Procedimiento de examen: Cultivo de absceso

1. PROPÓSITO DE EXAMEN

Indicar los lineamientos a seguir para aislar, identificar y realizar pruebas de

sensibilidad a microorganismos aerobios involucrados en la formación de un
absceso.

2. PRINCIPIO Y MÉTODO DEL PROCEDIMIENTO

Uno de los indicadores fundamentales de la sepsis local es la acumulación de pus

dentro de un absceso o que exuda desde una fístula o de una superficie
mucocutánea, Las heridas internas y los abscesos pueden asociarse con
apendicitis, colecistitis, celulitis, infecciones dentales, osteomielitis, empiema, artritis
séptica, sinusitis u otras infecciones internas.
Este procedimiento se realiza inoculando el material biológico en medios de cultivo
enriquecido, selectivo y diferencial, e incubarlo de 18 a 24 horas a una temperatura
de 36 ± 1.0°C, con el propósito de realizar la búsqueda de microorganismos
aerobios involucrados en la formación de un absceso.

Se considera absceso a toda lesión cerrada de origen infeccioso, con contenido en

su interior y se manifiesta por la presencia de signos inflamatorios.

3. CARACTERÍSTICAS DE DESEMPEÑO

Sensibilidad

Especificidad

4. MATRIZ

Secreción absceso.
Si no se puede obtener el material con una aguja y una jeringa, se puede tomar
muestra en hisopo.
5. PREPARACIÓN DEL PACIENTE:

Tomar la muestra antes de iniciar el tratamiento de antibiótico.

El sitio del cual se tomará la muestra para cultivo debe descontaminarse primero
con jabón para cirugía y etanol al 70%, luego de lo cual se realiza un lavado con
solución fisiológica estéril y se seca.

6. TIPO DE CONTENEDOR Y ADITIVOS

Medio de transporte Amies o Stuart.

Secreción en jeringa estéril
Medios de cultivo líquidos (caldo de tetrationato, teoglicolato, infusión cerebro-
corazon)

7. EQUIPO Y REACTIVOS REQUERIDOS

- Incubadora con termostato que pueda ser mantenido a 36 ± 1.0°C, provista con
termómetro calibrado.
- Esterilizador de asas eléctrico.
- Campana de bioseguridad.
- Walk Away 96 SI.
-Prompt Sistema de inoculación
- Paneles MicroScan
- Asa de platino o nicromel de aproximadamente 3 mm de diámetro.
- Agar sangre de carnero
- Agar Chocolate

8. CONTROL AMBIENTAL Y DE SEGURIDAD

Se deben de revisar de manera diaria los intervalos de temperatura y humedad

anotando los valores en el registro correspondiente (R-5.2-010) y verificando de
esta forma que se encuentren dentro de los valores marcados.
 Refiérase al Manual de seguridad e higiene (M-5.2-001).

Todo el material de referencia y las muestras de pacientes deben considerarse

material de riesgo biológico y manipularse con precaución.

Los residuos contienen restos de muestras y reactivos; trátelos y deshágase de

ellos según las normas de seguridad de laboratorio.

9. CALIBRACIÓN (Trazabilidad metrológica)

Referencia al certificado de cepas ATCC

10. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

1. Se revisan las muestras y cotejarlas con la solicitud de envío y recibirlas por

código de barras en el sistema Modulab

2. Registrar las muestras que llegan en el día, utilizando el registro de Ingreso de

secreciones diversas, R-5.5-005

3. Realizar una Tinción de Gram a la secreción utilizando el procedimiento de la

Tinción de Gram, P-5.5-468.

Los medios de cultivo para el aislamiento deben estar a temperatura ambiente antes
de la inoculación y no deben estar húmedos o secos en exceso.

4. Rotular las placas a utilizar con el número de folio de la muestra y estudio, en la

base de esta. Inocular las placas en el siguiente orden y con las siguientes
indicaciones:

- Agar sangre de carnero

- Agar Chocolate
- En caso muestras líquidas, en medios líquidos en uso.
5. Dentro de la campana de bioseguridad y bajo condiciones de esterilidad,
realizar un inoculo primario girando el hisopo en la superficie de la placa de
agar y sembrar con la técnica de estría cruzada (Figura 1).

Figura 1. Técnica de inoculación y estría cruzada.

6. Colocar las placas dentro de la incubadora con el medio invertido.

Incubar de 18 a 24 horas a una temperatura de 36 ± 1.0°C.

7. En el caso de un resultado positivo a desarrollo, se valora el crecimiento de

microorganimos considerados esencialmente patógenos como straphylococcus
aureus, stafilococos coagulasa negativa, enterococcos en cultivo puro,
streptococcus pyogenes, así como enterobacterias y pseudomonas aeruginosa.

8. A cada una de las morfologías coloniales diferentes (preferentemente aislada y

tomando en cuenta que algunas colonias poseen características morfológicas
diferentes dependiendo del medio de cultivo utilizado), realizar el procedimiento
de Tinción de Gram, P-5.5-468, la prueba de oxidasa y la prueba de catalasa
(Instructivo I-5.6 -001.).
 9. Anotar los resultados en la hoja de registro utilizando las siglas BGN (Bacilos
Gram Negativos) BGP (Bacilos Gram Positivos) CGP (Cocos Gram Positivos)
CGN (Cocos Gram Negativos), y los resultados de las pruebas primarias.

10. Tras haber realizado estas pruebas, el analista puede orientarse bajo los
criterios de Cowan y Steel, y seleccionar el panel adecuado para cada una de
las colonias aisladas, de acuerdo a la siguiente tabla:

Tabla1. Elección del panel para identificación y/o sensibilidad antimicrobiana.

Manual de uso
Panel Uso sugerido
(documento externo)
Determinar la sensibilidad a agentes antimicrobianos
Manual de procedimiento para
NC68 y la identificación a nivel de especie de bacilos gram
gram negativo deshidratado
negativos aerobios y anaerobios facultativos.
Determinar la sensibilidad a agentes antimicrobianos
y la identificación a nivel de especie de cocos gram Manual de procedimiento para
PC33 positivos aerobios y facultativos de rápido Panel Gram Positivo
crecimiento, algunos cocos gram positivos aerobios Deshidratado
exigentes y de Listeria monocytogenes.
Determinar cuantitativa y/o cualitativa de la
sensibilidad a los antimicrobianos frente a colonias Panel manual de
MICroSTREP
obtenidas de crecimiento en medio sólidos de procedimiento y CC
plus®
estreptococos aerobios, incluyendo Streptococcus MICroSTREP plus®
pneumoniae.

Seleccionado el panel, registrar los folios en el Ingreso a Walk Away R.-5.5-003 con
número de cultivo asignado por el Sistema Modulab, proceder conforme al manual
correspondiente de cada panel meterlo en el equipo Walk Away 96 SI, siguiendo las
instrucciones del Manual de aplicaciones Microscan® (documento externo).

11. Los resultados se envían al sistema Modulab por medio de la interface. Solo las
personas del área de microbiología capacitadas podrán capturar resultados del
 área. El reporte final que emite el equipo Walk Away 96 SI. Contiene el nombre
del microorganismo y antibiograma por CMI (mg/L).

12. En el caso de que el resultado sea negativo a desarrollo, reportar de la

siguiente manera:
 Microorganismo aislado: Sin desarrollo

11. CONTROL DE CALIDAD

Refiérase al Plan de calidad (A-5.6-002)

Panel Gram Negativos Panel Gram positivas

 Pueden observarse CIM elevadas a  No deben utilizarse para determinar la

antimicrobianos betalactamicos, si sensibilidad de las cepas de
se inoculan excesivamente los estreptococos, excepto S. agalactiae
paneles con microorganismos tales (grupo B) y el grupo S. bovis. Estas cepas
como Pseudomonas aeruginosa, se deben analizar mediante un método
Serratia spp., Proteus spp., aceptado como los paneles MICroStrep
Morganella spp y Providencia spp.  Se puede utilizar para identificar
 Algunas cepas mucoides de estreptococos exigentes. Si existe un
microorganismos como Klebsiella crecimiento inadecuado en el pocillo de
spp o Pseudomonas spp puede que crecimiento, los resultados bioquímicos
no se adhieran a la varilla de no serán válidos y se deberá emplear un
Prompt cuando se intenta recoger método alternativo.
la colonia, esto se podrá observar  Se puede producir ligera nebulosidad en
visualmente. pocillos aleatorios de algunos
antimicrobianos debido a la solubilidad
incompleta de algunos constituyentes de
medios. Esto no debe interpretarse como
crecimiento.
12. INTERFERENCIAS Y REACCIONES CRUZADAS
 NOTA: Para limitaciones más específicas a la interpretación revisar Manual de
procedimientos de Gram-Negativos y Gram-Positivos deshidratados (Documento
Externo)

13. PRINCIPIO DEL CÁLCULO DE RESULTADOS E INCERTIDUMBRE DE LA

MEDICIÓN

No Aplica ya que es una prueba cualitativa.

14. INTERVALOS BIOLÓGICOS DE REFERENCIA

Potenciales patógenos Straphylococcus aureus, Stafilococos coagulasa negativa,

Enterococcus en cultivo puro, Streptococcus pyogenes, así como cualquier
Enterobacterias y Pseudomonas aeruginosa.

15. INTERVALO VALIDO PARA INFORMAR LOS RESULTADOS DE LOS

EXAMENES.

Género y especie del microorganismo aislado, más su antibiograma con

interpretación.

16. INSTRUCCIONES PARA DETERMINAR RESULTADOS CUANTITATIVOS

CUANDO UN RESULTADO NO ESTA DENTRO DEL INTERVALO DE MEDIDA.

No aplica ya que la prueba es cualitativa.

17. VALORES DE ALERTA/CRÍTICOS

No determinado

18. INTERPRETACIÓN POR EL LABORATORIO

 Los principales agentes etiológicos son estafilococos y estreptococos, pero en
ciertas situaciones pueden estar involucrados bacilos gramnegativos y bacterias
anaerobias.
Se valorará el crecimiento de microbiota habitual, dependiendo el lugar de origen de
la muestra.
19. FUENTES POTENCIALES DE VARIABILIDAD
Temperatura: 15 -30°C
Humedad Relativa: 30 – 85%
Voltaje: Unidad principal 100 – 240 V

20. REFERENCIAS

- Koneman E.W. Diagnóstico Microbiológico: Texto y Atlas En Color, Sexta

edición. Editorial Médica Panamericana. 2008.
- A guide to Specimen Management in Clinical Microbiology. Miller JM. American
Society for Microbiology, Wahington, 1999. 1a. edición.
- Manual of Clinical Microbiology. Murray PR, Baron EJ, Pfaller MA, Tenover FC y
Yolken RH, editors. American Society for Microbiology, Washington, 1999. 7a.
edición