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INSTITUTO TECNOLÓGICO DE TUXTLA GUTIÉRREZ

INGENIERÍA BIOQUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA DEL NITROGENO

PRÁCTICA N° 3: “EXTRACCIÓN DE ADN”

ALUMNO (A): TORRES TRINIDAD VICTORIA ANAHI FECHA: 22/11/18

RESUMEN

Se llevó acabo la extracción ADN vegetal presente en muestra de la hoja de Neem (Azadirachta indica). La extracción de ADN fue
hecha mediante el protocolo de extracción Dellaporta; llevando a cabo pasos para su correcta extracción y purificación de dicha
muestra: lisis celular (mecánica), eliminación de lípidos de la membrana, desnaturalización y remoción de proteínas, precipitación
de ADN (acción de isopropanol), purificación e hidratación.

PALABRAS CLAVES: Ácido desoxirribonucleico, Método Dellaporta,

INTRODUCCIÓN 7. Por último, eliminar el sobrenadante y secar el pellet.


El ADN está constituido por dos cadenas de nucleótidos unidas entre sí Resuspender en 500 µL de H2O destilada estéril.
formando una doble hélice. Los nucleótidos están integrados por un
azúcar (desoxirribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada (adenina, RESULTADOS
guanina, timina o citosina). La unión de los nucleótidos ocurre entre el
grupo fosfato y el azúcar, mediante enlaces fosfodiéster, dando lugar al
esqueleto de la molécula. Las bases de cadenas opuestas se unen
mediante puentes de hidrógeno y mantienen estable la estructura
helicoidal. El ADN se encuentra en el interior del núcleo de las células
eucariotas rodeado de proteínas (histonas) que lo mantienen unido y
compactado
La molécula de ADN consiste en dos cadenas que se enrollan
entre ellas para formar una estructura de doble hélice. Cada FIGURA 01. LISIS FIGURA 02. SEPARACION DE FIGURA 03. PRECIPITACION
cadena tiene una parte central formada por azucares CELULAR PROTEINAS Y IPIDOS DEL ADN
(desoxirribosa) y grupos fosfato. Enganchado a cada azúcar hay
una de las siguientes 4 bases: adenina (A), citocina (C), guanina DISCUSIÓN DE RESULTADOS
(G), y timina (T).(1) La extracción de ADN es una técnica que es utilizada desde
La información que define y codifica un carácter determinado se varias décadas atrás con el objetivo de estudiar y comprender el
denomina gen (Lewin 1995). (2) La extracción consiste en el proceso genómico y la herencia. La extracción consiste en el
aislamiento y purificación de moléculas de ADN y se basa en las aislamiento y purificación de moléculas de ADN y se basa en las
características fisicoquímicas de la molécula. Los pasos necesarios características fisicoquímicas de la molécula. Como se muestra
para una correcta extracción son: lisis celular, desnaturalización en la figura 02, donde se evidencia un paso fundamental en el
de las proteínas (histonas), precipitación y purificación. El ADN es proceso de obtención de ADN, la precipitación de proteínas y
insoluble en alcohol, por lo que se puede precipitar etanol frío o otros desechos.
isopropanol. En la figura 03 se logra observar un precipitado de tono blanco
Por lo anterior el objetivo de esta práctica fue conocer y aplicar un que, se cree existe la presencia de ADN.
protocolo que permita la extracción del ADN vegetal.
CONCLUSIÓN
METODOLOGÍA
La obtención de ADN integro y puro es una parte fundamental
De acuerdo al protocolo de Extracción Dellaporta:
para el buen desempeño de las técnicas utilizadas en biología
1. Colocar el tejido vegetal en un tubo Eppendorf.
molecular. La extracción de ADN requiere una serie de etapas.
2. Agregar buffer de extracción y posteriormente macerar el
El aislamiento de ADN permite el estudio, análisis y
tejido vigorosamente.
caracterización de esta biomolécula que su investigación tiene
3. Agitar en el vortex e incubar a 65°C por 10 minutos.
un impacto significativo, especialmente en diversos ámbitos
Después agregar 160 µL de acetato de potasio 5M (pH 4.5)
como la medicina, industria, etc.
4. Continuar con el centrifugado a 10,000 RPM por 10 minutos
y transferir el sobrenadante a un tubo Eppendorf nuevo.
BIBLIOGRAFÍA
5. Agregar 225 µL de Isopropanol (frío), agitar en el vortex y 1.Mathews,CK,V.Holde,Ke(2013).Bioquimica,proteínas.México,DF:Person
centrifugar por 10 minutos. Educación.
6. Eliminar el sobrenadante y lavar pellet con etanol al 70%. 2.Stryer L, Berg JM, Tymoczko JL (2003): “Bioquímica”, 5ª ed. Editorial
Centrifugar a 10,000 RPM por 5 minutos. Reverté (Barcelona, España), pp 152-154.
3.
Nelson DL, Cox MM (2001): “Principios de Bioquímica”, 3ª ed. Editorial
Omega (Barcelona, España), pp 1119-1128.

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