Evaluación del efecto de aceites esenciales en la inhibición del crecimiento
micelial de Penicilium digitatum en Citrus Limon
VALENTINA ARNES1, CAMILA JAQUE1, FRANCISCA SIMPSON1, BENJAMÍN
SERRANO1 & NICOLAS VIDAL1
1
Estudiantes de Ingeniería en Recursos Naturales Renovables, Facultad de Ciencias
Agronómicas, Universidad de Chile
INTRODUCCIÓN
Penicillium digitatum (moho verde), es
un hongo necrotrofo perteneciente a la
familia Trichocomaceae y, es conocido
por afectar principalmente a los frutos
cítricos, atacando el tejido vegetal de
estos a través de heridas producidas por
factores externos en la corteza del fruto
antes, durante o después de la cosecha
(Harries, 2013). La infección de P.
digitatum es capaz de expandirse
rápidamente en unas 24 a 36 horas;
siendo la presencia del micelio
blanquecino el mayor indicador de
desarrollo, que luego cuando la colonia
del patógeno comienza a esporular,
cambia a un color verde olivo (Delgado
& Pérez, 1997). El principal daño
causado por la presencia de P. digitatum
es la pérdida de consistencia en los
tejidos del fruto, que posteriormente
desencadena una pudrición blanda por
toda la fruta (Harries, 2013).
Por otra parte, Citrus limon es una
especie perteneciente a la familia
Rutaceae, es la tercera especie de cítricos
de importancia en el mundo, y en Chile
el cultivo de este se desarrolla
preferentemente entre la IV y VI Región,
siendo una actividad económica
importante en nuestro país que tiene
como principales destinos EE. UU,
Japón, Holanda, Corea del Sur, España,
Reino Unido e Italia (Muñoz, 2017).
Desde la cosecha hasta las manos del
consumidor, los limones pasan una
cantidad considerable de tiempo en
transporte y almacenamiento, donde se
pueden ver expuestos a patologías, las
cuales son la principal causa de pérdida
de calidad de los frutos (Soto et al.,
2018). Siendo el moho verde la
enfermedad post-cosecha más importante
de los limones, causante del 90% de la
pérdida de producción (Macarisin et al.,
2007). Esta enfermedad ha sido
controlada principalmente con fungicidas
sintéticos, pero como estos presentan
impactos negativos en la salud humana y
el medio ambiente (Holmes & Eckert,
1999), buscar alternativas menos dañinas
de origen vegetal ha ido en aumento,
específicamente la investigación de
aceites esenciales, los cuales son
compuestos naturales complejos
conocidos por sus propiedades
antimicrobianas, antioxidantes y
medicinales (Gandarilla et al., 2020),
siendo estos una buena alternativa para
tratamientos antifúngicos postcosecha.
Entre las ventajas que se pueden
encontrar en la utilización de aceites
esenciales, es que pueden ser aplicados
sobre cualquier alimento, y suelen ser
sustancias seguras para el consumo
humano. (Kabara, 1991, como se citó en
Velázquez M, et al. 2014).
Por lo expuesto anteriormente, este
estudio tiene como interés comparar los
efectos que los aceites esenciales de
hinojo y canela producen en el desarrollo
de la actividad micelial de P. digitatum,
estableciéndose como hipótesis que los
aceites esenciales respectivos tienen un
efecto inhibidor del crecimiento del
hongo en los limones de las medias de
los tratamientos.
MATERIALES Y MÉTODOS
Área de estudio
El área de estudio corresponde al
laboratorio de Fitopatología de
Postcosecha, en el Campus Sur de la
Universidad de Chile (-33.570217,-
70.631926), bajo condiciones de
temperatura ambiente, a exposiciones de
luz controladas.
Por otra parte, los aceites esenciales a
evaluar fueron Foeniculum vulgare
(hinojo) y Cinnamomum zeylanicum
(canela).
Metodología
Las unidades experimentales de esta
investigación se seleccionaron a partir de
un individuo de citrus limón, de manera
aleatoria.
Al mismo tiempo, se extrajo la cepa de
P. digitatum a partir de un individuo
contaminado, que se desinfectó a través
de un lavado y desinfección con agua
destilada durante 5 minutos. Una vez
desinfectado, se extrajo la muestra y se
depositó en una placa Petri, durante 4
días. Posteriormente, la muestra del
hongo fue inoculada a las unidades
experimentales (12), en el mismo lapso, a
través un corte de 10 mm en la superficie
del fruto para favorecer la propagación
del micelio. Tras la inoculación, se
estableció un periodo de 3 días para
confirmar que cada individuo expresara
el desarrollo micelial o colonización.
Con la confirmación de la presencia del
hongo en las 12 unidades experimentales,
se seleccionaron 4 individuos al azar a
los cuales se les aplicó el tratamiento 1,
el que consiste en aplicar 1 ml de aceite
esencial de hinojo, a través de gotas en la
superficie cada individuo, obteniendo 4
repeticiones de este efecto. Se realizó el
mismo procedimiento para el tratamiento
2, aplicando aceite esencial de canela.
Por último, a los 4 individuos restantes
no se les aplicó ningún tratamiento,
estableciéndose el tratamiento control del
experimento.
El conjunto de las muestras fue sometido
en 2 cajas (38x26x13), con 2 repeticiones
por cada tratamiento, con una
distribución espacial aleatoria, bajo las
mismas condiciones durante un periodo
de 4 semanas con observaciones fijas los
lunes, miércoles y viernes. Dichas
observaciones fueron registradas en una
tabla.
Finalmente, el experimento culminó
luego de las 4 semanas, midiendo el
incremento de la superficie colonizada
por el hongo en las 12 unidades
experimentales.
Análisis estadístico
Con los datos obtenidos se realizó un
análisis estadístico en la herramienta
RStudio, para detectar las diferencias de
las medias de los tratamientos, y evaluar
si estas son estadísticamente
significativas, mediante un modelo de
clasificación. En primer lugar, se
calcularon las medias obtenidas de cada
uno de los tratamientos, la media general
de todos ellos, y la varianza de los datos.
Para comprobar que los supuestos del
modelo se cumplieran, primeramente, se
verificó que las unidades experimentales
fueran homogéneas, y que la repartición
de los tratamientos fuera aleatoria.
Posteriormente, se evaluó la
homogeneidad de varianza de los
tratamientos, a través del test Levene, y
se comprobó la normalidad de la
distribución de los datos mediante el test
estadístico Shapiro-Wilk. Dichas pruebas
se realizaron con un nivel de
significancia del 95% (p-valor= 0,05),
para asegurar la veracidad de los
resultados. Una vez verificados los
supuestos, se compararon las medias de
los tratamientos a través del test de
ANOVA. Finalmente, se realizaron
pruebas de comparaciones múltiples
mediante el método de Tukey para
indagar sobre la naturaleza de las
diferencias encontradas entre pares de
tratamientos.
De esta forma, se plantea la hipótesis
nula y alternativa:
H0= No hay diferencia en las medias de
los tratamientos.
Ha = Al menos 1 de los tratamientos tiene
una media diferente a la media general.
BIBLIOGRAFÍA (2007) Penicillium digitatum
suppresses production of
DELGADO R & G PEREZ (1997)
hydrogen peroxide in host tissue
Características biológicas de
during infection of citrus fruit.
Penicillium digitatum, P. italicum
Phytopathology 97:1491-1500.
Y P.ulaiense en postcosecha de
MUÑOZ M (2017) Boletín fruta fresca.
citrus. Tesis de Licenciatura,
ODEPA, Ministerio de
Facultad de Agronomía,
Agricultura, Gobierno de Chile.
Universidad de la República,
SOTO F, C TRAMÓN, P AQUEVEQUE
Montevideo, Uruguay. 74 pp.
& J BRUJÍN (2018)
GANDARILLA F, S TORRES, E
Microorganismos antagonistas
LUNA, I QUINTERO & N
que inhiben el desarrollo de
ARROLLO (2020) Efectos
patógenos en post-cosecha de
inhibitorio de aceites esenciales
limones (Citrus limon L.) Chilean
en el micelial de Penicillium
J. Agric. Anim. Sci., ex Agro-
digitatum aislado de naranja
Ciencia (2018) 34(2):173-184.
dulce (Citrus sinensis OSBECK).
VELÁSQUEZ M, R ÁLVAREZ, P
Agrociencia 54: 209-225.
TAMAYO & C CARVALHO
HARRIES EM (2013) “Identificación y
(2014) Evaluación in vitro de la
caracterización funcional de
actividad fungistática del aceite
genes PMT relacionados con la
esencial de mandarina sobre el
glicosilación de proteínas en el
crecimiento de Penicillium sp.
hongo patógeno de frutos cítricos
Corpoica. Ciencia y Tecnología
Penicillium digitatum”.
Agropecuaria 15:14-17.
Doctorado en ciencias de los
alimentos, Facultad de Farmacia,
Universidad de Valencia,
Valencia, España. 289 pp.
HOLMES G & J ECKERT (1999)
Sensitivity of Penicillium
digitatum and P. italicum to
postharvest citrus fungicides in
California. Phyto-pathology
89:716-721.
MACARASIN D, L COHEN, A EICK,
G RAFAEL, E BELAUSOV, M
WISNIEWSKI & S DROBY