Universidad Autónoma de Chihuahua

Facultad de Ciencias Químicas

Practica No. 1 “AMIBAS DE VIDA LIBRE”
Metodología I. Especificaciones, aspectos y características de la recolección de agua procedente de albercas, aljibes,
tinacos para la detección de Acanthamoeba sp., y Naegleria fowleri con base en la NOM-245-SSA1-2010.

Emplee un recipiente con tiosulfato de sodio o con un
recipiente estéril de vidrio para la recolección. Recolectando
de agua 500 mL, procedente de lo más alejado de la entrada o
salida de agua, de 10 a 15 centímetros bajo la superficie del
agua, después de un raspado de las paredes, recolectando el
material desprendido.
Etiquete e identifique el recipiente (nombre o número de
identificación, datos del propietario o encargado/médico
solicitante, fecha y hora de la recolección y lugar de
procedencia de la muestra). Evite exponer el recipiente a
radiación o luz solar directa y a temperaturas extremas

Remite la muestra de agua al laboratorio inmediatamente
después de la recolección, con un tiempo máximo de
preservación de 48 horas entre la recolecta y el análisis. Sí la
muestra es de ríos, arroyos y/o estanques, recolecte muestra
de sedimento, agua de la parte media y de la superficie.
Etiquete e identifique el recipiente (nombre o número de
identificación, datos del propietario o encargado/médico
solicitante, fecha y hora de la recolección y lugar de
procedencia de la muestra). Evite exponer el recipiente a
radiación o luz solar directa y a temperaturas extremas

Sí la muestra es recolectada aparatos de refrigeración que

utilicen agua en su funcionamiento y generen aerosoles,
recolecte con un recipiente estéril de vidrio un litro de agua
del depósito del punto más alejado del aporte; además
recolecte los restos de suciedad, biopelícula e incrustaciones
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Practica No. 1 “AMIBAS DE VIDA LIBRE”
Metodología II. Técnica y análisis microscópico directo en fresco de la muestra de agua.

Coloque una gota de solución salina fisiológica al 0.85% sobre

Verifique que la tapa del frasco o recipiente presente cierre el portaobjeto, posteriormente recolecte con una pipeta
hermético; agite manualmente para desprender y Pasteur de cuello largo una alícuota de agua.
homogeneice la biopelícula adherida de la superficie del
Coloque la alícuota sobre el portaobjeto y homogeneice la
recipiente.
preparación con la esquina de un cubreobjeto, para incorporar
el cubreobjeto de manera diagonal.

Coloque una gota de tinción de azul de metileno amortiguado

al 1% sobre el mismo portaobjeto. Observe el cubreobjeto en sentido direccional empleando los
objetivos de 4X, 10X y 40X.
Agite manualmente para desprender y homogeneice la
biopelícula adherida de la superficie del recipiente. Recolecte Anote las estructuras observadas en el formato determinado.
nuevamente una alícuota y colóquela sobre el portaobjeto.
Homogeneice la preparación con la esquina de un cubreobjeto
e incorpore el cubreobjeto de manera diagonal.

Observe el cubreobjeto en sentido direccional empleando los

objetivos de 4X, 10X y 40X.

Anote las estructuras observadas en el formato determinado.

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Practica No. 1 “AMIBAS DE VIDA LIBRE”
Metodología III. Técnica de sembrado bacteriológico mediante estría cerrada.

Siembre la placa de Petri con medio Agar No Nutritivo por

Sujete la placa de Petri con la mano opuesta a la que sujeta el
estría cerrada con 200 μL de la solución con las bacterias
asa, de manera que la tapa quede hacia arriba. Abre
atenuadas anteriormente.
parcialmente la placa de Petri con ayuda del dedo pulgar.

Cierre la placa de Petri y gire varios centímetros en contra de
las manecillas del reloj. haga un segmento similar al anterior,
de manera que las bacterias sembradas en el primer segmento
sean removidas para el segundo. Repite esta operación una o
dos veces más.
Introduce el asa en el medio líquido con la bacteria atenuada.
Deslice el asa suavemente en forma de zigzag, desde la pared
del medio Agar NN hasta cubrir aproximadamente un tercio
de toda la superficie.

Cierre la placa de Petri y colóquela sobre la mesa de trabajo

boca abajo. Esterilice el asa a la llama del mechero.

Deje reposar la placa del medio Agar NNE durante una hora.
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Practica No. 1 “AMIBAS DE VIDA LIBRE”
Metodología IV. Técnica de concentración por centrifugación e inoculación de la muestra de agua en el medio Agar
NN/E. coli., para la detección de Acanthamoeba sp., y Naegleria fowleri.

Agite el recipiente y recolecte una submuestra=alícuota de 50

mL. Deposite la alícuota en un tubo de ensayo de fondo Centrifugue a 970g durante 10 minutos y decante el líquido
cónico. sobrenadante.

Deposite con una pipeta de transferencia de 2 a 3 gotas del

Agite levemente la placa de Petri con movimientos rotatorios
sedimento, en el centro de una placa de Petri con medio Agar
sin retirarla de la superficie de la mesa.
NN/Escherichia coli.

Incube a temperatura de 37 °C durante un periodo de

observación de 7 días.
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Practica No. 1 ANÁLISIS DE CEPAS DE REFERENCIA RELACIONADAS A INFECCIONES DEL TRACTO GASTROINTESTINAL

Utilizar las técnicas asépticas correspondientes,

Con el asa de nicromio circular estéril realizar estriado para
posteriormente descargar cada cepa de referencia con hisopo
cultivo puro. Incubar los medios de cultivo inoculados en
estéril en un extremo de la caja Petri que contiene el agar
posición invertida a 37°C, durante 24 a 48 horas, en
indicado por el instructor.
condiciones de aerobiosis

A partir de las colonias aisladas de cada cepa de referencia,

Realizar las pruebas metabólicas para la identificación de
anotar las características macroscópicas. De cada cepa de
bacilos Gram negativos utilizando carbohidratos complejos,
referencia, describir morfología microscópica mediante la
metabolismo de proteínas y exoenzimas.
realización de la tinción de Gram.

Incubar las pruebas bioquímicas a 37°C durante 24 a 48 horas.

Interpretar los resultados de las pruebas metabólicas
agregando los reactivos que sean necesarios. Realizar las
anotaciones correspondientes y comparar los resultados con
los de la bibliografía correspondiente