DETERMINACIÓN DE TARTRAZINA EN UNA BEBIDA COMERCIAL EMPLEANDO

Universidad Icesi, Facultad de Ciencias Naturales, Programa de Química Farmacéutica, Laboratorio

de Análisis Instrumental
Santiago de Cali, Colombia; Mayo, 19 del 2022
RESUMEN
En esta práctica se determinó el contenido de Tartrazina en una bebida: botella de Gatorade,
mediante espectroscopia visible. Para lo anterior, se realizaron tres curvas de calibración: la primera
denominada sencilla o con estándares externos, la segunda denominada adición de estándares y la
tercera denominada estándar interno. Para la primera y la segunda se usó como reactivo patrón
Tartrazina, para la tercera se empleó azul de metileno. Se obtuvo que las concentraciones promedio
de Tartrazina fueron 955.2 ppm , 20.5 ppm y 118.90 ppm , con los métodos de calibración sencilla,
adición estándar y estándar interno respectivamente. Dichos tuvieron una notable diferencia
significativa entre ellos, por lo que se consideraron variedad de errores experimentales. Se concluyó
que es de gran importancia un valor real de analito para discutir posibles errores, que el método de
estándar interno requiere una elección adecuada de patrón y que es de alta relevancia el análisis de
productos comerciales para verificar que cumplan las legislaciones vigentes.
Palabras claves: Espectroscopia visible, cuantificación, estándar interno, adición estándar,
calibración sencilla.
INTRODUCCIÓN matriz de componentes sobre la disolución
del analito3. Por otro lado, la curva por
La base de la espectroscopia Visible y
adición estándar consiste en añadir cantidades
Ultravioleta consiste en medir la intensidad
conocidas de analito al problema, cuyo
del color (o de la radiación absorbida en UV)
contenido en analito se requiere determinar.
a una longitud de onda específica
A partir del aumento de señal se deduce
comparándola con otras soluciones de
cuánto analito había en la muestra problema 4.
concentración conocida (soluciones estándar)
Y, por último, la curva de calibración por
que contengan la misma especie absorbente1.
estándar interno, se emplea un patrón interno.
Para realizar la cuantificación de la muestra Este es una sustancia que se añade en
se requiere un procedimiento analítico cantidad constante a todas las muestras,
denominado curvas de calibración. Estas blancos y patrones de calibración al efectuar
curvas son la representación gráfica de una en análisis. Los patrones internos son
señal que se mide en función de especialmente útiles cuando la cantidad de
concentraciones conocidas de un analito 2. muestra analizada no es reproducible, cuando
Existen diferentes curvas de calibración. la respuesta absoluta de experiencia a
Dentro de estas se encuentran línea de experiencia varía por razones que son
calibración sencilla, línea de calibración por difíciles de controlar, o cuando ocurren
adición de estándar y línea de Calibración con pérdidas incontroladas de muestra5.
estándar interno.
Ahora bien, un colorante es un compuesto
En la curva de calibración sencilla o de un orgánico que cuando se aplica a un
estándar externo, el patrón externo se prepara determinado sustrato le puede confiere un
por separado de la muestra y se emplean para color. La estructura química de determinados
calibrar instrumentos y procedimientos grupos funcionales, llamados cromóforos que
cuando no hay efecto de interferencia de la hace que la molécula absorba luz en la región
visible del espectro electromagnético que
corresponde a longitudes de onda entre
380nm y 750nm aproximadamente6.
La Tartrazina es uno de los colorantes
industriales más utilizados en la industria de
alimentos, es sintético y pertenece a la familia
de los colorantes azoicos, que son aquellos
que contienen el grupo azo (-N=N-) 7. Estos
grupos contienen átomos de Nitrógeno que
están unidos a través de un enlace doble.
Estos tienen seis electrones móviles
deslocalizados que a la vez están
deslocalizados con los anillos aromáticos
adyacentes6. A este grupo de compuestos se
les denomina azoicos y por lo general, son
coloreados. Como en este caso la tartrazina
(ver figura 1).
Figura 1. Molécula de la tartrazina
La Tartrazina le confiere a los alimentos y
bebidas un tono entre amarillo y anaranjado
dependiendo de la cantidad agregada y se
utiliza en productos de repostería, derivados
cárnicos, sopas preparadas, conservas
vegetales, salsas, helados, postres, caramelos
y otras golosinas; también se utiliza para
colorear bebidas refrescantes de naranja y
limón7.
Debido a estos usos, la Tartrazina y otros
colorantes tienen normas nacionales e
internacionales que regulación la
concentración de cada uno de los productos
que los contienen, pues en cantidades
superiores pueden presentar un riesgo para la
salud humana7. Por tal motivo, es necesaria la
determinación de la concentración de estas
sustancias a través de métodos analíticos es
de gran importancia para los procesos
industriales y para la salud de las personas.
En esta práctica se determinó el contenido de
Tartrazina en una bebida comercial,
correspondiente a una botella de Gatorade,
utilizando un espectrofotómetro UV-Vis a
través de tres curvas de calibración distintas,
que corresponde a calibración sencilla,
calibración estándar y calibración por
estándar interno.
METODOLOGÍA
- Para el procedimiento de calibración
sencilla se preparó una solución estándar de
Tartrazina 1000 mg/L, que se denominó
solución patrón. A partir de esta, se
prepararon seis disoluciones de
concentraciones de: 12 mg/L, 16 mg/L,
20mg/L, 24 mg/L, 28 mg/L y 32 mg/L, cada
una en balones aforados de 25 mL. Se
llenaron las celdas con cada una de las 6
soluciones patrones y se midieron sus
absorbancias a 426nm.
- Para la calibración por adición estándar se
adicionó 1 mL de la muestra problema a seis
balones aforados de 25mL, se agregó la
solución patrón de tal forma que se
obtuvieran las siguientes concentraciones 0
mg/L, 12mg/L, 16 mg/L, 20 mg/L, 24 mg/L y
28 mg/L. Se llenaron las celdas con cada una
de las 6 soluciones patrones y se midieron sus
absorbancias a 426nm.
- Para la calibración por estándar interno, se
prepararon soluciones con concentraciones de
12 mg/L; 16 mg/L, 20mg/L, 24 mg/L, 28
mg/L, 32 mg/L de solución patrón y 450µL
de azul de metileno en balones aforados de 25
mL. Posteriormente se preparó una solución
de muestra problema de Gatorade agregando
625µL de muestra problema y 450µL de azul
de metileno 0.01% a un balón de 25 mL,
completando hasta el aforo. Por último,
midieron absorbancias de las 6 disoluciones y
la solución de Gatorade a 426nm y 664nm en
el espectrofotómetro.
CÁLCULOS Y RESULTADOS
En la práctica, se realizaron tres métodos de Gráfico 1. Curva de calibración sencilla
cuantificación, siendo estos la curva de
Posteriormente, se realizó la preparación de la
calibración sencilla, de calibración estándar y
solución problema empleando Gatorade y
con estándar interno.
finalmente, se midió la absorbancia de esta a
Inicialmente, se realizó una curva de 426 nm. Es necesario recalcar que se utilizó
calibración sencilla en donde se realizó la una dilución 10/20. El resultado obtenido se
medición de la absorbancia a 426 nm de seis muestra en la tabla 2.
disoluciones cada una con una concentración Tabla 2. Absorbancia de la muestra problema
diferente de tartrazina.
Los datos obtenidos en la práctica y los Solución Absorbancia (nm)
cálculos de las concentraciones de las
disoluciones se observan en la tabla 1. Muestra problema 0,238
Tabla 1. Datos de absorbancia para la curva de
calibración sencilla

Seguidamente, utilizando la ecuación de la

Concentración Absorbancia (nm)
recta registrada en la figura 1.
(ppm)
y=0.0069 x +0.0732
12 0.155 y−0.0732
x=
0.0069
16 0.183
Donde x es la concentración de la tartrazina y
20 0.211 y es la absorbancia de la muestra problema
(Gatorade) cuya absorbancia se registró
anteriormente en la tabla 1. Por lo anterior se
24 0.243 tiene que

28 0.264 Absorbancia−0.0732
[ Tartrazina ] = (1)
0.0069
32 0.293 0.238−0.0732
[Tartrazina]=
0.0069

[Tartrazina]=23.88 ppm
Curva de calibración sencilla
0.35
Cabe recalcar que para conocer la
0.3 concentración de tartrazina es necesario
0.25f(x) = 0.00689285714285714 x + 0.0731904761904762
multiplicar por el inverso del factor de
Absorbancia

0.2R² = 0.998077922727492
0.15
dilución 10/20 y además, se tomó 1mL de la
0.1 muestra y se aforó en un balón de 20mL por
0.05 lo que se realiza el siguiente calculo:
0
10 15 20 25 30 35
Concentración (ppm) [Tartrazina]× FD(2)
 20 20
¿ 23.88 ppm × × =955.2 ppm 16 0.143
10 1

Para la realización de la curva de adición 20 0.170

estándar, se realizó la medición de
absorbancia a 426 nm de seis disoluciones 24 0.197
diferentes en donde a cada una se le adicionó
un volumen fijo de la muestra problema
(Gatorade) y diferentes volúmenes de la 28 0.221
solución patrón. La composición de cada
disolución se puede observar en la tabla 3. 32 0.250
Tabla 3. Volúmenes de solución problema y patrón que
contiene cada disolución.
Para realizar la curva de calibración por
adición estándar, es necesario restar a todas
Disolución Solución Solución las absorbancias el valor de la concentración
problema patrón del balón de Gatorade + Agua. Por
(mL) (mL) consiguiente, se obtuvo la tabla 5.

Tabla 5. Datos reales de absorbancia para la curva de

1 1 0,3 calibración por adición estándar

2 1 0,4 Concentración Absorbancia (nm)

(ppm)
3 1 0,5
12 0.074
4 1 0,6
16 0.101
5 1 0,7
20 0.128
6 1 0,8
24 0.155
Por otro lado, la absorción de cada disolución
se encuentra registrada en la tabla 4. 28 0.179

Tabla 4. Datos de absorbancia para la curva de

calibración por adición estándar
32 0.208

Concentración Absorbancia (nm) Con los datos de la tabla 4 se realizó la curva

(ppm) de calibración por adición estándar
representada en el gráfico 2.
Gatorade + Agua 0.042

12 0.116
 Curva de calibración por adición es- Disolución Solución de Solución
tándar azul de patrón (mL)
metileno
Absorbancia

0.25 (μL)
0.2
f(x) = 0.00665 x − 0.00546666666666665
0.15 R² = 0.999634019994349
0 450 0
0.1
0.05
1 450 0,3
0
10 15 20 25 30 35
Concentración (ppm) 2 450 0,4

Gráfico 2. Curva de calibración por adición estándar 3 450 0,5

La ecuación de la recta evidenciada en la 4 450 0,6

figura 2 permitirá calcular el valor de la
concentración de tartrazina en la muestra
problema. Para esto, se realiza el siguiente 5 450 0,7
procedimiento
6 450 0,8
y=0.0067 x −0.0055(3)

0.0055 Por otro lado, la absorbancia de cada

[ Tartrazina ] =
0.0067 disolución a 426 nm y 664 nm se encuentran
registrados en la tabla 7.
0.0055
[ Tartrazina ] = =0.82 ppm Tabla 7. Absorbancia de las disoluciones a diferentes
0.0067
longitudes de onda.

Posteriormente, se multiplica por el factor

Disoluc Concentr Abs 426 Abs 664
de dilución.
ión ación sln nm nm
25 patrón
0.82 ppm × =20.5 ppm(4) (ppm)
1

Finalmente, se realizó una curva de 1 12 0.088 0.298

calibración por estándar interno. Para la
realización de esta curva, se midió la
2 16 0.111 0.292
absorbancia a dos longitudes de onda (426
nm, 664 nm) a diferentes disoluciones que
contenían un volumen fijo de azul de 3 20 0.131 0.288
metileno y diferentes volúmenes de la
solución patrón. Adicionalmente, se preparó 4 24 0.171 0.279
una solución problema (muestra) cuya
composición se evidencia en la tabla 6.
5 28 0.192 0.266
Tabla 6. Volúmenes adicionados de solución de azul de
metileno y patrón a cada disolución.
 6 32 0.210 0.273 Curva de calibración por estandar
interno
Problema 0.154 0.332 1.000
0.800

Absorbancia
f(x) = 0.025376346204754 x − 0.0192398469794697
0.600 R² = 0.982121187873507
Para la realización de la curva de calibración 0.400
por estándar interno es necesario dividir la 0.200
absorbancia de la longitud de onda menor por 0.000
la absorbancia de la longitud de onda mayor 10 15 20 25 30 35
de cada disolución. Concentración (ppm)

|¿|
|426|nm
(5) Gráfica 3. Curva de calibración por estándar interno
|664|nm

Por lo tanto, se reemplazan los valores de la Para calcular la concentración de la solución

tabla 7 en la ecuación 5 para obtener la
absorbancia con la que se realizará la curva
de calibración. Los resultados obtenidos se
reportados en la tabla 8.
problema (muestra) con esta curva se realizó
el cálculo de la ecuación 6.
y=0.0254 x−0.0192(6)

y+ 0.0192
Tabla 8. Absorbancias totales de cada disolución. [ Tartrazina ] =
0.0254
Concentraciones Absorbancia (426
nm/ 664 nm) 0.464+0.0192
[ Tartrazina ] =
0.0254
12 0.295 [ Tartrazina ] =19.02 ppm

16 0.380 Posteriormente, se multiplicó por el factor de

dilución 4/25.
20 0.455 25
19.02 ppm× =118.90 ppm
4
24 0.613

28 0.722 ANÁLISIS DE RESULTADOS

En esta práctica de laboratorio, la tartrazina
32 0.769 fue el analito que se determinó en una bebida
comercial empleando tres curvas de
Muestra 0.464 calibración. Este es un colorante artificial
amarillo que se usa ampliamente en la
industria alimentaria. Se presenta en forma de
polvo brillante, de color amarillo-naranja, es
Con las absorbancias de la tabla 8, se realizó inoloro, higroscópico, estable en ácidos,
la curva de calibración por estándar interno. soluble en agua y poco soluble en etanol8.
En la industria química, los colorantes son
sustancias capaces de absorber determinadas
longitudes de onda del espectro visible, lo
que permite su análisis empleando la técnica
de espectroscopia visible. Adicionalmente, su
coloración se debe a los grupos cromóforos
presentes en la molécula, que son los
responsables de absorber en la región visible
del espectro electromagnético8.
Ahora bien, respecto a lo obtenido la curva de
calibración sencilla se realizó con los datos de
la tabla 1, obteniendo como resultado la
gráfica mostrada en el gráfico 1 y la ecuación
1. A partir de esta ecuación considerando un
factor de dilución de 10/20, se calculó la
concentración de tartrazina en la muestra,
llegando a un valor de 955.2 ppm.
Ante este resultado, es pertinente explicar
varios factores los cuales pueden ocasionar
que falle la suposición elemental del método
del patrón externo. Los efectos de matriz,
debido a las especies extrañas en la muestra
que no están presentes en los patrones o el
blanco, pueden ocasionar que las
concentraciones del mismo analito en la
muestra y en los patrones proporciones
respuestas distintas que afectan la precisión
de los resultados.
Por otro lado, la calibración por adición
estándar en la cual, se tiene en cuenta el
efecto de matriz de la anterior curva de
calibración y, por tal motivo, se tiene como
objetivo disminuirlo. Para ello, se utilizaron
los datos de la tabla 5, obteniendo como
resultado la grafica mostrada en el gráfico 2 y
la ecuación 3. A partir de esta ecuación se
consideró un factor de dilucion de 1/25. En
este método, se adicionó la muestra problema
con un volumen fijo a las diferentes
soluciones y se adicionó una solución patrón,
aumentando su volumen con cada solución.
Empleando este, se determinó una
concentración de 20.5ppm. Este resultado no
se vio afectado por el efecto de matriz, sin
embargo, pudieron ocurrir diversos errores
aleatorios inherentes al método que no se
pudieron tener en cuenta.
La curva de calibración por patrón interno se
realizó con los datos de la tabla 6, obteniendo
como resultado la gráfica mostrada en el
gráfico 3 y la ecuación 6. A partir de esta
ecuación y las absorbancias obtenidas de la
muestra (ver tabla 7), considerando un factor
de dilución 4/25, se obtuvo la concentración
de tartrazina en la muestra 118.90ppm.
En la realización de las muestras se pudieron
presentar distintos errores, por lo que es
pertinente mencionarlos ya que afectan los
resultados finales. Se dice de una
contaminación durante el proceso de
muestreo o en las etapas de preparación de
dicha muestra, lo que ocasiona que la
respuesta no sea correcta y afecte el análisis.
De igual manera, cuando se prepararon las
soluciones se pudo haber presentado un error
del instrumentador en cuanto al aforo o, en
otro caso, realizar las medidas inexactas de la
muestra.
No es posible realizar una comparación entre
cual medición fue mas exacta, debido a que,
la bebida comercial (Gatorade) no expresa su
concentración de tartrazina en su tabla de
contenido. Sin embargo, si es posible
comparar con la concentración de tartrazina
permitida en el país. Se cuenta con la
resolución 10593 de 1985, en la que indica
que la concentración de tartrazina en
productos para el consumo humano en
Colombia no debe exceder los 100 ppm, y el
Gatorade es una bebida comercial legal en
Colombia, razón por la cual fue posible
considerar que la muestra debía cumplir con
dicha legislación vigente. Dicho esto, se
comparó esta noción con los resultados
obtenidos y se notó que que hay una gran
variación entre ellos y los métodos utilizados,
el que mas excede el límite indicado por la
norma es el presentado por la curva de
calibración sencilla, asimismo, se evidencia
un limite alto por parte de la curva de
calibración por estándar interno. Sin
embargo, la curva de calibración por adición
estándar si está dentro de los límites consumo
humano. De lo anterior se podría concluir,
que se cometieron variedad de errores,
previamente mencionados, por tal motivo, se
afirma que se llegó a resultados diferentes en
cada método porque en todas las muestras se
tomaron alícuotas del mismo tarro de bebida
comercial (Gatorade).
CONCLUSIONES
 El tratamiento de los reactivos para
realizar las soluciones es una etapa de
vital importancia para realizar las
mediciones análiticas, pues se pueden
presentar errores que aumentan el
porcentaje de error de los resultados,
disminuyendo la confiabilidad de los
mismos.
 Analizar productos comerciales es de
vital importancia para verificar el
cumplimiento de la norma por parte
de los mismos.
 No fue posible concluir cual de los
métodos fue mas exacto y preciso,
debido a que no se contaba con un
valor teórico.
 Los resultados tuvieron una
diferencia significativa, por lo que se
afirma que se cometieron diferentes
errores en la práctica.
 Para elegir un patrón adecuado para
la calibración por estándar interno se
requiere conocer el espectro de
absorbancia tanto del patrón como
del analito, así como se requiere de
conocimiento experimental para
determinar que no se genere
interferencia por concentración de
sustancias.
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