MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO PROTECCION VEGETAL

USAC CENTRO UNIVERSITARIO DE OCCIDENTE GAL INSTRUCTIVO

Práctica No. 5 Ing. Agr. William Villatoro
IDENTIFICACION DE HONGOS FITOPATOGENOS 6
INTRODUCCION:
La micología estudia los hongos y a los falsos hongos, estos últimos denominados antes como
ficomicetes, se clasificaban con este nombre como una clase de la división “Eumycota” y se describían
como hongos con micelio no tabicado con esporas flageladas (Oomicetes) y con esporas no flageladas
(Zigomicetes).
Los ficomicetes se clasifican actualmente dentro del Reino Chromista y se les ubica como el filum
Oomycota y se les caracteriza por su micelio cenocítico (sin tabiques) y sus zooesporas asexuales
flageladas, condición que provoca que su reproducción y desarrollo estén muy ligados al agua. Las
especies fitoparásitas son conocidas como mildius o como royas blancas.
La reproducción sexual ocurre por contacto gametangial; y recibe el nombre de oogamia, ya que el
gametangio femenino (oogonio), de gran tamaño, tras ser fecundado por el anteridio dará lugar a una o
varias oósporas. A diferencia de los hongos verdaderos, son diploides.
La reproducción asexual, se realiza mediante zoósporas que se forman en esporangios. Las zoósporas
son biflageladas, y algunas especies pueden formarlas de dos tipos: primarias, con los flagelos en el ápice
(consideradas más primitivas) y secundarias, de aspecto reniforme y con los flagelos insertos
lateralmente. Las zoósporas pueden enquistarse. En algunos casos, los esporangios no forman esporas,
sino que germinan directamente, comportándose como conidios. Esta es una peculiar adaptación a la
vida terrestre. Ejemplos de ficomicetes son: hongos de suelo poco especializados y que provocan
podredumbres de postcosecha o en semillero (Pythium), hongos más especializados que atacan a nivel
de raíz y cuello (muchas especies de Phytophthora), y hongos muy especializados, las royas blancas, que
han llegado a un grado de parasitismo muy similar al de las verdaderas royas.
Por aparte dentro los hongos verdaderos (Reino Fungi) se incluye a las divisiones Ascomycota y
Basidiomycota. Los Ascomycota se caracterizan por su micelio con hifas delgadas y septadas (con
tabiques) y por sus estructuras de reproducción denominadas ascosporas, contenidas en un asca.
También se caracterizan porque en muchas especies las ascas pueden estar contenidas en estructuras
fructificantes denominadas ascocarpo y que funcionan también como estructuras de conservación.
Dentro de esta división se incluye a los fungi imperfecti u hongos imperfectos (Deuteromycota), de los
cuales solo se conoce su fase anamórfica (asexual) y no su forma teleomórfica (sexual). La reproducción
sexual de Ascomycota es por contacto gametangial, su propagación es por conídias a partir de células
conidiógenas y algunas especies desarrollan esclerotes, como otra forma de estructuras de resistencia.
Los basidiomycota por su lado incluyen hongos conocidos comúnmente como royas y carbones, se
caracterizan por sus hifas también septadas, por la generación sexual de basidiosporas a partir de una
hifa diferenciada denominada basidia y por sus estructuras reproductivas llamadas espermogonio y
picniosporas. También forman estructuras propagativas denominadas uredosporas y aecioporas y
estructuras de conservación denominadas teliosporas, ryzomorfos y esclerotes.
Tanto Oomycota, Ascomycota como Basidiomycota, incluyen especies que son importantes plagas
agrícolas y forestales, razón por la cual su identificación y caracterización para el diagnóstico es de suma
importancia; esto incluye la diferenciación de signos y síntomas y el conocimiento de biología y

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morfología, y dentro de la morfología la identificación de estructuras características, y este es el
propósito de la presente práctica.

RESULTADOS DE APRENDIZAJE:
Los estudiantes al final del proceso:
1. Analizan, comprenden e interpretan las instrucciones e información proporcionadas para el
desarrollo de la “pre-práctica” y “práctica”
2. Los estudiantes describen los síntomas y signos relacionados con los falsos hongos Oomycota, y
los hongos verdaderos Ascomycota y Basidiomycota, y aplican este conocimiento al diagnóstico
de campo.
3. Observan, analizan e interpretan los fenómenos y factores asociados a la ocurrencia de “mildius,
royas blancas, oidios, royas y carbones”.
4. Conocen y aplican procedimientos y técnicas de recolección, procesamiento y transporte de
muestras del campo al laboratorio.
5. Redactan e informan correctamente por escrito los fenómenos, procesos, técnicas y resultados
de sus actividades en campó y laboratorio.
6. Preparan correctamente montajes microscópicos de pseudo hongos y hongos, y describen las
técnicas utilizadas.

MATERIALES Y EQUIPO:
1. Estereoscopio
2. Microscopio compuesto
3. Montajes permanentes de hongos
4. Lactofenol
5. Azul de metileno
6. Agua destilada
7. Muestras proporcionadas por el estudiante y obtenidas en el periodo de pre-práctica.
8. Bolsas plásticas de cierre hermético
9. Hojas de afeitar
10. Papel mayordomo
11. Cinta adhesiva
12. Porta y cubreobjetos
13. Sobres de papel o bolsas de papel para transporte de muestras

ACTIVIDADES DE APRENDIZAJE:
Pre-practica
1. el estudiante visitará áreas con presencia de pino, pinabete, ciprés, eucalipto y de cítricos,
analizará el entorno, las condiciones de manejo, la situación climática y de suelo y reportará lo
observado en el anexo correspondiente (Anexo I Reporte de Pre-práctica y Práctica ).

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2. Haciendo una aplicación práctica de los conceptos de enfermedad, síntoma y signo, el estudiante
recolectará y hará una clasificación1 preliminar todas aquellas manifestaciones visibles de que la
planta está siendo afectada (alterada) en sus funciones por la acción de pseudohongos y/u
hongos verdaderos.
3. Las muestras recolectadas serán transportadas al laboratorio en bolsas plásticas de cierre
hermético o en sobres de papel, etiquetadas2. con la siguiente información: número de muestra,
lugar de recolección, fecha de recolección, especie afectada, parte afectada y clasificación del
síntoma y signo.
4. Como requisito de admisión y asistencia deberá el estudiante presentar las muestras
recolectadas y entregar el reporte pre-práctica, deberá conservar y llevar impresa una copia del
reporte para completarlo durante la práctica y que se constituirá en su reporte de práctica.

Práctica
1. Los estudiantes trabajarán en el grupo asignado.
2. Verificarán que el equipo proporcionado este completo y en buen estado.
3. Observarán montajes permanentes de hongos como ejemplo del producto final que se desea
obtener en la práctica.
4. Tomarán tres muestra por cada integrante de grupo que manifieste signos de enfermedad
ocasionados por hongos y/o pseudohongos y procederán a realizar montajes aplicando las
técnicas propuestas para el montaje de hongos fitopatógenos:
5. Caracterizará al menos dos especies de cada división (Oomycota, Ascomycota y Basidiomycota)
de acuerdo a: síntomas y signos, estructuras de reproducción, tipo de micelio (cenocítico o no
cenocítico) y estructuras de propagación y de resistencia. Reportarán sus resultados en el Anexo
I, reporte de prepráctica y práctica.

MONTAJE CON CINTA ADHESIVA

Es la técnica más rápida y fácil y las preparaciones son temporales. No se usa para montajes a partir de
raíces especialmente si tienen partículas de suelo adheridas.
1. Colocar una pequeña gota de lactofenol azul (lactofenol + azul de metileno) en el centro de un
portaobjetos.
2. Cortar un trozo de cinta más grande que la longitud de portaobjetos.
3. Tomar la cinta por los extremos, rozar o colocar suavemente la superficie engomada sobre la
zona de crecimiento del hongo en el hospedante evitando tomar material en exceso o evitando
adherir estructuras foliares que obstaculicen las observaciones.

1
LOS CRITERIOS DE CLASIFICACIÓN SERÁN:
SINTOMAS: Área, tamaño, posición y tipo: pre necróticos, necróticos, atróficos, hipertróficos, complejos, especiales
(deberá incluir subtipos).
SIGNOS: micelio, esclerocios, rizomorfos, royas –pústulas-, oídios, mildius, carbón, fumagina, moho, basidiocarpos,
exudaciones, quistes.
Auxíliese con anexo III P1 Síntoma de enfermedad y anexo IV P1 Introd Fitopat Síntomas..
2
RECORTE Y USE LAS ETIQUETAS QUE APARECEN EN LA ULTIMA HOJA ADJUNTA

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4. Pegar la cinta al portaobjetos manteniéndola estirada con las dos manos teniendo el cuidado
que pegue rápidamente en los extremos.
5. Enfocar con el objetivo 4X y observar con los objetivos 10X y 40X.

Una buena preparación es aquella que no presenta material en exceso, que contiene las estructuras
típicas del hongo y están se encuentran bien separadas y con un arreglo estético.

MONTAJE CON AGUJA DE DISECCION

Es útil para montar estructuras que se desarrollan abundantemente en la superficie del hospedante, o a
partir de cepas que crecen en medios de cultivo. Es la preparación obligada para hacer preparaciones a
partir de raíces infectadas.
1. Colocar una pequeña gota de lactofenol azul en un portaobjetos.
2. Con la punta de la aguja humedecida rozar las estructuras que se desean montar. Auxiliarse del
microscopio estereoscópico.
3. Transferir el material a la gota en el portaobjetos, cubrir con un laminilla (cubreobjetos), enfocar
con objetivo 4X y observar con objetivos 10X y 40X.

CORTES DE CUERPOS FRUCTIFEROS

Ha veces se hace necesario observar estructuras que se encuentran parcial totalmente inmersas en el
hospedante, o que están encerradas en cuerpos fructíferos, esto demanda la realización de cortes
transversales que pueden hacerse con aparatos especiales, pero que también se pueden hacer
manualmente y para este último caso el método es el siguiente:
1. Auxiliándose del microscopio estereoscópico cortar una porción superficial de tejido enfermo
con una hoja de afeitar dejando tiras de 1 a 3 cm de largo, 1 a 3 mm de ancho y 0.5 a 2 mm de
grosor.
2. Con la hoja de afeitar separar el tejido adyacente que se encuentra adelante y a los lados del
cuerpo fructífero, este quedará delimitado y listo para los cortes definitivos.
3. Colocar el dedo índice de la mano izquierda junto al cuerpo fructífero a cortar, de manera que al
recargar la hoja de afeitar en el dedo índice, este guie y regule el espesor de los cortes, estos
deben ser lo más delgado posibles, transversales y hechos de un solo tajo.
4. Los cortes que quedan adheridos a un lado de la hoja de afeitar, se toman con una aguja de
disección humedecida y se transfieren al portaobjetos que ya contiene una gota de lactofenol
más azul de metileno. Colocar el cubreobjetos, enfocar con objetivo 4X y observar con objetivos
10X y 40X.

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PROTECCION VEGETAL PROTECCION VEGETAL
ETIQUETA : RECOLECCION DE MUESTRAS ETIQUETA : RECOLECCION DE MUESTRAS
Número de muestra Número de muestra

Lugar de recolección Lugar de recolección

Fecha de recolección Fecha de recolección

Hospedero Hospedero

Parte afectada Parte afectada

AREA TAMAÑO AREA TAMAÑO

Clasificación del Clasificación del
síntoma POSICION TIPO
síntoma POSICION TIPO

MICELIO OIDIO MOHO MICELIO OIDIO MOHO

Clasificación de ESCLEROCIOS MILDIU BASIDIOCARPO Clasificación de ESCLEROCIOS MILDIU BASIDIOCARPO
RIZOMORFOS CARBON EXUDACION RIZOMORFOS CARBON EXUDACION
signos ROYA FUMAGINA QUISTE signos ROYA FUMAGINA QUISTE

PROTECCION VEGETAL PROTECCION VEGETAL

ETIQUETA : RECOLECCION DE MUESTRAS ETIQUETA : RECOLECCION DE MUESTRAS
Número de muestra Número de muestra

Lugar de recolección Lugar de recolección

Fecha de recolección Fecha de recolección

Hospedero Hospedero

Parte afectada Parte afectada

AREA TAMAÑO AREA TAMAÑO

Clasificación del Clasificación del
síntoma POSICION TIPO
síntoma POSICION TIPO

MICELIO OIDIO MOHO MICELIO OIDIO MOHO

Clasificación de ESCLEROCIOS MILDIU BASIDIOCARPO Clasificación de ESCLEROCIOS MILDIU BASIDIOCARPO
RIZOMORFOS CARBON EXUDACION RIZOMORFOS CARBON EXUDACION
signos ROYA FUMAGINA QUISTE signos ROYA FUMAGINA QUISTE