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MATERIA
HISTOLOGIA
TEMA
METODOS HISTOLOGICOS
ANALISIS HISTOLOGICOS
TIPOS DE CORTES HISTOLOGICOS
AUTORES
DOCENTE
Inspección:
Calibración:
Descripción:
Identificación:
Ya que has recopilado toda la información necesaria, trata de reunir las pruebas y
utilizando un proceso de eliminación, identifica finalmente el corte histológico.
Completar:
Recuerda:
Nunca debes sacar conclusiones apresuradas, incluso en los casos cuando estás
seguro del corte histológico que estás viendo. Sigue los pasos que te hemos
explicado en este artículo y solamente en ese momento podrás identificar el corte
exitosamente. (4)
Por lo general, los cortes se cubren con una delgada pieza de vidrio llamada cubreobjetos.
El método de montaje se realiza poniendo una gota de resina sintética (se usan varios
medios de montaje, naturales y sintéticos, siendo el bálsamo del Canadá el más usado y
de los primeros, esto consiste de la resina de pino natural, diluida con xilol) también
aparecen otros medios de montaje como Entellan, el bálsamo sintético, con muchas
mejoras en cuanto a rapidez de secado, no presentar tanta pegajosidad ni tampoco
opalescencia al mirar en el microscopio y si se desea poner una pequeña gota de xileno
sobre la resina (por estar muy espesa), acercar el cubreobjetos al portaobjetos en un
ángulo de 90° de forma horizontal e ir bajando hasta colocarlo completamente, esto
cuidando de no generar burbujas, en caso de haberlas, retirarlas presionando
cuidadosamente sobre el cubreobjetos con unas pinzas de disección nunca poner en
exceso resina o xilol, ya que se embadurna y ensucia por todos lados. En caso de no
utilizar el xileno se coloca de la misma manera el cubreobjetos y se coloca inclinada con
cuidado la laminilla para que caiga poco a poco, se retira el exceso por debajo de la
porta y por encima, la resina excedente. (5)
ANÁLISIS MICROSCÓPICO
Fijación
Tras su extracción del cuerpo, las células o fragmentos de tejidos u órganos se someten
a un proceso denominado fijación, que tiene varias finalidades: evitar que las enzimas
existentes en las propias células (autolisis) o en las bacterias digieran los tejidos;
endurecer los fragmentos y conversar, en gran parte, la estructura y la composición
molecular de los tejidos. La fijación se hacer por métodos químicos, o con menor
frecuencias por métodos físicos. En la fijación química, se sumergen los tejidos en
soluciones de sustancias desnaturalizadoras o de sustancias que estabilizan las
moléculas al formar puentes con las moléculas adyacentes.
El fijador que se emplea con más frecuencias para estudios con microscópico fotónico
es el formol al 10 %. El formol es una solución acuosa del gas formaldehido en una
proporción aproximada de 40 pares de gas en 60 partes de agua.
Inclusión
Para obtener cortes delgados con el micrótomo, después de la fijación de los fragmentos
de órganos o tejidos, estos se infiltran con sustancias que le confieran una consistencia
rígida. Las sustancias más utilizadas para ese fin son la parafina y ciertas resinas ópticas
y las resinas, tanto para la óptica como la electrónica.
Un modo del todo diferente de preparar los cortes de tejidos es el que ocurre después de
someter los tejidos a un congelamiento rápido; de esta manera, estos se fijan por
congelación, un método físico de fijación que los endurece y, así están listos para
cortearse. Se creó un micrótomo por tejidos congelados, el criostato o crio micrótomo,
para hacer cortes de tejidos congelados. Como esta técnica permite la preparación rápida
de cortes sin pasar por el largo procedimiento de deshidratación e inclusión descrito
antes, se lo utiliza habitualmente en hospitales para analizar en pocos minutos muestras
obtenidas durante procedimientos quirúrgicos
Coloración
Para que se les pueda estudiar al microscopio, es preciso colorear la mayoría de los
cortes histológicos porque con pocas excepciones los tejidos son incoloros. Con esa
finalidad, se idearon técnicas de coloración que destacan los diversos componentes de
los tejidos puede ser mayor o menor. Muchos colorantes se comportan como sustancias
de carácter acido o básico y tienden a formar uniones electrostáticas con los
componentes ionizados de los tejidos.
Las piezas, al ser retiradas del fijador o después de haberlas lavado, están embebidas en
agua, lo que impide que sean penetradas por la parafina. Por lo tanto, en primer lugar
debemos deshidratar los tejidos sumergiéndolos en líquidos anhidros, Introducción a la
Biología Celular y Molecular ávidos de agua (Alcohol Etílico, Alcohol Isopropílico,
Alcohol Butílico, Acetona). Para evitar una deshidratación brusca (alteraría la
arquitectura) se aconseja proceder escalonadamente utilizando preferentemente alcohol
etílico de graduación creciente.
Aclaramiento
Se debe embeber la pieza con una sustancia miscible con el alcohol y la parafina
(Xileno, Tolueno, Benceno)
1. Obtención de tejido
Para empezar con la técnica histológica, se debe obtener la muestra del tejido que se
quiere estudiar, para lo cual existen dos formas conocidas como:
2. Fijación
Conservar los tejidos de forma que muestren el mayor parecido posible a su estado
natural, o sea, in vivo
Los líquidos más frecuentemente utilizados, ya sea solos o en combinación con otros
líquidos o sólidos, son el alcohol, la acetona, la formalina, el glutaraldehído y el ácido
acético.
Los agentes más usados para la microscopia fotónica son el formaldehído al 10% y el
glutaraldehído al 3%.
3. Formaldehido al 10%
Consiste en la preparación del tejido para permitir que pueda ser manipulado y cortado
de manera sencilla por el histotecnólogo, por lo que previo a la deshidratación es
necesario lavar bien la muestra al chorro de agua al sacarla de la solución fijadora.
5. Deshidratación
Debido a que gran parte del tejido está constituido por agua, se aplica una serie gradual
de soluciones de menor a mayor concentración de agentes deshidratantes, como el
alcohol etílico, iniciando con alcohol al 50% y luego con soluciones al 60, 70, 80 y 90%
hasta alcanzar de manera paulatina el alcohol al 100% con la finalidad de eliminar agua.
Este proceso se realiza gradualmente debido a que, si se coloca el tejido en una solución
al 100% de alcohol inmediatamente, el agua saldría muy rápido del tejido y éste se
deformaría.
Este proceso se puede realizar de forma manual; sin embargo, en la actualidad se lleva a
cabo de manera automatizada utilizando un equipo especial conocido con el nombre
Histokinette.
6. Clasificación
7. Embebido
Este paso se logra al infiltrar la parafina líquida al tejido, ocupando los espacios que
antes del proceso de deshidratación eran ocupados por agua. Debido al calor, el xilol se
evapora y los espacios anteriormente ocupados por el ahora son ocupados por la
parafina. Este paso por lo general se realiza de manera automatizada en el Histokinette,
aunque también se logra colocando la muestra de tejido en un recipiente y agregándole
parafina fundida a 60°C durante 6h manteniendo la temperatura en una estufa.
8. Inclusión
Con la finalidad de que se puedan obtener cortes suficientemente finos para ser
observados al microscopio, los tejidos tienen que ser incluidos y cubiertos por una
sustancia de consistencia firme. La sustancia usada para este fin es la parafina, que se
deposita líquida en cajas de inclusión especiales para este paso donde se coloca el
tejido, dejándola solidificarse a temperatura ambiente. Así, se forma un bloque sólido de
parafina con el fragmento de tejido incluido; a este bloque se le denomina cubo. El
objetivo de la inclusión es obtener un objeto lo suficientemente duro para su manejo y
corte.
9. Corte
10. Tinción
Después del proceso anterior, los cortes todavía no están listos para su examen al
microscopio, debido a que los tejidos se encuentran infiltrados en parafina y carecen de
color. Para llevar a cabo este paso es necesario emplear una serie de contenedores
denominados en conjunto tren de tinción. Es necesario eliminar la parafina de los cortes
por medio de un solvente orgánico, por lo que deben ser colocados en xilol.
Posteriormente, la muestra se debe rehidratar pasándola por una serie de alcoholes en
graduación decreciente hasta llegar a una solución del 100% de agua. Una vez que el
tejido está rehidratado, se tiñe. La tinción más utilizada es de hematoxilina y eosina,
considera como tinción de rutina en cualquier laboratorio de histopatología. Hoy en día
se cuentan con robots para teñir de manera automatizada.
11. Montaje
Una vez teñido el tejido, se deshidrata de nuevo, de tal manera que pueda fijarse de
modo permanente al cubreobjetos con un medio adecuado para el montaje; por ejemplo,
una gota de bálsamo de Canadá o de resina sintética. Los medios de montaje pueden
ser
miscibles o no miscibles en agua. Si son miscibles en agua, ya no es necesaria la
deshidratación después del teñido, se puede montar directamente.
CORTE LONGITUDINAL
Este tipo de cortes depende de la sección más larga de la muestra, pues se lo realiza en
paralelo a esa sección, puede ser vertical u horizontal y permite obtener una imagen
panorámica de la muestra. Un ejemplo de este corte con objetos de la vida cotidiana está
representado por una manzana, seria en este caso vertical y nos permitiría observar la
cavidad donde se alojan sus semillas, otro ejemplo podríamos encontrarlo en un corte
longitudinal de una sandía que nos permite apreciar una vista horizontal y nos permitiría
ver la disposición de sus semillas horizontalmente a lo largo de la pulpa de la sandía.
CORTE TRANSVERSAL
Estos cortes se los realiza perpendicularmente al eje longitudinal de la muestra a
analizar en otras palabras podemos decir que depende del corte longitudinal y al
contrario del anterior, se lo realizaría en función de la sección más corta de la estructura.
Un ejemplo cotidiano lo obtenemos al cortar una manzana transversalmente, nos
permitiría observar las semillas dispuestas de manera circular alrededor del eje de la
manzana, y observaríamos cavidades en forma de hoja producidas por la implantación
de las semillas, otro ejemplo lo tenemos si observamos un corte transversal de una
sandía en cual se apreciaría, al igual que en la manzana, a sus semillas colocadas
alrededor del eje central de la sandía.
CORTE TANGENCIAL
También denominado rasante, consiste en un corte que se realiza pasando la
cuchilla escasamente por la superficie de la estructura (3), es decir que se corta
simplemente una minúscula parte del tejido ya sea en disposición longitudinal o
transversal, este corte podemos observar muy a menudo en carpintería, que se lo realiza
longitudinalmente y es el corte más común de la madera debido a que muestra una
llamativa disposición de los anillos del árbol como en forma de una “v” invertida. Otro
ejemplo lo podemos obtener al cortar un trozo superficial de una naranja, en la que se
observará la disposición de su contenido según el plano que se haya elegido, trasversal
o longitudinal.
CORTE OBLICUO
Este tipo de cortes se hace de tal modo que exista un ángulo entre el eje longitudinal y
transversal de la estructura, prácticamente es una variación entre los dos primeros
cortes, pasando las cuchillas diagonalmente entre estos dos planos. Un ejemplo de este
tipo de cortes lo encontramos en la gastronomía en cortes de distintos hortalizas,
vegetales o frutas.
6. José Carneiro L.C. Junqueira. Histología Básica Texto y Atlas. tercera ed. Guanabara , K,
editores. Brasil: Editorial Medica Panamericana; 2019.
7. Bravo SP. En Histología Básica Fundamentos de biología celular y del desarrollo humano.;
2016. p. 18-19-20.