8D Estandarización y calibración  185

Para compensar errores por el método de estándar interno debe existir y estar disponi-
ble una especie química de referencia. La especie química de referencia no debe causar in-
terferencias diferentes de las del analito. No debe haber contaminación del analito en los
materiales utilizados para preparar el estándar interno. Además, ambas especies químicas
deben estar presentes en concentraciones que sean porciones lineales de su línea de cali-
bración. Debido a la dificultad para encontrar una especie química de estándar interno
apropiada, el método del estándar interno no se utiliza tan frecuentemente como otros
métodos de compensación de errores.

Métodos de adición de estándares

Utilizamos el método de adición de estándar cuando es difícil o imposible duplicar la En el método de adiciones están-
matriz de la muestra. En general, la muestra es "seleccionada" con una cantidad o canti- dar, una cantidad conocida de una
dades conocidas de disolución estándar del analito. En el método de adición de un solo disolución estándar de analito se
añade a una porción de la muestra.
estándar, se toman dos porciones de la muestra. Una porción es medida de manera nor-
Las respuestas son medidas antes
mal, pero a la segunda se añade una cantidad conocida de disolución estándar del analito. y después de la adición y utiliza-
Las respuestas de las dos porciones se utilizan para calcular la concentración desconocida, das para obtener la concentración
suponiendo una relación lineal entre la respuesta y la concentración del analito (véase el del analito. Alternativamente,
ejemplo 8.8). En el método de adiciones múltiples, se añaden cantidades de la disolución se realizan adiciones múltiples a
estándar del analito a varias porciones de la muestra y se obtiene una curva de calibración varias porciones de la muestra. El
método de adiciones de estándar
para las varias adiciones. El método de adiciones múltiples verifica, hasta cierto punto, supone una respuesta lineal. La
que la relación lineal entre la respuesta y la concentración del analito sea constante. Dis- linealidad debe ser siempre confir-
cutimos en más profundidad el método de adiciones múltiples en el capítulo 26, donde lo mada o debe utilizarse el método
utilizamos en conjunción con espectroscopia de absorción molecular (figura 26.8). de adiciones múltiples para com-
El método de adición de estándares es un método muy poderoso cuando se utiliza probar la linealidad.
apropiadamente. Primero, debe haber una buena medición de la determinación del
blanco para que las especies químicas extrañas no contribuyan a la respuesta analítica.
Segundo, la curva de calibración para el analito debe ser lineal en la matriz de la muestra.
El método de adiciones múltiples proporciona una validación de este supuesto. Una des-
ventaja notable del método de las adiciones múltiples es el tiempo extra que se requiere
para realizar las adiciones y mediciones. El beneficio principal es la compensación poten-
cial para efectos complejos de interferencia que pueden ser desconocidos para el usuario.

EJEMPLO 8.8
El método de adición estándar de un solo punto fue utilizado en la determinación
de fosfato por el método del azul de molibdeno. Una muestra de orina de 2.oo mL fue
tratada con reactivos del azul de molibdeno para producir especies químicas que
absorben a 820 nm; posteriormente la muestra fue diluida a 100.00 mL. Una alicuota
de 25.00 mL produjo una lectura de instrumento (absorbancia) de 0.428 (disolución
1). La adición de 1.00 mL de una disolución que contenía 0.0500 mg de fosfato a
una segunda alicuota de 25.0 mL produjo una absorbancia de 0.517 (disolución 2).
Utilice estos datos para calcular la concentración de fosfato en miligramos por mL
de muestra. Suponga que hay una relación lineal entre la absorbancia y la concen-
tración y que se realizó la medida de la determinación del blanco.

Modelo molecular del ion fosfato (PO432).

(continúa)

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186CAPÍTULO 8 Muestreo, estandarización y calibración

Solución
La absorbancia de la primera disolución está dada por
A15kcu
donde cd es la concentración desconocida de fosfato en la primera disolución y k es una
constante proporcional. La absorbancia de la segunda disolución está dada por
kVucu kVscs
A2 5 1
Vt Vt
donde V d es el volumen de la disolución con concentración desconocida de fosfato
(25.00 mL), Vd es el volumen de la disolución estándar de fosfato añadido (1.00 mL), Vt
es el volumen total después de la adición (26.00 mL) y cd es la concentración de la diso-
lución estándar (0.500 mg mL21). Si resolvemos la primera ecuación para k, sustituimos
el resultado en la segunda ecuación y la resolvemos para cd, obtenemos
A1csVs
cd 5 5
A2Vt 2 A1Vu
0.428 3 0.0500 mg mL21 3 1.00 mL
5 5 0.0780 mg mL21
0.517 3 26.00 mL 2 0.428 3 25.00 mL
Esta es la concentración de la muestra diluida. Para obtener la concentración de la muestra
original de orina, necesitamos multiplicar por 100.00/2.00. Por lo tanto,
concentración de fosfato 5 0.00780 mg mL21 3 100.00 mL/2.00 mL
5 0.390 mg mL21

Resumen de hoja de cálculoEn el capítulo 4 de Applications of Micro-

soft® Excel in Analytical Chemistry, 2a. ed.*, se ejemplifica un procedimiento de
adiciones múltiples de estándar. Como ejemplo utilizamos la determinación de es-
troncio en agua de mar a través de espectrometría de emisión atómica de plasma acoplado
inductivamente. La hoja de trabajo se prepara y se realiza la gráfica de las adiciones del están-
dar. También se discute la regresión lineal múltiple y la regresión polinomial.

PARÁMETROS DE CALIDAD
8E PARA LOS MÉTODOS ANALÍTICOS
Los procedimientos analíticos se caracterizan por un número de parámetros de calidad
como exactitud, precisión, sensibilidad, límite de detección e intervalo dinámico. En el
capítulo 5 discutimos los conceptos generales de exactitud y precisión. A continuación
describimos los parámetros de calidad que son comúnmente utilizadas y que ayudan a
discutir acerca de la validación y a reportar resultados analíticos.

8E.1 Sensibilidad y límite de detección

El término sensibilidad es utilizado frecuentemente para describir un método analítico.
Por desgracia, se utiliza de manera indiscriminada e incorrecta. La definición de sensibilidad
más utilizada es la de sensibilidad de la calibración, o el cambio en la señal de respuesta
por unidad de cambio en la concentración del analito. La sensibilidad de la calibración es
entonces la pendiente de la curva de calibración, como se muestra en la figura 8.14. Si la
curva de calibración es lineal, la sensibilidad es constante e independiente de la concentra-
ción. Si es no lineal, la sensibilidad cambia con la concentración y no es un valor único.

*Este material se encuentra disponible solo en inglés.

 8E Parámetros de calidad para los métodos analíticos  187

Intervalo dinámico lineal

R

R
Figura 8.14Curva de cali-
c
bración de respuesta R contra la
R
m = —— concentración c. La pendiente de
c
la curva de calibración se conoce
como sensibilidad de calibración m.
El límite de detección, ld, designa
la concentración menor que puede
ser medida a un nivel de confianza
LD c especificado.
La sensibilidad de calibración no indica qué diferencias en la concentración pueden
ser detectadas. El ruido en las señales de respuesta debe ser tomado en cuenta para poder
cuantificar las diferencias que pueden ser detectadas. Por esta razón, el término sensibili-
dad analítica es utilizado en algunas ocasiones. La sensibilidad analítica es la proporción
de la pendiente de la curva de calibración con respecto a la desviación estándar de la se-
ñal del analito a una concentración de analito determinada. Generalmente la sensibilidad
analítica es una función de la concentración.
El límite de detección, ld, es la menor concentración que puede ser reportada a un
cierto nivel de confianza. Cada técnica analítica tiene un límite de detección. Para méto-
dos que requieren una curva de calibración, el límite de detección es definido en sentido
práctico por la ecuación 8.22; es la concentración de analito que produce una respuesta
igual a k veces la desviación estándar de la determinación del blanco sb:

ksb
LD 5 .
m
donde k es el llamado factor de confianza y m es la sensibilidad de la calibración. El factor
k es seleccionado como 2 o 3. Un valor de k de 2 corresponde a un nivel de confianza del
92.1%, mientras que un valor k de 3 corresponde a un nivel de confianza de 98.3%.24
Los límites de detección reportados por los investigadores o compañías que fabrican
instrumentos pueden no ser válidos para muestras reales. Los valores reportados son me-
didos normalmente para estándares ideales con instrumentos óptimos. Sin embargo, estos
límites son útiles para comparar métodos o instrumentos.

8E.2 Intervalo dinámico lineal

El intervalo dinámico lineal de un método analítico se refiere al intervalo de concen-
traciones sobre las cuales un analito puede ser determinado utilizando una curva de
calibración lineal (véase la figura 8.14). El límite inferior del intervalo dinámico es la con-
centración en la cual la señal analítica o la pendiente de la curva de calibración se desvían
por una cantidad especificada. Generalmente una desviación de 5% de la linealidad es
considerada el límite superior. Las desviaciones de la linealidad son comunes a altas con-
centraciones debido a las respuestas no ideales del detector o a efectos químicos. Algunas
técnicas analíticas, como la espectrofotometría de absorción, son lineales solo alrededor

24
Véase J. D. Ingle, Jr. y S. R. Crouch, Spectrochemical Analysis, Upper Saddle River, NJ: Prentice Hall, 1988, p. 174.

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188CAPÍTULO 8
Una gráfica de control es una
gráfica secuencial de alguna
característica que es un criterio de
calidad.
Muestreo, estandarización y calibración
de uno o dos órdenes de magnitud. Otros métodos, como la espectrofotometría de masas,
pueden exhibir linealidad alrededor de cuatro o cinco órdenes de magnitud.
Se prefiere una curva de calibración por su simplicidad matemática y porque hace más
fácil detectar una respuesta anormal. Con las curvas lineales de calibración, se utilizan po-
cos estándares y se utiliza un procedimiento de regresión lineal. Las curvas de calibración
no lineal son útiles en algunas ocasiones, pero se requieren más estándares para establecer
la función de calibración que en los casos lineales. Es deseable un amplio intervalo lineal
dinámico porque permite determinar un amplio intervalo de concentraciones sin la nece-
sidad de diluir muestras, lo cual demanda tiempo y es una potencial fuente de error. En
algunas determinaciones, solo se requiere de un intervalo dinámico pequeño. Por ejem-
plo, en la determinación de sodio en el suero sanguíneo, solo se necesita un intervalo
pequeño porque las variaciones en el nivel de sodio en los humanos son muy limitadas.
8E.3 Aseguramiento de la calidad
de los resultados analíticos
Cuando un método analítico es aplicado a problemas reales, la calidad de los resultados,
así como la calidad del rendimiento de las herramientas e instrumentos utilizados debe ser
evaluada constantemente. Las principales actividades involucradas son control de calidad,
validación y reporte de resultados.25 A continuación describimos en breve cada uno de ellos.
Gráficas de control
Una gráfica de control es una representación gráfica de alguna característica cualitativa
que es importante para el aseguramiento de la calidad. La gráfica muestra también los
límites estadísticos de variación que son permisibles para la característica que es medida.
Como ejemplo, considere el monitoreo del funcionamiento de una balanza analítica.
Tanto la exactitud como la precisión de la balanza pueden ser monitoreadas periódicamente
para determinar la masa de un estándar. Podemos determinar si las mediciones de la masa
estándar, realizadas en días consecutivos, están entre ciertos límites. Estos límites son llama-
dos límite superior de control (lsc) y límite inferior de control (lic). Son definidos como
3s
lsc 5 m 1
"N
3s
lic 5 m 2
"N
donde m es la media poblacional para la medición de la masa, s es la desviación estándar
de la población para la medición y N es el número de réplicas obtenidas para cada mues-
tra. La media poblacional y la desviación estándar para la masa estándar deben ser estima-
das a partir de estudios preliminares. Observe que el lsc y el lic están a tres desviaciones
estándar cada lado de la media poblacional y constituyen un intervalo entre el cual se
espera encontrar, el 99.7% de las veces, la masa medida.
La figura 8.15 es una gráfica de un instrumento de control típico para una balanza
analítica. Los datos de masa fueron colectados en 24 días consecutivos para una masa
estándar de 20.000 g certificada por el Instituto Nacional de Estándares y Tecnología.
En cada día, se realizaron cinco determinaciones de las réplicas. A partir de experimentos
independientes, fueron determinadas estimaciones de la media poblacional y de la desvia-
ción estándar m 5 20.000 g y s 5 0.00012 g, respectivamente. Para la media de cinco
0.00012
mediciones, 3 3 5 0.00016.
"5
25
Para mayor información, véase J. K. Taylor, Quality Assurance of Chemical Measurements, Chelsea, MI: Lewis
Publishers, 1987.
 8E Parámetros de calidad para los métodos analíticos  189

20.0002
lsc
Figura 8.15Una gráfica de
20.0001 control para una balanza analítica
Masa del estándar, g
moderna. Los resultados parecen
fluctuar normalmente alrededor
20.0000
de la media, a excepción de aquellos
obtenidos en el día 17. Una
19.9999 investigación condujo a la conclusión
de que el valor cuestionable fue
lic causado por un platillo sucio de la
19.9998 balanza. lsc 5 límite superior
0 5 10 15 20 25 de control; lic 5 límite inferior de
Muestra (día) control.
Por lo tanto, el valor del lsc = 20.00016 g y el valor del lic = 19.99984 g. Con estos
valores y con las masas medias para cada día, puede trazarse la gráfica de control mostrada
en la figura 8.15. Siempre que la masa media permanezca entre el lsc y el lic, se dice
que la balanza está en control estadístico. En el día 17, la balanza se salió de control y se
realizó una investigación para determinar la causa de esta condición. En este caso parti-
cular, la balanza no había sido limpiada adecuadamente en el día 17, porque se encontró
polvo en el platillo. Las desviaciones sistemáticas de la media son relativamente fáciles de
identificar en una gráfica de control.
En otro ejemplo, una gráfica de control fue utilizada para la producción de medica-
mentos que contenían peróxido de benzoilo, el cual se utiliza para tratar el acné. El pe-
róxido de benzoilo es un eficiente bactericida cuando es aplicado sobre la piel como una
crema o gel que contiene 10% del ingrediente activo. Estas sustancias son reguladas por la
Administración de Alimentos y Fármacos (fda, por sus siglas en inglés) de Estados Uni-
dos. Por ello las concentraciones de peróxido de benzoilo deben ser monitoreadas y man-
tenidas en control estadístico. El peróxido de benzoilo es un agente oxidante que puede
ser combinado con un exceso de yoduro que es titulado con un estándar de tiosulfato de
sodio para proporcionar la medida de peróxido de benzoilo en la muestra.
O O

C C
O O

Fórmula estructural del peróxido de benzoilo.

La gráfica de control de la figura 8.16 muestra los resultados de 89 líneas de produc-

ción de una crema que contiene una concentración nominal de peróxido de benzoilo de
10%, medida en días consecutivos. Cada muestra es representada por el porcentaje medio
de peróxido de benzoilo determinado a partir de los resultados de cinco valoraciones de
diferentes muestras analíticas de la crema. Modelo molecular del peróxido de
La gráfica muestra que hasta el día 83 el proceso de manufactura estuvo bajo control es- benzoilo.
tadístico con fluctuaciones aleatorias normales en la cantidad de peróxido de benzoilo. En el
día 83, el sistema se salió de control con un aumento drástico y sistemático sobre el lsc. Este
aumento causó una considerable preocupación en las instalaciones de la fábrica hasta que se
identificó y corrigió la causa de origen. Estos ejemplos muestran cómo las gráficas de control
son efectivas para presentar datos de control de calidad en una gran variedad de situaciones.
Validación
La validación determina la conveniencia de un análisis para proporcionar la información
buscada y se puede aplicar a las muestras, metodologías y datos. La validación es frecuen-
temente realizada por el analista, pero puede ser efectuada por personal de supervisión.
A menos que se indique lo contrario, todo el contenido de esta página es de © Cengage Learning.
190CAPÍTULO 8 Muestreo, estandarización y calibración

10.2

Porcentaje de peróxido de benzoilo

10.1
lsc
Figura 8.16Gráfica de control
10.0
para monitorear la concentración
de peróxido de benzoilo en una
preparación comercial para comba- 9.9
tir el acné. El proceso de manufac- lic
tura se sale del control estadístico a
partir de la muestra 83 y presenta 9.8
un cambio sistemático en la con- 0 20 40 60 80 100
centración media. Muestra (cantidad de análisis)

La validación de muestras se utiliza a menudo para aceptar a las muestras como miem-
bros de una población estudiada, para admitir muestras para una medición, para estable-
cer la autenticidad de las muestras y para permitir un nuevo muestreo si es necesario. En
el proceso de validación, las muestras pueden ser rechazadas por cuestiones relacionadas
con la identidad de la muestra, cuestiones acerca del manejo de la muestra o al saber que
el método de colecta no fue el apropiado o porque se duda de él. Por ejemplo, la contami-
nación de muestras de sangre durante su colección como evidencia en un examen forense
sería una razón para rechazar las muestras.
Existen varias formas de validar un método analítico. Algunos de ellos fueron discu-
tidos en la sección 5B.4. Los métodos más comunes incluyen el análisis de materiales es-
tándar de referencia (cuando están disponibles), análisis por un método analítico distinto,
análisis de muestras “seleccionadas” y análisis de muestras sintéticas que se aproximan en
composición química a las muestras evaluadas. Los analistas individuales y los laborato-
rios deben demostrar periódicamente la validación de los métodos y técnicas que utilizan.
La validación de datos es el paso último antes de la liberación de resultados. Este pro-
ceso comienza con la validación de las muestras y métodos utilizados. Entonces, los datos
son reportados con límites de incertidumbre estadísticamente válidos después de realizar
una revisión exhaustiva para eliminar errores en el muestreo y en el manejo de muestras,
errores en la realización del análisis, errores en la identificación de muestras y errores en
los cálculos utilizados.

Reporte de resultados analíticos

Los formatos y procedimientos específicos para reportar resultados varían de laboratorio
en laboratorio. Sin embargo, sugerimos unas cuantas directrices. Cuando sea apropiado,
los reportes deben seguir el procedimiento de una buena práctica de laboratorio (bpl).26
Generalmente, los resultados analíticos deben ser reportados como el valor medio y la
desviación estándar. En ocasiones, la desviación estándar de la media se reporta en lugar
de aquella del conjunto de datos. Cualquiera de ellas es aceptable siempre y cuando se es-
pecifique el valor que se reporta. Un intervalo de confianza para la media debe ser repor-
tado también. Normalmente, un nivel de confianza del 95% es un equilibrio razonable
entre ser muy inclusivo o muy restrictivo. De nuevo, el intervalo y su nivel de confianza
deben ser reportados explícitamente. Los resultados de varias pruebas estadísticas de
los datos deben ser reportados también cuando sea conveniente, como debe serlo el
rechazo de datos atípicos junto con el criterio de rechazo.
Las cifras significativas son muy importantes cuando se reportan resultados y deben
estar basadas sobre la evaluación estadística de los datos. Siempre que sea posible, debe

26
J. K. Taylor, Quality Assurance of Chemical Measurements, Chelsea, MI: Lewis Publishers, 1987,
pp. 113–114.

A menos que se indique lo contrario, todo el contenido de esta página es de © Cengage Learning.
 Preguntas y problemas  191

seguirse la convención de cifras significativas establecida en la sección 6D.1. El redondeo

de los datos debe realizarse siguiendo las directrices sugeridas.
Siempre que sea posible, la presentación gráfica debe incluir barras de error en cada
punto de los datos, para indicar la incertidumbre. Algunos programas informáticos de
gráficos permiten que el usuario seleccione distintos límites en la barra de error de 61s,
62s, y así sucesivamente, mientras que otro tipo de software selecciona automáticamente
el tamaño de las barras de error. Siempre que sea apropiado, la ecuación de regresión y su
estadística deben ser también reportadas.
La validación y el reporte de los resultados analíticos no son las partes más glamorosas
del análisis, pero son de las más importantes porque nos dan certeza sobre las conclusiones
extraídas. El reporte es frecuentemente la parte “pública” del procedimiento y debe hacerse
público durante audiencias, pruebas, solicitudes de patente y otros acontecimientos.

Utilice un navegador web para encontrar el método de adiciones de estándar. Encuentre cinco
TAREA diferentes técnicas instrumentales (p. ej. espectrometría de absorción atómica y cromatografía de
EN gases) que utilicen el método de adición de estándares y proporcione las referencias del sitio web
LÍNEA o artículo científico para cada técnica. Describa uno de los métodos con detalle. Incluya la técnica
instrumental, el analito, la matriz de la muestra y cualquier procedimiento del tratamiento de los
datos (adiciones simples o múltiples).

PREGUNTAS Y PROBLEMAS
*8.1 Una muestra de 0.005 g de roca será analizada para
determinar su contenido de hierro al nivel de ppm.
Determine el tipo de análisis y el tipo de componente.
8.2 ¿Cuál es el propósito del paso de muestreo en un
análisis?
*8.3 Describa los pasos en una operación de muestreo.
8.4 ¿Qué factores determinan la masa de una muestra bruta?
*8.5 Los siguientes resultados fueron obtenidos para la deter-
minación de calcio en una muestra de calcita del nist:
%CaO 5 50.33, 50.22, 50.36, 50.21 y 50.44. Cinco
muestras brutas se obtuvieron de un vagón que contenía
calcita. El porcentaje promedio de los valores de CaO
para las muestras brutas fueron 49.53, 50.12, 49.60,
49.87 y 50.49. Calcule la desviación estándar relativa
asociada con el paso de muestreo.
8.6 Un revestimiento que pesa al menos 3.00 mg es nece-
sario para darle vida útil adecuada a una tableta de un
fármaco. Un muestreo aleatorio de 250 tabletas reveló
que 14 fallaron en cumplir este requerimiento.
a) Utilice esta información para estimar la desviación
estándar relativa para la medición.
b) ¿Cuál es el intervalo de confianza al 95% para el
número de tabletas defectuosas?
c) Suponiendo que la fracción de rechazadas perma-
nece sin cambios, ¿cuántas tabletas deben tomarse
para asegurar una desviación estándar relativa de
5% en la medición?
*8.7 Los cambios en el método utilizado para recubrir las
tabletas en el problema 8.6 redujo el porcentaje de recha-
zos de 5.6 al 2.0%. ¿Cuántas tabletas deben tomarse para
inspección si la desviación estándar relativa permitida en
la medición debe ser
a) 20%? b) 12%? c) 7%? d) 2%?
8.8 El manejo inadecuado de un contenedor cargado con
750 cajas de vino provocó que algunas botellas se rom-
pieran. Un ajustador de seguros propuso resolver la
reclamación al 20.8% del valor del embarque, basado
en una muestra aleatoria de 250 botellas en las cuales 52
resultaron dañadas. Calcule
a) la desviación estándar relativa de la evaluación del
ajustador.
b) la desviación estándar relativa para las 750 cajas
(12 botellas por caja).
c) el intervalo de confianza al 90% para el número
total de botellas.
d) el tamaño de un muestreo aleatorio necesario para
una desviación estándar relativa de 5%, suponiendo
una tasa de ruptura de 21%.
*8.9 Aproximadamente 15% de las partículas en un envío de
minerales que contienen plata son identificados como
argentita, Ag2S (d 5 7.3 g cm23, 87% Ag); el resto es
material siliceo (d 5 2.6 g cm23) y esencialmente no
contiene plata.
a) Calcule el número de partículas que deberían ser
tomadas de la muestra bruta si la desviación estándar
relativa debido al muestreo debería ser 2% o menor.
b) Estime la masa de una muestra bruta, suponiendo
que las partículas son esféricas y que tienen un diá-
metro promedio de 3.5 mm.
c) La muestra tomada para el análisis debe pesar 0.500 g
y contener el mismo número de partículas que la