Liceo IPOLL - Salto

INFORME DE LABORATORIO
ESTUDIO CUANTITATIVO DE
PROTEÍNAS SOLUBLES
USO DEL FOTOCOLORÍMETRO

Grupo: 6to CB6 P3

Alumnos: Isabel Viera - Facundo Zunini - Alfonsina Silva

Nombre docente: Ruben Ferreira

OBJETIVO:
- Determinar la concentración de proteínas solubles en agua en muestras de
alimentos.
- Usar un fotocolorímetro e interpretar sus resultados.

MARCO TEÓRICO:

- Análisis cuantitativo; es el que determina la cantidad de proteínas presentes en una

muestra determinada.
- Fotocolorímetro; es un instrumento que mide la absorción de la radiación
electromagnética de una muestra basándose en la comparación de
colores. Utiliza filtros para realizar mediciones en las regiones del
espectro visible, ultravioleta o infrarrojo.

- Proteínas solubles; las proteínas son solubles en agua cuando adoptan una
conformación globular. La solubilidad es debida a los radicales libres de los
aminoácidos que, al ionizarse, establecen enlaces débiles que son los puentes
de hidrógeno con las moléculas de agua. La solubilidad depende del pH,
temperatura, concentración iónica. A pesar de ser solubles la mayoría de las membranas
biológicas son impermeables al paso de proteínas.

- CUESTIONES:

¿Por qué utiliza el filtro 540 y no otro?

Se usará el filtro con el que se registre una absorbancia máxima. Se prefiere utilizar un filtro
de 540 nm para evitar interferencias y para que se cumpla la ley de lambert-beer.
¿Qué expresa la ley de Lambert - Beer? La ley de beer dice: “la intensidad de un haz de luz
monocromática, que incide perpendicular sobre una muestra, decrece exponencialmente
con la concentración de la muestra.” Explica que hay una relación exponencial entre la
transmisión de luz a través de una sustancia y la concentración de la sustancia, así como
también entre la transmisión y la longitud de cuerpo que la luz atraviesa. Esta ley permite
establecer una relación lineal entre absorbancia y concentraciones de una especie
absorbente a una temperatura dada. la representación de absorbancia frente a
concentración es una recta que pasa por el orígen. Sin embargo, se encuentran frecuentes
desviaciones con relación a la proporcionalidad directa entre absorbancias y
concentraciones que limitan la aplicación de la ley.

Las limitaciones de la ley de lambert-beer: limitaciones propias: la ley de beer solo se

cumple en disoluciones diluidas, a concentraciones del orden de 10 -2m, por encima de este
valor la recta se curva debido a que a medida que aumenta la concentración de especies
absorbentes, estas se van aproximando entre ellas hasta que se pone en marcha las
interacciones electrostáticas, alterando la capacidad de las especies a absorber unas
determinadas longitudes de onda.

Limitaciones debidas a desviaciones químicas: tienen lugar cuando el analito se disocia,

asocia o reacciona con el disolvente para dar lugar a un producto con un espectro de
absorción, diferente al del analito. y esta asociación, disociación, reacción depende de la
dilución. La ley de Beer no se cumple debido a los cambios en los equilibrios que se
producen. Cuanto más parecidos sean los coeficientes de absorción molar de las especies,
la relación lineal tiende a ser más recta.

Otros usos de esta ley: la ley de Lambert - Beer permite la determinación de

concentraciones de disoluciones problema, a partir de una recta de calibrado obtenida
midiendo las absorbancias de disoluciones patrón de concentraciones conocidas

MATERIALES:
- Fotocolorímetro - Embudos - Tubos de ensayo y gradillas - Balanza

- Filtro de 540 nm - Papel de filtro - Matraces aforados de 100 y 250 mL - Pera de goma

- Cubeta de lectura - Pipetas - Varilla para agitar - Vaso de bohemia

SUSTANCIAS:
- Agua destilada - Reactivo de Biuret - Ácido acético al 10% (CH3COOH)

- Harina, pan, leche y clara - Acetato de sodio

de huevo. (sodio) (CH3COONa)
PROCEDIMIENTO:
-Harina y Pan: Se diluyen en agua 1 a 2 g de la sustancia, se completa el volumen a 100 mL,
se agita y se deja reposar la sustancia, El líquido se filtra y se usa como solución problema.

-Leche: En un matraz aforado de 100 mL se pone 10 mL de leche y se agrega igual volumen

de agua destilada caliente a 40°C y 1 mL de ácido acético al 10%. Se mezclan los líquidos y
pasados los 10 minutos, se añade 1 mL de acetato de sodio al 2,8%. Se mezclan
nuevamente, se deja enfriar a temperatura ambiente y se enrasa hasta los 100 mL con agua
destilada. Se agita para interponer los líquidos y se deja reposar hasta que se deposite el
coágulo que se ha formado, se filtra y se usa este líquido como solución problema.

-Clara de huevo: Se diluyen en agua 1 o 2 gramos de clara de huevo, se colocan en un matraz

aforado y se lo enrasa. Se agita y luego se filtra, se usa este líquido como solución al
problema.

DATOS Y/O OBSERVACIONES:

Harina; se llega a observar que la sustancia al interactuar con la leche, provoca que se corte.
Pan; una vez que se le introdujo la sustancia en el vaso de bohemia. Se la colocó en el
agitador durante 2 minutos aproximadamente. Cuando quedó listo, el pan quedó
desintegrado
Leche; al principio obtenemos una solución homogénea, una vez colocado a un determinado
tiempo en la centrífuga, luego se observa una separación de fases, donde se obtiene una
solución heterogénea.
Clara de huevo:
Sustancia Absorbencia Diferencia [ ] Concentración g/dL

H20 0,08 0,00 0,0

STD 0,47 0,39 7

Pan 0,9 0,01 0,17

Leche 0,37 0,29 3,2

Harina 0,28 0,20 3,6

Huevo 0,09 0,01 0,17

ANEXO:
CONCLUSIONES:
•Se logró cuantificar las proteínas.
•En base a los resultados hallados mediante la realización del protocolo se logra la
medición de la concentración de proteína total en una muestra.