UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE SANTIAGO

Universidad Del Conocimiento Para Toda La Vida

NOMBRE: Kenia Estefany Fragoso Aybal

MATRICULA: 2-17-4248

1- ¿Qué son las enzimas y cuales factores puedes afectar su actividad biológica?

Una enzima es un catalizador biológico; son moléculas de proteínas que tienen

la capacidad de facilitar y acelerar las reacciones químicas que tienen lugar en
los tejidos vivos, disminuyendo el nivel de la "energía de activación"
propia de la reacción.
Los factores que afectan la actividad enzimática son aquellos agentes o
condiciones que pueden modificar el funcionamiento de las enzimas. Las
enzimas son una clase de proteínas cuya función es acelerar las reacciones
bioquímicas. Estas biomolecular son esenciales para todas las formas de vida,
plantas, hongos, bacterias, protistas y animales.

Dentro de estos factores se encuentran:

 Concentración de enzimas: a medida que va en aumento la

concentración de enzimas, la velocidad de la reacción aumenta de
manera proporcional. Sin embargo, esto es así solo hasta cierta
concentración, pues en un momento determinado la velocidad se hace
constante.

Esta propiedad se utiliza para determinar las actividades de las enzimas séricas
(del suero sanguíneo) para el diagnóstico de enfermedades.
  Concentración de sustrato: el aumento de la concentración de
sustrato incrementa la velocidad de la reacción. Esto se debe a que más
moléculas de sustrato colisionarán con las moléculas de enzima, por lo
que se formará el producto más rápidamente.

Sin embargo, al superar cierta concentración de sustrato no habrá ningún

efecto sobre la velocidad de la reacción, pues las enzimas estarían
saturadas y funcionando a su máxima velocidad.

 pH: Los cambios en la concentración de iones hidrógeno (pH)

influyen considerablemente en la actividad de las enzimas. Debido a
que estos iones poseen carga, generan fuerzas de atracción y repulsión
entre los enlaces de hidrógeno e iónicos de las enzimas. Esta
interferencia produce cambios en la forma de las enzimas, afectando así
su actividad.

Cada enzima tiene un pH óptimo en el que la velocidad de reacción es

máxima. Así, el pH óptimo para una enzima depende de dónde funciona
normalmente.

 Salinidad: La concentración de sales también afecta el potencial iónico

y en consecuencia pueden interferir en ciertos enlaces de las enzimas,
los cuales pueden formar parte del sitio activo de la misma. En estos
casos, al igual que con el pH, la actividad enzimática se verá afectada.

 Temperatura: A medida que aumenta la temperatura aumenta la

actividad enzimática y, en consecuencia, la velocidad de la reacción.
Sin embargo, las temperaturas muy altas desnaturalizan las enzimas,
esto significa que el exceso de energía rompe los enlaces que
mantienen su estructura haciendo que no funcionen de manera óptima.
  Concentración del producto: La acumulación de los productos de
reacción generalmente disminuye la velocidad de la enzima. En algunas
enzimas, los productos se combinan con su sitio activo formando un
complejo suelto y, por lo tanto, inhibiendo la actividad de la enzima.

 Activadores enzimáticos: Algunas de las enzimas requieren la presencia

de otros elementos para funcionar mejor, estos pueden ser cationes
metálicos inorgánicos como Mg2+, Mn2+, Zn2+, Ca2+, Co2+, Cu2+,
Na+, K+, etc.

 Inhibidores enzimáticos: Los inhibidores enzimáticos son sustancias

que afectan negativamente la función de las enzimas y, en
consecuencia, ralentizan o en algunos casos, detienen la catálisis.

Hay tres tipos comunes de inhibición enzimática: competitiva, no competitiva

e inhibición del sustrato.

2- Función las enzimas lipasa y amilasa.

La lipasa es una enzima que se usa en el organismo para disgregar las grasas
de los alimentos de manera que se puedan absorber. Su función principal es
catalizar la hidrólisis de triacilglicerol a glicerol y ácidos grasos libres.

La amilasa es una enzima hidrolasa que tiene la función de catalizar la

reacción de hidrólisis de los enlaces 1-4 entre las unidades de glucosa al
digerir el glucógeno y el almidón para formar fragmentos de glucosa
(dextrinas, maltosa) y glucosa libre.

3- Esquematizar la reacción bioquímica que realiza la amilasa y la lipasa.

AMILASA
LIPASA
4- Valores de referencia (lipasa, amilasa)

 Amilasa normal: 0 a 137 U/L.

 Lipasa normal: 0 a 160 U/L.

5- Procedencia de (amilasa, lipasa)

 Amilasa

(Páncreas y glándulas salivales)

Fuente de tejido: Células acinares del páncreas y glándulas salivales: musculo

esquelético, intestino delgado y trompas de Falopio.

 Lipasa

Esta enzima en general se encuentra en la leche materna y según estudios es idéntica

a la enzima colesterol esterasa por lo que se supone que el origen es pancreático y
llega a las glándulas mamarias a través de la circulación sanguínea.

Entre las lipasas pancreáticas se encuentran: la triglicerol hidrolasa y la

fosfolipasa A2.

6- Isocoras (amilasa, lipasa) y en que la diferencia.

  ISOFORMA AMILASA

Α- AMILASA EC 3.2.1.1 (ALFA)

β- AMILASA EC 3.2.1.2 (BETA)

LIPASA

Diferencia:

La amilasa es una enzima más pequeña, hidrolasa, cataliza la descomposición

del almidón y el glucógeno, ataca los enlaces alfa-1-4.

La lipasa está compuesta mayormente por glicoproteínas.

7- Importancia para diagnóstico clínico (amilasa, lipasa)

 AMILASA: la AMS se incrementa en pancreatitis aguda y otras

afecciones, pero otras determinaciones como la medición de la liaza
incrementan las especificad de las mediciones de AMS en el
diagnóstico de pancreatitis aguda.
  LIPASA: en el diagnóstico de pancreatitis, es más específica en los
trastornos pancreáticos que la AMS.

8- Causas de aumento y disminución (amilasa, lipasa)

AMILASA

 Pancreatitis o inflamación del páncreas.

 Tumores.
 Infección de la vesícula biliar.
 Insuficiencia renal.
 Grandes consumos de carbohidratos.
 Obesidad.
 Medicamentos como: antibióticos (gentamicina), anticoagulantes
(oxalatos), citratos.

LIPASA

 Pancreatitis.
 Presenta aumento en tumores del páncreas o en ciertas enfermedades
del estómago.
 Insuficiencia renal.
 Valores muy bajos podrían sugerir problemas en el páncreas que es
incapaz de producir cantidades suficientes de lipasa. Esta
incapacidad suele producirse en ciertas enfermedades como las fibrosis
quísticas.

9- Cómo se mide nivel de (amilasa, lipasa). Métodos y sus fundamentos

LIPASA

Método cinético para la determinación de lipasa en suero y plasma. La lipasa

hidroliza el sustrato definido 1,2-O-dilauril-racglicerol-3-glutárico-(6’-
metilresorufina)-éster para liberar ácido glutárico-metilresorufina éster,
compuesto inestable que se descompone espontáneamente liberando un
compuesto coloreado (metilresorufina) que se mide a 570 nm. La velocidad de
aparición de color es directamente proporcional a la actividad enzimática.
REACTIVOS PROVISTOS

Reactivo A: buffer de Goods 50 mmol/l, pH 8,0, con colipasa y sales biliares.

B. Reactivo B: solución de 1,2-O-dilauril-rac-glicerol-3-glutárico-(6’-
metilresorufina)-éster (sustrato de la lipasa) en buffer tartrato 10 mmol/l.

INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS REACTIVOS

El Reactivo A es un líquido límpido. Si presenta alguna turbiedad, no

debe ser utilizado. El Reactivo B es una microemulsión levemente
opalescente de color naranja. Si presenta una coloración netamente rojiza,
debe descartarse.

MUESTRA

Suero o plasma heparinizado

a) Recolección: obtener suero de la manera usual. Separar del coágulo lo

más rápidamente posible.

b) Aditivos: en caso de usar plasma, debe utilizarse heparina para su

obtención.

c) Sustancias interferentes conocidas: no se observan interferencias por

bilirrubina hasta 40 mg/dl, hemoglobina hasta 500 mg/dl, triglicéridos hasta
1200 mg/dl. Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las drogas
en el presente método.

d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la lipasa en suero o plasma

es estable una semana refrigerada (2-10o C) y un año en freezer (-20o C).
MATERIAL REQUERIDO

- Material volumétrico para medir los volúmenes indicados.

- Analizador automático

Amilasa

Método cinético a 405 nm para la determinación de amilasa en suero, plasma

u orina. Sustrato CNPG3

FUNDAMENTOS DEL METODO

La α-amilasa hidroliza el sustrato definido 2-cloro-p-nitrofenilα-D-
maltotriósido (CNP-G3) para liberar 2-cloro-p-nitrofenol (CNP), formándose
2-cloro-nitrofenil-α-D-maltósido (CNPG2), maltotriosa (G3) y glucosa. El
CNP absorbe a 405 nm y la velocidad de aparición del color es
directamente proporcional a la actividad enzimática.

REACTIVOS PROVISTOS

Reactivo A: solución conteniendo CNP-G3 2,25 mmol/l, cloruro de calcio

5 mmol/l, cloruro de sodio 70 mmol/l, tiocianato de potasio 900
mmol/l y buffer MES pH 6, 100 mmol/l

MUESTRA

Suero, plasma heparinizado u orina

a) Recolección: si se utiliza suero, obtener de la manera usual. Separar el

suero del coágulo lo más rápidamente posible. En caso de usar plasma éste
debe ser heparinizado. Si se emplea orina, la determinación puede
efectuarse en una muestra de orina ocasional.

b) Aditivos: en caso de usar plasma, debe utilizarse heparina para su

obtención. Si se usa orina ver d).

c) Sustancias interferentes conocidas: no se observan interferencias por

bilirrubina hasta 22 mg/dl (220 mg/l), hemoglobina hasta 180 mg/dl,
triglicéridos hasta 1400 mg/dl (14 g/l), ni heparina hasta 50 U/ml. En el caso
de orina no debe agregarse ácido clorhídrico como conservador. Referirse a la
bibliografía de Young para los efectos de las drogas en el presente método.

d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: en suero la amilasa es

estable durante una semana a temperatura ambiente (si se evita la
contaminación bacteriana) o varios meses refrigerada. En orina, si la muestra
no se procesa en el día, es conveniente ajustar el pH aproximadamente a 7
(con hidróxido de sodio) dado que el pH ácido inactiva la enzima
irreversiblemente. A pH 7 puede conservarse refrigerada por lo menos 10
días sin pérdida de actividad, si no existe contaminación bacteriana.

MATERIAL REQUERIDO

-Espectrofotómetro.

- Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados.

- Cubetas espectrofotométricas de caras paralelas.

- Baño de agua a la temperatura de reacción seleccionada.

- Cronómetro.
CALCULO DE LOS RESULTADOS
Amilasa (U/l) = ∆A/min x factor

Los factores están calculados de acuerdo a la siguiente fórmula general

 dónde: VT: volumen total.

 VM: volumen de muestra
 b: paso óptico.
 εCNP: coeficiente de absortividad milimolar del CNP.
 10-3: factor de conversión (absortividad milimolar a micromolar).