Universidad Nacional Autónoma de México

Escuela Nacional Preparatoria

Plantel 9 "Pedro de Alba"

Práctica
Laboratorio Virtual: HHMI Biointeractive,

Prueba de identificación de COVID-19

Materia: Biología V

Equipo: “Los leucocitos”

Integrantes:
Arcos Argueta Dulce Maria
García Hernández Alonso
Lira Morales Tania Elena
Ruiz Valay Laura Rebeca

Grupo 667

18 de marzo del 2021

 Introducción
La pandemia por coronavirus, se inició a partir de diciembre de 2019 en la Provincia Wuhan, China; presuntamente

por un problema de zoonosis. El virus SARS-CoV-2-19 tiene genoma de RNA con 57,719 nucleótidos y contiene 4

proteínas estructurales importantes (Cevallos, 2020; NCBI, 2021).

El virus se transmite a través de pequeñas gotas de saliva provenientes de individuos portadores (enfermos o

asintomáticos). Los virus pueden entrar directamente a las vías respiratorias o través de los ojos. Es importante

mantener siempre las manos limpias y evitar tocarse la cara, pues también es posible infectarse al ponerse en

contacto con superficies contaminadas.

Es necesario seguir cuidadosamente los protocolos de Prevención y Medidas de Seguridad Colectivas, así como la

aplicación de vacunas y terapias biotecnológicas. Actualmente se están aplicando en todo el mundo vacunas con

mRNA, Adenovirus y Coronavirus atenuados para contrarrestar la pandemia (Robles, 2021).

Desde la disciplina de la Biología, es importante conocer en qué consisten las pruebas de identificación del virus

SARS-CoV-2-2019. Actualmente como una medida de contención de la pandemia es necesario realizar las pruebas

diagnósticas pertinentes para identificar el virus en muestras de individuos sospechosos de portarlo. La importancia

del conocimiento de la inmunología y el uso de la biotecnología aplicada al sector salud, ha resultado en gran

beneficio para la humanidad.

Para neutralizar esta pandemia y evitar otras catástrofes naturales, es esencial cambiar el paradigma de nuestra

interacción con el planeta. La situación en la que vivimos es resultado de la crisis de la civilización moderna, en la

que se existen diferentes problemas como el cambio climático, pérdida de la biodiversidad, efecto invernadero, el

aumento de enfermedades, reducción de arrecifes y glaciares, aumento de huracanes; además del incremento de

la población humana; la inequidad social, por lo cual es importante reinventar una “Modernidad Alternativa” con la

recuperación de la naturaleza (con educación ambiental, considerar al ecosistema como sujeto de derechos y

proteger los procesos ecosistémicos), así como, la conciencia de nuestra especie Homo sapiensy el desarrollo de

sistemas democráticos sociales y ecológicos (Toledo, 2019 y Harari, 2020).

Objetivos

Valorar el uso de la biotecnología en respuesta al problema actual de la pandemia.

Utilizar laboratorios virtuales para reforzar las habilidades de manejo y uso de material de laboratorio

Materiales
 Investigación
previa
¿ En qué consiste una prueba de laboratorio ELISA?
El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas o enzimoinmunoanálisis de

adsorción, es un ensayo inmunológico utilizado para medir anticuerpos,

antígenos, proteínas y glicoproteínas en muestras biológicas. La prueba se hace

usando una superficie sólida a la que se adhieren las moléculas. En la etapa

final, se produce una reacción enzimática que causa un cambio de color que

puede leerse mediante el uso de una máquina especial y se puede usar para

ayudar a diagnosticar ciertas enfermedades.

¿ Qué es un antígeno?
Cualquier sustancia que haga que el cuerpo produzca una respuesta inmunitaria

contra ella. Incluyen toxinas, sustancias químicas, bacterias, virus u otras

sustancias externas al cuerpo. Los tejidos y las células corporales, incluso las

células cancerosas, también contienen antígenos que pueden producir una

respuesta inmunitaria. Estos antígenos también se pueden usar como

marcadores en pruebas de laboratorio para identificar esos tejidos o células.

¿ Qué es un anticuerpo?
Los anticuerpos son proteínas que forman parte del sistema inmune y circulan

por la sangre. Cuando reconocen sustancias extrañas para el organismo, como

los virus y las bacterias o sus toxinas, las neutralizan. Una vez el cuerpo se ha

expuesto a una sustancia foránea concreta, también llamada antígeno, los

anticuerpos producidos para atacarlo persisten en la sangre, ofreciendo

protección en el caso que, en un futuro, volvamos a contactar con el mismo

antígeno.

 Resultados
PASO MATERIALES CONCENTRACIÓN RESULTADO

Disolución 1:2
1 mL de la muestra Con ayuda de las pipetas extraemos la
Muestras sanguíneas
sanguínea. cantidad necesaria de cada elemento
(A,B y C) previamente
1 mL de solución PBS (muestra sanguínea y/o solución PBS) para
centrifugadas. formar las disoluciones pertinentes.
Formación Disolución 1:10
de Pipetas 1 mL de muestra Estas nuevas disoluciones serán nuestra
disoluciones sanguínea base para la prueba de laboratorio, ya que
Tubos de ensayo 9 mL de solución PBS las analizaremos para poder concluir si el
antígeno se encuentra presente en los
Solución PBS Disolución 1:100 pacientes.
0.1 mL de muestra
sanguínea
9.9 mL de solución PBS

Disoluciones de las

muestras sanguíneas

0.1 mL de cada una de

obtenidas

las disoluciones
Con ayuda de las pipetas extraemos

anteriormente.
obtenidas
0.1 mL de cada una de las disoluciones

Anticuerpo primario
anteriormente. de las muestras sanguíneas, del

Preparación
anti-DNA (Control
anticuerpo primario anti-DNA y

de la placa 0.1 mL anticuerpo

positivo) solución PBS.

ELISA primario anti-DNA

Solución PBS (control

(Control positivo) El control positivo y negativo son

negativo). utilizados como calibradores para

0.1 mL solución PBS

poder evaluar el ensayo.
Placa ELISA (control negativo).

Pipetas

Una vez que la placa haya salido de la

incubadora es importante que con ayuda
de una pipeta extraigamos los fluidos, y
Placa ELISA después, procedamos a lavar la placa con
Lavado de 0.1 mL de solución PBS (el lavado se repite
la placa Pipetas O.1 mL de solución PBS. de 3 a 6 veces).

Solucion PBS Si no lavamos la placa esto afectara

nuestros resultados, provocando que
obtengamos falsos positivos y negativos.
 PASO MATERIALES CONCENTRACIÓN RESULTADO

Solución tamponada
Usando la pipeta Eppendorf agregamos a

con anticuerpo
la place ELISA 0.1 mL de solución

secundaria. tamponada con anticuerpo secundario.

Agregado 0.1 mL de solución
de tamponada con
Placa Elisa El anticuerpo secundario contiene una

anticuerpo secundaria.
anticuerpo enzima que reaccionara con el sustrato en

Pipeta Eppendorf el siguiente paso.

Placa ELISA Usando la pipeta Eppendorf

agregamos a la placa ELISA 0.1 mL de

Pipeta 0.1 ml de solución

solución tamponada con HRP-

tamponada que
substrate.
Agregado Solución tamponada
contenga el sustrato

del que contenga el

químico (HRP-
El sustrato químico reaccionara y se

sustrato sustrato químico

substrate). tornara de color amarrillo en las zonas

químico (HRP-substrate). donde se encuentre presente el

anticuerpo.

NOTA:
Se pueden presentar los falsos Resultado

positivos o negativos si falso

cometemos algún error u positivo

omitimos algún paso del
estudio.

Por lo anterior es importante

a
tomar prestar atención a cad
paso que hacemos.

Resultado

correcto.
 CUESTIONARIO
¿Qué indica un resultado negativo de la prueba?
Indica que en la muestra del paciente no se detectó el antígeno/anticuerpo de la afección por

la que se hace la prueba.

¿Qué indica un resultado positivo de la prueba?.

Este resultado de la prueba indica que sí se detectó el antígeno/anticuerpo de la afección en la muestra

del paciente, esto quiere decir que el paciente tiene la enfermedad.

¿Por qué existen falsos positivos y negativos de la prueba?

Los falsos negativos pueden ocurrir por diversos motivos tales como:
El periodo de tiempo que transcurre desde que la persona se infecta del virus hasta el momento en el

que el sistema inmunológico produce niveles de anticuerpos detectables mediante las pruebas

diagnósticas.

La capacidad diagnóstica de proceso completo, no está exento de fallos, sobre todo por la

complejidad de la fase pre-analítica, (toma de muestras, envasado, etiquetado, envió, transporte,

manipulación, conservación, entre otros).

Según el estudio de Lauren et al (2020) dan oscilaciones de falsos negativos, dependiendo del día del

procesamiento de la muestra, antes de la aparición de los síntomas, con unas tasas del 38% al 20% de

falsos negativos.

Los falsos positivos pueden ocurrir por diversos motivos tales como:
Las reacciones cruzadas producto de las interacciones con moléculas presentes en la sangre de las

personas estudiadas.

Factores dependientes del laboratorio. Entre ellos la calidad de las muestras sanguíneas (fallos en la

extracción o su identificación, contaminación bacteriana e inadecuada conservación), y la

especificidad del ensayo utilizado. (Álvarez-Carrasco, 2017)

¿Cómo funciona el factor antígeno-anticuerpo en esta prueba?

La técnica ELISA se fundamenta en la premisa de que luego de acoplar antígenos solubles o anticuerpos a

una matriz sólida insoluble, éstos retienen la actividad inmunológica, y que a su vez estas biomoléculas

pueden unirse a una enzima, reteniendo el conjugado resultante.

Mencione tres ventajas y tres desventajas de esta prueba.

Ventajas Desventajas
Su principal ventaja es su alto grado de
Se pueden producir falsos positivos o

sensibilidad, detectabilidad, precisión y

falsos negativos.

exactitud. Existe la posibilidad de que se presenten

reacciones inespecíficas, reactividad

Indica en qué fase de la infección se

cruzada y sensibilidad a inhibidores de la

encuentra la persona de estudio. actividad enzimática.

La extensa duración temporal que

Puede procesarse lo mismo un número

conlleva.

pequeño que grande de muestras. Requiere equipo sofisticado y técnicos

capacitados, y suministro constante de

Es posible determinar moléculas de alto

electricidad.

peso molecular. Las mutaciones de moléculas de

anticuerpos y antígenos reducen la

Por su diseño permite realizar un gran

sensibilidad diagnóstica del método.

numero de pruebas de manera simultanea. Los ELISA no son útiles para identificar la

infección de los neonatos o lactantes de

madres VIH positivas en los primeros 18

meses de vida porque los anticuerpos

maternos atraviesan la placenta y pueden

persistir por ese lapso

 Conclusión
El proceso ELISA es utilizado para poder detectar
antígenos presentes en la muestra sanguínea de una
persona. Este análisis puede detectar varios tipos de
antígenos, para esta practica se detectó el lupus
eritematoso sistémico.

Esta práctica nos fue de ayuda para poder realizar un

análisis y entender cómo es que sirven, ya que pudimos
observar el proceso y función de cada elemento utilizado
en este. Además de permitirnos observar las
implicaciones que conlleva cometer un error que, por
mínimo que sea, puede cambiar de manera drástica el
resultado obtenido.

Consideramos en base a lo aprendido que es importante

ser cuidadosos y poner atención a cada detalle de cada
paso de los procedimientos que debamos seguir, porque
en la vida real un error de este tipo puede conllevar a
consecuencias que afectarían en gran medida la vida de
nuestros pacientes.
 Referencias
Álvarez-Carrasco, R. (2017). Interpretación de las pruebas usadas para diagnosticar la infección por virus de la -----

----.......inmunodeficiencia humana. Scielo Perú. Recuperado el 18 de marzo de 2022, de: ----------------------------------

----------http://www.scielo.org.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1728-59172017000400009

Carrasco, L., Reinhardt, G. y Riedemann, S. (2001). Comparación entre dos técnicas de diagnóstico para diarrea -

-----..---viral bovina (DVB) en 50 predios de la X región, Chile. Seroneutralization y enzimoinmunoensayo

............indirecto (ELISA-I)*. Scielo Peú. Recuperado el 18 de marzo de 2022, de:

-...........https://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0301-732X2001000200006

Instituto de Investigaciones Jurídicas de la UNAM. (2016). Capitulo Segundo. Derechos y Padecimientos. UNAM.

...........Recuperado el 18 de marzo de 2022, de: https://archivos.juridicas.unam.mx/www/bjv/libros/9/4326/6.pdf

Instituto Nacional del Cáncer. (2009). Antígeno. En diccionario del National Cancer Institute. Recuperado el 17 de

...........marzo de-2022, de: https://www.cancer.gov/espanol/publicaciones/diccionarios/diccionario-

...........cancer/def/antigeno

Instituto Nacional del Cáncer. (2019). ELISA. En diccionario del National Cancer Institute. Recuperado el 17 de

............marzo de 2022, de: https://www.cancer.gov/espanol/publicaciones/diccionarios/diccionario-cancer/def/elisa

Lauren, M. et al. (2020). Variation in False-Negative Rate of Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction–
............Based SARS-CoV-2 Tests by Time Since Exposure. Recuperado el 17 de marzo del 2022, de:

............https://doi.org/10.7326/M20-1495

National Human Genome Research Institute. (2011). Anticuerpo. Talking Glossary of Genetic Terms NIH.

............Recuperado el 17 de marzo de 2022, de: https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Anticuerpo

Ochoa, R. (2012). Capitulo I. Inmunoensayos enzimáticos. Generalidades. En Técnicas inmunoenzimáticas para

...........ensayos clínicos de vacunas y estudios inmunoepidemiológicos. Recuperado el 18 de marzo de 2022, de:

...........https://www.paho.org/cub/dmdocuments/PubFINLAY-LIBROTecInmunoParaEClinVacunas2012.pdf

Oyonarte, C. (2020). COVID-19 Resultados falsos negativos y falsos positivos. Sociedad Andaluz Sanac.

............Recuperado el 17 de marzo del 2022, de: https://www.sanac.org/images/site/COVID19-falsos-

............negativos_2.pdf
 Biología V

Arcos Argueta Dulce Maria

García Hernández Alonso
Lira Morales Tania Elena
Ruíz Valay Laura Rebecca

667
Introducción
Debido a la situación actual con la pandemia por el virus del SARS-CoV-2
las pruebas de diagnóstico se han hecho necesarias.
Dado lo anterior, es indispensable que estas pruebas sean confiables a la
hora de emitir un resultado, contribuyendo a su diagnóstico oportuno,
reduciendo la posibilidad de clasificar a individuos como falsos negativos,
los que podrían propagar la enfermedad.
Las pruebas de detección del SARS-CoV-2, el virus que causa el COVID-19,
se encargan de identificar a las personas infectados y ayudar a prevenir
una futura transmisión y reducir el numero de casos de contagios.
Actualmente, contamos con múltiples pruebas para el diagnóstico del
COVID-19; por ejemplo, la prueba PCR y antígeno.
Estas pruebas no solo son capaces de realizar diagnósticos de COVID-19,
sino también padecimientos; por ejemplo, el virus del VIH.
En esta practica con ayuda de un simulador virtual podremos realizar el
desarrollo de un análisis ELISA ( acrónimo en inglés para
enzimoinmunoanálisis de adsorción), para el diagnóstico de LES (Lupus
eritematoso sistémico) mediante el uso de un antígeno especifico.
 Desarrollo

1. Nos colocamos el equipo de 2. Centrifugamos las muestras

seguridad. de sangre con el objetivo de
obtener el suero de cada una de
ellas.
 Proporciones de
disolución:
1. Disolución 1:2
2. Disolución 1:10
3. Disolución
1:100

3. Las muestras se 5. Tomamos la muestra A y

4. Una vez transcurridos los
centrifugaron durante 15 min a con ayuda de pipetas
15 min se obtuvo el suero de
temperatura ambiente. extrajimos su suero para
cada muestra.
poder preparar 3
disoluciones.
6. Ahora colocamos solución PBS 8. Con ayuda de pipeta Eppendorf
en cada tubo de ensayo para 7. Mezclamos las 3 disoluciones preparamos una placa ELISA con 0.1
poder prepara la disolución con mL de las diferentes disoluciones del
el suero. suero.
9. Repetimos del paso 5 al 8 con
las muestras B y C.
10. De esta forma queda nuestra
placa ELISA con las
disoluciones.
11. Añadimos a la placa 0.1 ml
de anticuerpo primario anti-
DNA (Control positivo) y 0.1 ml
de solución PBS (control
negativo).
12. Así debe verse la placa una 13. Incubamos la placa ELISA 14. Removemos los fluidos de la
vez concluidos los pasos por 15 min a 37°C. placa con ayuda de una pipeta
anteriores. Eppendorf .
 17. Incubamos la placa
15. Con ayuda de la pipeta 16. Agregamos 0.1 mL de
ELISA por 15 min a 37°C.
Eppendorf y 0.1 mL de PBS solución tampón que contenga
lavamos la placa ELISA. un anticuerpo secundario que
reconozca los anticuerpos
humanos.
 19. Con ayuda dela pipeta y
18. Removemos los fluidos de la
0.1 ml PBS lavamos la placa
placa con ayuda de una pipeta.
ELISA.
20. Agregamos 0.1 ml de solución
tampón que contenga el sustrato
químico (HRP-substrate). Si el
anticuerpo esta presente se
tornara de color amarrillo.
 23. En base a lo observado en el
paso 22 podemos concluir que:
• El paciente A tenga LES.
• El paciente B podría tenerlo
pero se requieren más
pruebas.
• El paciente C probablemente
no lo tenga..
21. Esperamos 15 min. 22. Y estos son nuestros
resultados.