las paredes de cada tubo con
antimicrobiano.

 Microdilución
 Se inoculan con micropipeta 50 μL a cada
pocillo lográndose un volumen total de 100 μL
CONSIDERACIONES GENERALES PARA
REALIZAR CIM
CONSIDERACIONES GENERALES PARA
REALIZAR CIM

 Incubación
 Las condiciones y el tiempo se ajustan de acuerdo a la tabla de la
CLSI, específica para cada género bacteriano.
 Lectura de resultados
 La falta de turbidez en el caldo, es considerada la inhibición del
desarrollo bacteriano.
CONSIDERACIONES GENERALES PARA
REALIZAR CIM

 Control de Calidad
 Inóculo
 Se debe realizar un control de calidad del inóculo mediante el
recuento bacteriano.
 Control de esterilidad del medio
 Se debe incubar ya sea el caldo o el agar sin antibiótico y sin bacteria
para verificar la esterilidad del mismo.
 Control crecimiento de la bacteria en estudio
 Se inocula la bacteria en el caldo o agar sin antibiótico, de esta
manera corroboramos la viabilidad de la bacteria.
CONSIDERACIONES GENERALES PARA
REALIZAR CIM

 Control de calidad
 Concentración del antibiótico
 Se debe utilizar cepas patrón (ATCC) de las cuales ya se
conoce la CIM:
 Ej.: Streptococcus pneumoniae ATCC 49619
 Penicilina: 0,25 μg/mL a 1 μg/mL
 Cefotaxima: 0,03 μg/mL a 0,12 μg/mL
 ¿POR QUÉ SE REALIZA CIM?

 En casos de resistencias inusuales, para la confirmación de las

mismas.
 De manera obligatoria en neumococos para confirmar
resistencia a los betalactámicos (penicilina, cefalosporinas de
tercera generación)
 Para Staphylococcus aureus frente a la VANCOMICINA.
 Para los estreptococos del grupo Viridans frente a la
PENICILINA.
 Para los Enterobacterales frente al Colistín.
CONCENTRACIÓN
BACTERICIDA
MÍNIMA
DEFINICIÓN

 Concentración Bactericida Mínima

(CBM)
Es la concentración mínima del antibiótico
a la cual se obtiene el 99,9% de muerte de
la bacteria.
COMO REALIZAR CBM

 Para la determinación de la Concentración

Mínima Bactericida (CBM) se realiza la
extensión en placa de una gota del líquido de
cada tubo.
 La CBM viene determinada por la
concentración más baja de antimicrobiano
con la que no crecen las bacterias en las
placas de extensión.
¿POR QUÉ SE REALIZA CBM?

 Útil en casos de endocarditis, osteomielitis,

meningitis o pacientes con alteraciones
inmunológicas.

 Los antimicrobianos bactericidas NO siempre

cumplen este paso, pese a observarse inhibición.
¿POR QUÉ SE REALIZA CBM?

 Tolerancia

 Es un retraso en la bactericidia (más que una

ausencia de esta). Las cepas tolerantes
presentan generalmente CBMs altas,
comparadas con sus CIMs (relación CBM/CIM
de 32 o más, después de 24 horas de
incubación).
¿POR QUÉ SE REALIZA CBM?

 El mecanismo de la tolerancia estaría

relacionado con una disminución de la
actividad autolítica.
 En otros casos se ha descrito un aumento en
la liberación de un inhibidor de autolisinas
(ácido lipoteicoico).
Concentración Inhibitoria Mínima
(CIM)
24 hrs./35°C

0.5 µg/mL

1 µg/mL
CIM

2 µg/mL

4 µg/mL
Concentración Inhibitoria Mínima
(CIM)
24 hrs./35°C

0.5 µg/mL

1 µg/mL
CIM

2 µg/mL

CBM
4 µg/mL