NOMBRE DE FUNCIÓN CARACTERÍSTICAS Y PROCESO DE LA VENTAJAS Y EJEMPLO

LA TÉCNICA ESPECIFICACIONES DESVENTAJAS

TÉCNICA
SECUENCI Secuencia  Diseñado El ADN diana se VENTAJAS Inmunoprecipitaci
ACIÓN por ligación para la ajusta a un tamaño  Resuelve de ón de cromatina
POR de octámeros resecuenciaci específico mediante forma más (ChIP) para
LIGACIÓN marcados de on de la ligación de fiable las determinar los
secuencia genomas ya adaptadores en los regiones sitios de unión de
conocida a la conocidos o extremos de los homopolimér factores de
cadena de para estudiar fragmentos icas. transcripción
ADN, con la la expresión resultantes.  Es más además de
posterior de los 1. Las sondas barata. interacciones
detección de transcritos. codifican una o dos  Secuencia el proteína-ADN.
la señal  Capaz de bases conocidas, lo ADN sin
fluorescente producir que permite la unión necesidad
emitida tras gigabases complementaria de de clonarlo
cada ligación; (109) por la sonda al molde. primero.
se aprovecha carrera. 2. El fragmento de  La precisión
la  Se amplifica anclaje codifica una es alta.
sensibilidad clonalmente secuencia
al desajuste en una complementaria a DESVENTAJAS
de la ADN superficie una secuencia  No es capaz
ligasa para sólida. adaptadora e inicia de generar
determinar la  Plataformas la ligadura. lecturas
secuencia de 3. Después de la superiores a
subyacente secuenciación ligadura, se crea las 75
de de próxima una imagen de la bases.
nucleótidos generación plantilla para  Alta tasa de
en una (NGS): identificar la base o error.
secuencia de -SOLid bases conocidas en
ADN -Complete la sonda
determinada. Genomics 4. Un nuevo ciclo
Utilizan trifosfatos comienza después
de de eliminar el
desoxinucleotidos complejo ancla-
(dNTP). sonda o eliminar el
fluoróforo por un
evento de escisión y
restaurar el sitio de
ligadura.

SECUENCI Tipo de  Alternativa Genera una cadena VENTAJAS Caracterización

ACIÓN método mejorada del larga de ADN a  Utiliza molecular de las
AUTOMÁTI enzimático método de partir de una nuevas enfermedades
CA que consiste Sanger. secuencia diana polimerasas, raras
en la  Se mezclan 2 (plantilla o molde más Proporciona un
interrupción tipos de (“template”)). eficiente y diagnóstico
controlada de nucleótidos La plantilla de ADN de mayor definitivo y
la replicación libres: se combina con un procesividad sugiere nuevas
del ADN in cebador de ADN (sequenasas opciones de
vitro, basado Desoxinucleótid (“primer”), el enzima ). tratamiento.
en marcar el o (dNTP) (A, G, ADN polimerasa I  Genera
oligo cebador C, T) (ADN Pol I), y una secuencias
o los Los añade el mezcla de dos tipos largas para
terminadores ADN polimerasa I de nucleótidos la lectura
con un y permite formar libres, (500-800pb).
compuesto la cadena desoxinucleótidos  Cada ddNTP
fluorescente complementaria (dNTP) y se marca
y activar la de ADN. didesoxinucleótido con
reacción de s (ddNTPs). fluorescente
secuencia. Didesoxinucleót Durante la reacción diferente,
Los ido (ddNTP) de secuenciación, el permitiendo
productos de Permite parar la ADN Pol I utiliza la su
la reacción se actividad de la plantilla de ADN y individualida
detectan ADN polimerasa añade dNTPs al d al
directamente por la falta de un cebador para formar momento de
durante la grupo 3’ hidroxilo. una cadena la lectura.
electroforésis complementaria de
al pasar por ADN. De vez en
delante de un cuando, la ADN Pol
láser que al I añadirá un ddNTP
excitar los en la cadena de
fluoróforos ADN, terminando la
permite reacción. Esta
detectar la terminación final es
fluorescencia debido a la falta de
emitida. un grupo 3' hidroxilo
en los ddNTPs por
lo que es imposible
para la polimerasa
para añadir otro
nucleótido en el
extremo de la
hebra.
Por lo tanto, el
resultado de la
reacción es una
serie de fragmentos
de ADN de
diferentes tamaños
que se pueden
separar por
electroforesis
capilar.
 Es importante
destacar que cada
ddNTP está unido a
un marcador
fluorescente
diferente,
permitiendo que la
fluorescencia de
cada cadena de
ADN individual
pueda ser "leída"
por un láser.
Los cuatro colores
fluorescentes
diferentes de los
ddNTP se detectan
automáticamente y
la intensidad de
fluorescencia se
traduce en un "pico"
de datos que
representa el orden
de los nucleótidos
en la plantilla de
ADN.
SECUENCI Detección de Cuando hay un Contienen VENTAJAS CÁNCER
ACIÓN mutaciones efecto conocido cebadores o sondas  Diseño Analizar una
DIRIGIDA en un grupo de ciertos tipos para un grupo optimizado, muestra de
reducido de de cambios en conocido de genes el cual biopsia de tejido
genes o en uno o más genes, y permiten la permite la de un melanoma
regiones no la secuenciación secuenciación secuenciació para determinar
codificantes de estos genes dirigida a una n de los si las células
puede ayudar a determinada genes de tienen o no una
guiar la atención patología. Existe un interés con mutación en el
médica para gran número de una gran gen BRAF. Se
detectar solo paneles cobertura y encuentra una
estos cambios comerciales, profundidad mutación en
conocidos. aunque también se de lectura. BRAF en más del
pueden diseñar «a  Análisis 50% de los
la carta». Permiten rápido y melanomas, y las
secuenciar fiable. personas con
mutaciones  Detecta melanoma
conocidas (hot variantes de avanzado que
spots), genes muy baja tienen
completos, detectar frecuencia. mutaciones
variaciones en el  Da BRAF pueden
número de copias y responder a los
translocaciones. tratamientos medicamentos
personalizad que atacan estas
os, por mutaciones, un
consecuente tratamiento
, con denominado
mejores terapia dirigida
resultados. contra el cáncer.

DESVENTAJAS
 Al estar
dirigidos a
regiones
conocidas,
no permiten
descubrir
nuevos
genes.