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Practica 7 bioquimica - tfasfasf

Bioquimica (Universidad Nacional de San Agustín de Arequipa)

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FACULTAD: Ingeniería Civil

INFORMEDEPRÁCTICAS

ESCUELA: Ingeniería Sanitaria

TRANSPORTEELECTRONICO

INSTITUCIÓN: Universidad Nacional de San Agustín

DOCENTE: Frey Francisco Romero Vargas
ALUMNO: George Jhordan Alarcón Lipa
FECHADEENTREGA: 4 de junio del 2021
CURSO: Bioquímica
GRUPO: “A”

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PRÁCTICA 7
TRANSPORTE ELECTRONICO: ESTUDIO DE LA ACCION ENZIMATICA
DE LA SUCCINATO DESHIDROGENASA Y DE LACTATO
DESHIDROGENASA

OBJETIVO
• Poner de manifiesto experimentalmente una de las etapas del metabolismo
intermediario y la acción de las enzimas de oxido-reducción, haciendo uso de un
aceptor de electrones como el azul de metileno
• Verificar la acción inhibitoria del malonato sobre la succinato deshidrogenasa y
del cianuro a nivel de la cadena respiratoria mitocondrial
ESTUDIO DE LA SUCCINATO DESHIDROGENASA

1. FUNDAMENTO TEORICO
Las transformaciones biológicas de sustratos comprenden procesos de oxido -
recucción y transferencia de electrones a través de una serie de sistemas
enzimáticos. En las oxido-reducciones se produce transferencia de electrones a
partir de un dador hasta un aceptor. Algunas veces el transporte de electrones es
realizado mediante la transferencia de átomos de hidrógeno o bien átomos de
hidrógeno y un electrón. Las enzimas que realizan este tipo de reaccione son las
deshidrogenasas pudiendo ser piridin (NAD, NADH) o flavina (FAD)
dependientes; además existen los citocromos que son de naturaleza
ferroporfirínica y se encuentran ordenados de acuerdo a su potencial de oxido
reducción constituyendo la llamada "Cadena de Transporte Mitocondrial".
Algunos compuestos orgánicos coloreados, al aceptar hidrógenos se convierten
en leucoderivados. Tal es el caso del azul de metileno cuyo potencial de oxido-
reducción es +0.01 y el 2,6-diclorofenolindofenol cuyo potencial de oxido-
reducción es +0.22. La succinato deshidrogenasa (SHD) es una flavoproteína
unida a hierro no hémico. El metal tiene como finalidad actuar como enlace para
conservación de energía y desacoplar los dos equivalentes reductores del ion
hidrogeno aceptado por la flavina y, finalmente estabilizar la forma semiquinoide
de la flavina. Diversas sustancias pueden actuar inhibiendo los sistemas
biológicos de oxidoreducción. Por ejemplo, el malonato actúa específicamente
inhibiendo a la succinato deshidrogenasa por un mecanismo competitivo; por lo
tanto la prueba experimental con azul de metileno será negativa, es decir no se
decolora por no haber movilización de electrones. El cianuro, actúa impidiendo la
reoxidación de los citocromos, pues se combina específicamente con el Fe++ de
la citocromo oxidasa; por ello los citocromos permanecen reducidos e incapaces
de seguir actuando y se bloquea la respiraciónDeterminar constantes cinéticas,
empleando como sustrato p-nitrofenil-

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2. PARTE EXPERIMETAL
MATERIALES
• Sucrosa 0.25M
• Succinato de sodio 0.1M
• Buffer fosfato pH 7.4 0.1M
• Azul de metileno 0.05%
• Aceite mineral
• Tubos de ensayo
• Pipetas
• Morteros
• Centrifuga
MÉTODO DE TRABAJO
A. Preparación del homogenizado. . Colocar un mortero sobre hielo picado, luego pesar
10.0 g. de hígado, corazón o músculo de rata o de conejo; picarlo y colocarlo sobre el
mortero. Añadir 90.0 ml de sucrosa 0.25 M la cual debe estar fría, homogenizar y luego
centrifugar a 8000 rpm durante 10 min. Decantar el sobrenadante en un beaker y
guardarlo e frío hasta su uso.

Prepare el siguiente sistema de tubos:

El contenido de cada uno de los tubos se mezcla rápidamente antes de agregar el aceite
mineral, el cual tiene la función de crear un medio libre de oxígeno. Llevar a baño maría
a 37°C observar el descoloramiento de cada tubo cada 5 min. Discuta los resultados.

3. CONCLUSIONES
• La energía de la transferencia de electrones se conserva eficientemente den
un gradiente de protones.
• Se usa electrones desde un donador ya sea NADH o FADH y los pasa aun
aceptador de electrones final como el O2

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4. CUESTIONARIO
1. Haga un esquema de la oxidación del succinato por acción del succinato
deshidrogenasa, además acople la cadena respiratoria para indicar el
destino final del hidrógeno y de los electrones del succinato.

2. Cuál es el efecto de cada uno de los siguientes inhibidores sobre el

transporte electrónico y la formación de ATP en la cadena respiratoria.
A. Azida
Es capaz de inhibir a la enzima citocromo se oxida formando así un enlace
irreversible con el factor hemo, que es un proceso similar realizado por el
monóxido de carbono
B. Atractilósido
Actúan dentro del complejo enzimático que empieza a catalizar la síntesis
de ATP bloqueando así el paso en el cual el ADP se une con el fosfato
impidiendo que la energía potencial electroquímico llegue al sistema
fosforillante
C. Rotenoma
La NADH-deshidrogenasa, impide la transferencia de electrones entre la
flavina y la uboquinona
D. Monóxido de carbono
Empiezan actuar con el hemo A3 de la citocromooxidasa impidiendo así la
interacción con el oxígeno
E. Annticimina A

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Esto empiezan a bloquear el paso de los electrones entre el citocromo B y el

citocromo C1
3. Que son los desacopladores de la fosforilación oxidativa. Ponga por lo
menos dos ejemplos.
Es la acción que consiste en disociar la oxidación presente en la cadena
respiratoria de la fosforilación. Bloquean la síntesis de ATP en el tiempo que
permite que continúe con el transporte electrónico que se desplaza a lo largo de
la cadena respiratoria hasta el O2
❖ Dinitrocresol
❖ Pentaclorofenol
4. BIBLIOGRAFÍA
• Ana Anzulovich, Ethelina Cargnelutti, Maria Plateo. (2019). Química
Biológica. 2021, de Universidad Nacional de San Luis Sitio web:
http://www.fqbf.unsl.edu.ar/documentos/mde/quimica/Qca_Biolo
gica.pdf
• Brenda Lopez, Flavia Perez, Alejandrina Montes, Juana Vidales,
Leticia Sanchez, Jose Bernal, Pedro Bautista, Eloy Zepeda. (2014).
Guía de Bioquímica Metabólica. México: ECORFAN.

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